适配体识别-化学发光技术检测福氏志贺菌

福氏志贺菌(Shigella flexneri)是一种危害人类健康的食源性致病菌。该实验首先制备鲁米诺功能化花状纳米金和氨基化磁性纳米Fe_(3)O_(4),然后将福氏志贺菌适配体的互补序列(FSZ-2HH)连接在鲁米诺功能化花状纳米金的表面构建信号探针,并将福氏志贺菌适配体(FSZ-1)通过亲和素的桥接作用修饰到氨基化磁性纳米Fe_(3)O_(4)表面构建捕获探针。当目标物存在时,目标物和信号探针会竞争性结合捕获探针,进而通过测定化学发光来达到检测目的。实验结果表明:在浓度2.6×10~2.6×10^(5) CFU/mL,福氏志贺菌的浓度与化学发光强度呈良好的线性关系,检出限为12 CFU/mL,特异性良好。该实验建立的方法为食品中福氏志贺菌的快速高灵敏检测提供了良好思路。

一起由福氏志贺菌4c亚型和X变种混合感染所致的菌痢暴发调查

目的调查本次疫情的原因及病原。方法制定调查表对患者进行流行病学调查,对食堂从业人员、患者粪便标本和食堂内环境物表涂抹标本进行常见肠道致病菌培养,分离的菌株进行鉴定和药敏试验。结果2005年8月29日至2005年9月2日,在萧山区某企业510名员工中累积发病39例,罹患率为7.65%。对13名患病员工进行粪便培养,检出福氏4c(F4c)志贺菌9例,检出率为69.23%,其中2例患者标本中同时检出福氏志贺菌X变种(Fx);食堂内环境物表涂抹标本18件,从切配间菜刀物表涂抹标本中检出F4c志贺菌1株,检出率为5.56%。12株志贺菌对多西环素、阿米卡星、庆大霉素、头孢曲松、头孢唑啉等均敏感。结论本次疫情为一起由F4c和Fx混合感染所致的食源性菌痢暴发流行。

福氏2c(新菌型)和福氏2a志贺菌生物学关系实验研究

目的:研究福氏志贺菌2c与2a之间的生物学关系。了解新菌型的生物学特性。方法:对前述2株菌进行生化试验、噬菌体裂解试验、药物敏感试验和血清凝集试验。结果: 2株菌的生化反应、噬菌体裂解模式均相同。福氏志贺菌2c同时含有群抗原3, 4和7,对乙基西羧霉素、庆大霉素、卡那霉素耐药,而福氏志贺菌2a则对以上3种药物敏感。结论:新发现的福氏志贺菌2c与福氏志贺菌2a在药物敏感性上存在较大的差异。

药物对福氏志贺氏菌代谢抑制的微量热法研究

Bacterial growth thermograms of fungistatic action using a thermal activity monitor have been determined. The growth rate constants at different concentration drugs and the critical growth concentrations of the drug have also been calculated.

豪猪源福氏志贺菌的分离鉴定及喹诺酮类耐药基因检测

为调查四川省某规模化豪猪养殖场中豪猪大面积腹泻死亡的原因,本研究采集病死豪猪的肠道内容物和肺脏等病料样品进行细菌的分离纯化,通过培养特性观察、革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因的克隆测序进行鉴定,并对分离菌株进行致病性、耐药性分析,对其喹诺酮类耐药基因进行PCR检测并测序分析。结果显示,分离得到1株革兰阴性菌,该分离株符合福氏志贺菌的培养特性和生化特性,并且其16S rRNA基因序列与福氏志贺菌该基因序列的同源性为99%;对小鼠具有较强致病性;药敏试验结果显示分离株具有多重耐药性,仅对丁胺卡那敏感,对喹诺酮类、四环素类、头孢类、氨基糖苷类、青霉素类和氯霉素类药物均表现为耐药;分离株的DNA促旋酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ的喹诺酮耐药决定区均有突变,且携带有质粒介导的喹诺酮耐药基因qnr A和qnr S。本研究是国内首次关于豪猪源福氏志贺菌病的报道,为豪猪养殖中该细菌性疾病的诊断防治等相关研究提供参考。

