荧光逆行追踪结合离体固定脑片细胞内Lucifer Yellow染色和荧光免疫组化──共聚焦激光扫描显微镜观察

本文介绍一种由多种方法组合的技术，包括荧光素（FastBlae）逆行追踪．离体固定脑片细胞内LuciferYellow染色、荧光免疫组织化学染色和共聚焦激光扫描显微镜观察。通过这项组合技术．可以在1μm厚度的光学切片和连续光学切片三维重构图象中同时显示传出神经元的结构和免疫阳性传入纤维及其终未．进而可判断两种成分之间的联系。在单细胞水平的突触学研究中．此项技术提供了一个简单、有效的定性和初步定量相结合的实验方法．

荧光逆行追踪结合离体固定脑片细胞内染色技术

本文介绍一种简便易行并可在光、电镜下研究单个神经元形态和神经元回路的方法。此法主要包括荧光逆行标记、固定脑片细胞内电泳ＬｕｃｉｆｅｒＹｅｌｌｏｗ和ＤＡＢ光转化三个步骤。它主要具有以下优点；（１）利用送行追踪确定神经元投射部位；（２）进一步细胞内注射可充分显示神经元的树突构筑，尤其是远端树突和树突棘；（３）经ＤＡＢ转化的神经元形象能长久保存，克服了荧光易褪色的缺点，可供详细观察和分析；（４）转化后的细胞，因已经过良好固定，结构保存较好；故可在电镜下进一步观察研究；（５）结合免疫荧光，通过Ｃｏｎｆｏｃａｌ显微镜可更清晰地观察ＬｕｃｉｆｅｒＹｅｌｌｏｗ标记的细胞与其它神经纤维的联系；（６）此外还可用于病理检查的标本，研究人体脑组织神经元的形态特征。为此，此方法不失为一种研究单个神经元形态（尤其是树突构筑）和神经元回路的良好方法。