禹白芷苯丙氨酸解氨酶基因AdPAL1的克隆与表达分析

【目的】探究禹白芷中欧前胡素含量与苯丙氨酸解氨酶基因AdPAL1表达的相关性,并对AdPAL1进行克隆和原核表达。【方法】使用高效液相色谱法测定禹白芷快速生长期和收获期根和叶中欧前胡素的含量,并使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法测定AdPAL1基因在同时期根和叶中的表达情况,以观察欧前胡素含量与AdPAL1基因表达是否具有相关性。此外,以禹白芷转录组为基础,采用逆转录PCR(RT-PCR)技术从禹白芷根中克隆AdPAL1基因,并在大肠杆菌中进行表达。【结果】禹白芷快速生长期根中的欧前胡素含量远高于叶,而AdPAL1基因在根中的表达量也远高于叶。与快速生长期相比,收获期根中欧前胡素含量略有下降,AdPAL1基因在根中的表达量也同时下降。这些结果表明AdPAL1基因表达与欧前胡素含量具有相关性。此外,生物信息学分析显示,禹白芷AdPAL1基因(GenBank登录号:OQ822236)开放阅读框长1764 bp,编码557个氨基酸,其蛋白相对分子质量为61.10 kD,等电点为5.92,且具有苯丙氨酸解氨酶保守结构域(IPR005922,1~547),属于PAL蛋白家族成员。AdPAL1蛋白定位于细胞质,主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,与石防风属植物KpPAL2蛋白亲缘关系最近,序列相似性高达99.28%。AdPAL1基因在大肠杆菌中表达的重组蛋白相对分子质量约为84.00 kD,与预期蛋白大小一致。【结论】初步确定禹白芷根和叶中欧前胡素含量与AdPAL1基因表达相关,并成功克隆AdPAL1基因,在大肠杆菌中成功表达。上述结果为进一步研究AdPAL1基因在欧前胡素生物合成中的作用机制提供参考。

不同加工干燥方法对禹白芷挥发性成分的影响

目的:分析不同产地干燥方法对禹白芷中挥发性成分的影响。方法:采用水蒸气蒸馏法从不同加工干燥方法的禹白芷中提取挥发性成分,用毛细管气相色谱-质谱法对化学成分进行鉴定,用面积归一化法测定其相对百分含量。结果:共鉴定37种化合物,不同加工干燥方法处理的禹白芷挥发性成分差异比较大,烘干、晒干、微波干燥比较相似,硫熏和发汗干燥对挥发性成分影响比较大。结论:硫熏、发汗干燥均对禹白芷药材的挥发性成分有较大的影响,不适于在产地加工中使用。

禹白芷适宜干燥加工方式的优选研究

目的:通过功效成分与外观性状的综合评价,优选禹白芷药材的适宜产地干燥加工技术,为根类中药材的干燥加工提供示范。方法:采用晒干、阴干、热风干燥、中波红外干燥等19种方式对禹白芷进行干燥加工。HPLC-PAD法分析不同干燥方法加工的禹白芷中香豆素类化学成分含量;GC-MS法分析其挥发油组成,并采用内标法定量;采用综合评分法评价外观性状。结果:禹白芷药材中总香豆素含量晒干组高于阴干组,热风变温干燥组整体均较高,恒温干燥组干燥温度与香豆素类成分含量呈反比。挥发油类成分热风变温干燥组整体均较高,恒温干燥组干燥温度与挥发油类成分含量呈反比。外观评价结果表明,热风50℃干燥组最好,其次为晒干组、阴干组、中波红外50℃组。结论:综合考虑干燥时间、外观、功效成分含量,推荐禹白芷干燥加工使用热风干燥,设备为控温控湿热风干燥机,其适宜温度为50℃,排湿湿度为35%。该方法可为白芷等根类中药材的适宜干燥技术规范的形成提供参考。

紫外线与磁性纳米材料协同催化蜂蜜及禹白芷中农残的降解

介绍了Fe_3O_4@SiO_2@meso-TiO_2纳米材料的制备方法,并研究了Fe_3O_4@SiO_2@meso-TiO_2纳米材料结合紫外线协同催化蜂蜜及禹白芷农药残留的降解。结果发现,所制备的Fe_3O_4@SiO_2@meso-TiO_2纳米材料与紫外线共同作用,可有效降解蜂蜜及禹白芷中的农药残留。通过外加磁场,Fe_3O_4@SiO_2@meso-TiO_2磁性纳米材料可被有效回收并再次用于蜂蜜及禹白芷中农药残留的降解。