免疫磁分离及免疫比浊分析对福氏志贺菌的自动快速定量检测

目的以SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌分别与福氏志贺菌的多抗血清结合,制备福氏志贺菌特异的多抗磁珠和抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂,利用免疫比浊分析探索其在福氏志贺菌自动快速定量检测中的初步应用。方法福氏志贺菌F1a免疫日本大耳白兔制备多抗血清,磁珠包被SPA后再与多抗偶联,制成多抗免疫磁珠。以该磁珠捕获模拟标本的福氏志贺菌,接种MH平板37℃培养18～24h,菌落计数后计算免疫磁珠的特异富集作用。富含SPA的金黄色葡萄球菌(No1800株)经甲醛灭活后,与福氏志贺菌的多抗血清结合,制备特异抗体致敏的金黄色葡萄球菌,作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫比浊试剂,在日立7060全自动生化分析仪编制程序进行自动检测并进行初步的方法学评价。结果福氏志贺菌F1a免疫日本大耳白兔获得了高质量的多抗血清,特异性好,凝集效价达1∶320;制备多抗免疫磁珠对福氏志贺菌具有一定的富集作用,菌落计数显示磁珠处理的细菌捕获效率约为30%;抗体致敏的金黄色葡萄球菌,作为协同凝集试剂和自动定量检测的免疫比浊试剂,在玻片上能与待测福氏志贺菌产生明显的凝集现象,在日立7060全自动生化分析仪上定量检测灵敏、特异、线性良好。结论以福氏志贺菌的多抗血清分别致敏SPA包被的磁珠和富含SPA的金黄色葡萄球菌,制备特异的多抗磁珠对福氏志贺菌有一定的特异捕获与富集作用,抗体致敏的金黄色葡萄球菌作为协同凝集试剂与免疫比浊试剂对福氏志贺菌的自动、快速、定量检测具有较好的效果,为病原菌的快速诊断和自动定量分析提供了新的思路。

不同施肥处理对福氏紫薇粗生长和冠幅的影响

采用L9(34)正交试验设计,研究了田间栽培条件下,不同氮、磷、钾施肥水平对福氏紫薇粗生长和冠幅的影响。结果表明:(1)施肥处理组合8对福氏紫薇胸径和地径生长效果最好。该处理下,5年生福氏紫薇扦插苗胸径达到4.33 cm,生长量为2.33 cm;地径达到7.72 cm,生长量为4.94 cm。(2)处理组合7最有利于福氏紫薇米径和冠幅生长。该处理下,米径达到5.16 cm,生长量为2.83 cm;冠幅达到2.79 m,生长量为1.29 m。(3)不同的氮、磷、钾施肥水平对福氏紫薇粗生长量的影响效应大小为氮>磷>钾,对福氏紫薇冠幅生长的影响效应大小为氮>钾>磷。根据粗生长综合指标和冠幅k值分析,确定最有利于福氏紫薇粗生长和冠幅生长的氮、磷、钾施用量分别为300 g/株、100 g/株和100 g/株。

儿童福氏志贺菌TEM型β内酰胺酶耐药基因及其耐药性检测

目的了解儿童福氏志贺菌是否存在TEM基因及其发生率以及对耐药性的影响。方法对2004年6—11月从本院细菌性腹泻患儿粪便培养标本分离到的福氏志贺氏菌共51株,进行β内酰胺酶TEM全长基因PCR检测;用K-B法测定志贺菌对7种抗菌药物的敏感度。结果51株福氏志贺菌中17株检出TEM基因,阳性率33.3%;志贺菌对氨苄西林的耐药率高,其中TEM基因阳性志贺菌的耐药率为88.2%、TEM基因阴性志贺菌的耐药率为82.4%;对氨苄西林-舒巴坦也有一定的耐药,TEM基因阳性志贺菌、TEM基因阴性志贺菌的耐药率分别为41.2%、20.6%。结论从福氏志贺菌检出TEM型β内酰胺酶耐药基因,携带率为33.3%。

