乙型肝炎病毒PreS1蛋白与初期多肽相关复合体α亚单位特异性结合的研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)PreS1蛋白与人类初期多肽相关复合体α亚单位(nascent-polypeptide-asso-ciated complex alpha polypeptide,NACA)之间的结合作用。方法采用交合实验验证PreS1蛋白和NACA在酵母细胞内的结合作用,利用离体结合实验证实二者在体外的结合作用,免疫共沉淀实验证实二者在哺乳动物细胞中的特异性结合。结果携带NACA基因的酵母同携带preS1基因的酵母交合后发生反应,LacZ活性检测菌落呈现蓝色,离体结合实验Western印迹中出现特异性结合活性反应条带,提示PreS1蛋白和NACA在体外存在直接相互作用,免疫共沉淀实验在13×103处出现蛋白条带,提示在哺乳动物细胞水平仍能检测到PreS1蛋白和NACA的特异结合。结论NACA与PreS1蛋白在酵母细胞和哺乳动物细胞中均存在特异性结合,推测NACA可能通过与PreS1蛋白的结合影响病毒黏附及反式激活等过程。

ADAM22蛋白与14-3-3β蛋白之间的相互作用

ADAM家族是一类具有去整合域和金属蛋白酶域的跨膜蛋白,广泛参与各种重要的生理过程,如精卵结合、神经系统发育、成肌细胞融合以及炎症反应等.该家族蛋白具备潜在的粘连和蛋白酶活性.adam22在脑部高度表达,基因剔除小鼠则出现严重的共济失调,并在断奶前死亡,但其作用机制不详.用酵母双杂合系统筛选到与ADAM22相互作用的蛋白质143-3-3β,离体结合实验、免疫共沉淀进一步证实了ADAM22与14-3-3β蛋白相互作用的专一性.ADAM22胞内部分系列缺失实验表明,C端第864～892氨基酸残基是14-3-3β的结合基序.14-3-3β在脑部大量表达,具有介导细胞的扩散、迁移及调节细胞周期等重要功能.因此,本实验证实这两种蛋白质之间存在相互作用,为阐明ADAM22在神经系统发育中的功能奠定了基础.