禹白芷根脂溶性化学成分研究

该文研究禹白芷Angelica dahurica cv.Yubaizhi根脂溶性化学成分。采用硅胶和高效液相等柱色谱方法进行分离纯化,通过化合物的谱学数据鉴定其结构。共分离得到33个化合物,分别鉴定为异欧前胡素(1)、欧前胡素(2)、豆甾醇(3)、异氧化前胡内酯(4)、栓翅芹烯醇(5)、补骨脂素(6)、香柑内酯(7)、异去甲基呋喃羽叶芸香素(8)、珊瑚菜内酯(9)、欧芹酚(10)、别欧前胡素(11)、花椒毒素(12)、花椒毒酚(13)、异茴芹内酯(14)、别异欧前胡素(15)、β-谷甾醇(16)、氧化别欧前胡素(17)、牧草栓翅芹酮(18)、5-羟基-8-甲氧基补骨脂素(19)、二氢欧山芹醇(20)、独活醇(21)、异栓翅芹烯醇(22)、2"R-新白当归脑(23)、白当归素乙醚(24)、白当归素(25)、水合氧化前胡内酯(26)、尿嘧啶(27)、伞形花内酯(28)、佛手酚(29)、去甲基呋喃羽叶芸香素(30)、异白当归脑(31)、氧化前胡内酯乙醇醚(32)和独活属醇(33)。其中,化合物8,10,17,21和30为首次从该种植物中分离得到。

HPLC法分析禹白芷药材的质量

目的:建立禹白芷药材的含量测定方法,比较分析不同采收地、不同采收期、不同药用部位、不同采收地干燥方法制备的禹白芷药材的质量。方法:采用HPLC方法对禹白芷药材中的欧前胡素、异欧前胡素进行含量测定。色谱柱:资生堂C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(60∶40);流速:1.0 mL.min-1;检测波长:300 nm;柱温:25℃。结果:禹白芷的采收期、药用部位、产地干燥方法对欧前胡素、异欧前胡素的含量有较大的影响。结论:本方法为科学产地采收、加工干燥禹白芷提供实验依据,同时可用于禹白芷的质量评价。

禹白芷香豆素成分在人源Caco-2细胞单层模型上的吸收转运研究

吸收是口服药物发挥疗效的关键,小肠是药物吸收的主要场所。该文采用国际公认的可以模拟小肠上皮细胞的人结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型,分别用6孔和12孔Transwell板,对禹白芷总香豆素及主要香豆素单体化合物进行了肠吸收转运对比研究,探索禹白芷中香豆素成分在香豆素单体给药及提取物给药情况下,吸收转运是否存在差异。该文研究发现水合氧化前胡内酯、比克白芷素和珊瑚菜内酯单体单独给药,其表观渗透系数(P_(app))皆在1×10^(-5) cm·s^(-1)数量级,判断均为吸收良好的化合物;双向转运的P_(app)比值接近1,推测在Caco-2细胞单层模型的吸收过程中均无载体转运参与,为单纯的透细胞被动转运;欧前胡素、异欧前胡素和香柑内酯也有类似的转运趋势。禹白芷总香豆素给药,其中的水合氧化前胡内酯、比克白芷素和香柑内酯的P_(app)皆在1×10^(-5) cm·s^(-1)数量级,为吸收良好的化合物,这与单体化合物单独给药结果一致;欧前胡素、珊瑚菜内酯和异欧前胡素相对于单体给药,其P_(app)降低。虽然双向转运的P_(app)比值皆在0.5~1.5,但是相对于单体给药数值也存在波动,推测总香豆素中化合物之间可能存在相互作用。该文结果为研究含有禹白芷的复方中药的禹白芷香豆素的肠吸收研究奠定了基础。

毛细管气相色谱法测定不同产地禹白芷中9种有机氯农药

目的：测定不同产地禹白芷中9种有机氯农药残留情况。方法：以多种有机溶剂提取、萃取等净化方法制备供试品溶液,采用毛细管气相色谱法（电子捕获检测器）通过程序升温来同时测定禹白芷中9种有机氯农药的含量。结果：本方法回收率为76.94%-113.62%,所测定6个样品中未检测到9种有机氯农药的残留。结论：本方法简便、快速,可用于测定禹白芷中有机氯农药的残留。