江苏省福氏4c志贺菌病原特性及毒力基因检测

目的了解江苏省福氏4c志贺菌生化特征、对抗生素耐药性及毒力基因携带情况。方法采用国际金标准细菌鉴定(API)试剂条进行生化鉴定,用玻片凝集法进行血清分型,细菌药物敏感试验纸片扩散(K-B)法检测对抗生素的耐药性,聚合酶链反应(PCR)扩增ipaH、set1、sen和ial4种毒力基因。结果福氏4c志贺菌发酵葡萄糖、甘露醇,41.0%菌株发酵阿拉伯糖。对阿莫西林/棒酸和萘啶酸耐药率高达100.0%,氨苄西林、四环素和复方新诺明耐药率为89.7%;79.5%菌株耐受一半以上抗生素。ipaH、set1、sen、ial毒力基因携带率分别为100.0%、100.0%、92.3%和92.3%,92.3%(36/39)菌株携带全部4种毒力基因。结论福氏4c志贺菌多重耐药情况较为严重,敏感药物有庆大霉素、头孢类药物和诺氟沙星。菌株毒力基因携带率高,具有较强的致病性。

福氏志贺菌IgY的抑菌作用

目的探讨口服福氏志贺菌IgY在动物体内的抑菌作用。方法以福氏志贺菌制备免疫原,免疫母鸡,收集鸡蛋,提取IgY。以不同剂量的IgY口服免疫6日龄乳鼠,并分别以不同剂量的福氏志贺菌于不同时间攻击,观察体内抑菌作用。结果攻菌前口服特异性IgY的乳鼠,其直肠内分离菌的百分率明显低于攻击后口服IgY的乳鼠。抑菌作用随着口服IgY剂量的减少和攻菌量的增加而降低。口服大于3mg/只的特异性IgY,可使肠内特异菌减少50%以上。口服4mg/只可抵御10亿菌的攻击。结论福氏志贺菌特异性IgY可有效抑制该菌在乳鼠肠内的繁殖。

一种罕见的福氏志贺菌4c型流行菌株的鉴定分析

目的鉴定、分析新出现的福氏志贺菌4型流行菌株的表型和DNA型别特征。方法在部分测试典型菌株用生化、血清型别及药敏试验等的基础上结合R iboprinter DNA指纹图谱分析系统(RP)来分析鉴定测试菌。结果该类菌株表型符合志贺菌定义,血清学分型为福氏志贺菌4 c型(F4 c,Ⅳ:7,8);限制性内切酶EcoRⅠ的酶谱与RP数据库中志贺菌一致,PvuⅡ的酶切结果发现,参考菌株中有1株F2b地方株与F4 c酶谱一致。结论福氏志贺菌4 c型可能是F2b的溶源性变异菌株。应用RP双酶切福氏志贺菌具有分子鉴定和分子分型的作用。

量子点免疫标记法检测福氏志贺氏菌

研究基于抗原抗体反应捕获目标菌,结合生物素与亲和素间的特异性相互作用,联合免疫纳米磁珠磁性分离、免疫量子点荧光标记技术,运用荧光检测系统,建立了福氏志贺氏菌的定量检测模型。结果表明,福氏志贺氏菌菌浓度为102CFU/mL^105CFU/mL,相对荧光强度与菌浓度关系为FI=12.78lgN+15.941,呈良好的线性关系,决定系数R2=0.9761。进一步对模型的准确度和精确度进行验证,得到菌落浓度预测值与真实值差异小,检测相对标准偏差为1.8%,表明模型的准确度好,精密度高。该方法可简单、快速(2h)、高效地检测福氏志贺氏菌。

喹诺酮类耐药福氏志贺菌的质粒介导耐药机制研究

目的研究萘啶酸耐药的福氏志贺菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac(6')-Ib-cr的流行状况。方法收集我院2002-2011年腹泻患者大便标本分离出的福氏志贺菌,用纸片扩散法测定13种抗菌药物的敏感性,筛选出存活的82株萘啶酸耐药的野生株。采用PCR方法检测菌株的qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac(6')-Ib-cr耐药基因,对PCR阳性产物进行测序确定基因型别。结果 82株萘啶酸耐药的福氏志贺株以F2a最为常见,占47.56%,对其他多种抗生素存在耐药,耐药率分别为氨苄西林95.12%、哌拉西林18.29%、头孢噻肟12.20%、头孢曲松12.20%、头孢吡肟7.50%、环丙沙星53.66%、氧氟沙星37.80%、诺氟沙星36.59%、左氧氟沙星26.83%、头孢美唑4.00%、氯霉素40.24%、复方磺胺甲恶唑77.50%和磷霉素6.10%。共检测到质粒介导耐药基因的细菌13株(15.85%),3株携带qnrB基因均为qnrB6型;8株携带qnrS基因均为qnrS1型;7株携带aac(6')-Ib-cr基因,其中有5株同时携带qnrB和aac(6')-Ib-cr。结论本地区福氏志贺菌临床分离株对喹诺酮类抗菌药物耐药较严重,存在质粒介导的耐药机制,应加强监测。

福氏2a志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因分型在菌痢快速诊断中的应用

目的对福氏2a志贺菌肠毒素ShET1(Shigellaenterotoxin1)和肠毒素ShET2(Shigellaenterotoxin2)进行基因分型,提高菌痢爆发流行时同源克隆的鉴定分析水平。方法对93株分离自不同地区,不同时间的福氏2a志贺菌用PCR法检测志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因,进行基因分型和同源克隆鉴定。结果93株福氏2a志贺菌按志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因可分为4种基因型,即12株ShET1(-)/ShET2(+),14株ShET1(+)/ShET2(-),59株ShET1(+)/ShET2(+),8株ShET1(-)/ShET2(-)。93株福氏2a志贺菌ShET1检出率为89.24%(83/93),ShET2为65.59%(61/93)。二者至少有一种基因被检出的检出率为91.39%(85/93)。结论福氏2a志贺菌的快速诊断可应用ShET1、ShET2双基因PCR检测,具有较高的敏感性与特异性。在应用多生物学标志进行福氏2a志贺菌同源克隆鉴定系统研究时,肠毒素ShET1/ShET2基因PCR分析是不可或缺的分析指标。

福氏志贺菌感染豚鼠和HeLa细胞的毒力

目的 研究福氏志贺菌感染豚鼠和HeLa细胞后细菌致病能力的差异 ,探讨痢疾的防治。方法 选用 2 8株福氏志贺菌感染豚鼠眼角膜 ,观察角膜结膜病变反应 ,并进行细胞学、细菌学、病理组织切片检查。然后再选出12株福氏志贺菌强毒株和两株弱毒株 ,通过噬斑形成实验 ,观察对HeLa细胞的侵袭能力。结果 2 8株福氏志贺菌均在 3d之内引起豚鼠发病 ,但症状表现有差异 ,除 2株福氏志贺菌感染豚鼠后发病时间延长、症状轻微外 ,其余菌株则引起较为严重的角膜结膜炎 ,尤其在感染第 3天 ,出现最为典型的临床表现。噬斑形成试验结果与豚鼠感染试验基本相符。结论 检测福氏志贺菌的毒力可用HeLa细胞噬斑形成试验替代Sereny试验。利用Sereny试验和HeLa细胞噬斑形成试验鉴定出 2 6株福氏志贺菌的强毒株和 2株弱毒株 。

福氏拟菱形藻(Pseudo-nitzschia fukuyoi)——中国产毒拟菱形藻的新记录

为了提高对我国海域拟菱形藻属(Pseudo-nitzschia)物种多样性的认识,并明确其是否能够产生多莫酸(domoic acid,DA)。本文从中国沿海分离和建立了拟菱形藻的单克隆培养株系,结合光学显微镜下的群体特征、透射电镜下的超微形态学特征、基于核糖体转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)的分子系统学数据,以及基于ITS2转录RNA的二级结构分析,鉴定到我国拟菱形藻属的1个新记录种:福氏拟菱形藻(P.fukuyoi Lim,Teng,Leaw&Lim)。本文对其形态学特征进行描述,与相似物种进行了对比分析;对其ITS2-RNA序列进行了分析;利用高效液相色谱-串联质谱联用法(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对培养藻株的产毒特征进行了分析,多个株系中均检测到DA,单细胞产毒水平为0.02—0.23pg,这是我国报道的第二种产毒拟菱形藻。利用卤虫(Artemia salina)和褶皱臂尾轮虫(Brachionus plicatilis)对福氏拟菱形藻的产毒水平进行了诱导,发现浮游动物能够提高福氏拟菱形藻的DA含量,增强幅度在4.7—28.5倍之间。本文提高了对我国拟菱形藻属物种多样性的认识,明确了福氏拟菱形藻的产毒特征和水平,为后续深入研究提供了基础数据。

福氏志贺菌5a型M90T株GAPDH蛋白多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备高效的福氏志贺菌5a M90T3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的多克隆抗体,并对其特异性进行评价。方法提取M90T的全基因组,采用PCR法扩增M90T中的基因gapA克隆到原核表达载体pET-24中,重组质粒转入到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,条件优化后纯化GAPDH-His融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备该蛋白的多克隆抗体。Western blot法、ELISA鉴定获得的抗血清。结果成功构建了原核表达载体pET24a-gapA,通过一系列诱导条件的优化,确定可溶性条件为30℃、1 mmol/L IPTG诱导2 h。用纯化的融合蛋白GAPDH-His作为抗原免疫小鼠制备多克隆抗体,Western blot法、ELISA证明多克隆抗体制备成功。结论成功制备了福氏志贺菌5a M90T特异性的小鼠多克隆抗体。

从阿根廷进口冻鸡爪检出福氏志贺氏菌

从阿根廷进口冻鸡爪检出福氏志贺氏菌尹旭陈惠清叶奕优隋文陈维俊（皇岗动植物检疫局深圳５１８０４５）汕头某公司从阿根廷进口一批冻鸡爪，于１９９７年３月２８日到达深圳皇岗口岸，经扦样检验，检出福氏志贺氏菌。这是首次从皇岗口岸进境的动物产品中检出福氏志贺氏菌...

福氏志贺菌PFGE和MLVA分子分型方法的应用与评价

目的比较和评价脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)和多位点可变数目串联重复序列分析技术(MLVA)在福建地区福氏志贺菌研究中的应用。方法运用PFGE和MLVA技术对43株分离自福建地区的福氏志贺菌进行分子分型,结合流行病学资料分析比较分型效果。结果 43株福氏志贺菌经PFGE分型后相似度在61.70%～100%之间,按照100%的相似水平可分为36个PFGE型,没有优势PFGE型别,分辨系数为0.992 2,存在4个优势簇(G1～G4);福氏志贺菌经MLVA分型后,按照100%的相似水平可分为41个MLVA型别,遗传关联度介于6.207%～100%之间,没有优势MLVA型别,分辨系数为0.997 8,得到5个优势基因群(Cluster1～5)。在最小生成树上,部分F4c与Fx亲缘关系较近,并都由F2a和F1a分支而来,表现出一定的遗传关系。结论两种分型方法的分辨率基本一致,PFGE分型结果与流行病学背景资料及血清型别基本吻合,MLVA在分析菌株种群进化关系上更具优势。

马鞍山市志贺菌福氏4c生物亚型生物学特性及感染分析

目的:了解马鞍山市志贺菌福氏4 c生物亚型(F4 c)的流行及分布特点、生物学特性、药物敏感性等。方法:采用常规分离、全自动微生物鉴定系统生化鉴定、血清学试验、刚果红侵袭力检测及Ep i info 2000统计软件分析,掌握福氏4 c生物亚型的生物学基本特性及人类感染统计学数据。结果:从428份标本分离的67株志贺菌中检出福氏4 c生物亚型37株,从45株赠送菌株中鉴定22株福氏4 c生物亚型,分别占检出菌株数的55.2%和48.9%;59株福氏4 c生物亚型的生物学特性与福氏其它血清型别的基本一致,完全符合志贺菌生化定义;侵袭力试验结果显示只有1株福氏4 c生物亚型为阴性,其余均为阳性;福氏4 c生物亚型耐药模式与其它志贺菌血清型存在一定差异;软件统计结果说明福氏4 c生物亚型感染人类具有普遍性,与年龄、性别无差异。结论:志贺菌福氏4 c生物亚型业已成为马鞍山地区志贺菌感染的主要流行株,为进一步掌握F4 c的流行动态,探讨其分子水平的流行状况,将通过分子流行病学方法追溯传染源,以达到将其消灭在初始阶段的目的。