右美托咪定对大鼠离体肺缺血-再灌注损伤时RIPK3/MLKL介导程序性坏死的影响

目的评价右美托咪定对大鼠离体肺缺血-再灌注损伤(LIRI)时受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)/混合系列蛋白酶样结构域(MLKL)介导的肺组织细胞程序性坏死的影响。方法成年雄性SD大鼠72只,采用随机数字表法随机分成三组(n=24):缺血-再灌注损伤组(IR组)、右美托咪定组(DEX组)和对照组(C组)。IR组采用IL-2型离体肺灌流系统建立大鼠离体LIRI模型;DEX组在复灌开始时于灌流液中加入右美托咪定10 nmol/L;C组只通气和灌流。测定大鼠肺组织湿/干重比(W/D),光镜下观察肺组织病理学并测定肺泡损伤率(IAR)。测定灌流液中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。Western blot法分别检测肺组织中RIPK3和MLKL蛋白含量。结果与C组比较,IR组和DEX组肺组织W/D、IAR和灌流液中MDA含量均明显升高(P<0.05),而灌流液中SOD活性均明显降低(P<0.05)。与IR组比较,DEX组肺组织W/D、IAR和灌流液中MDA含量均明显降低(P<0.05),而灌流液中SOD活性明显升高(P<0.05)。光镜显示IR组肺组织形态学结构发生明显损伤,而DEX组则明显减轻。与C组比较,IR组和DEX组肺组织RIPK3和MLKL蛋白含量均明显升高(P<0.05);与IR组比较,DEX组肺组织RIPK3和MLKL蛋白含量均明显降低(P<0.05)。结论右美托咪定可通过抑制RIPK3/MLKL介导的肺组织细胞程序性坏死来减轻大鼠离体肺缺血-再灌注损伤。

动态灌注与静态保存对犬离体肺组织中AQP1表达的影响

目的通过比较体外循环机持续灌注、间断压力灌注、单存低温保存离体肺的水通道蛋白1(AQP1)表达变化,探索离体肺保存的最佳保存方法。方法将30只Mongrel犬分成体外循环组、压力灌注组、低温保存组,每组10只。在保持机械通气的条件下,完整摘取双肺。进行体外循环机灌注、间断压力灌注、单存灌注离体肺循环后低温浸泡保存,并按时间点留取标本;HE染色法观察犬离体肺组织形态学改变,免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测犬离体肺组织AQP1的表达。结果 HE染色发现,随着离体时间的延长,肺泡组织结构逐渐塌陷,炎性细胞及渗出物增多,肺泡间隔也逐渐增宽,肺泡腔内可见渗出物;在同一时间点,体外循环组的组织结构损伤变化比压力灌注组和低温保存组轻。在各实验组随着时间推移AQP1的表达量呈现下降趋势;在每个时间点上,体外循环组AQP1的表达量高于压力灌注组,压力灌注组又高于低温保存组。结论体外循环机械灌注对离体肺的保护作用显著优于间断压力灌注和单存低温保存。

尾吊对大鼠离体肺循环的影响及NOS抑制剂的对抗作用

目的研究尾吊模拟失重对大鼠离体肺循环的影响和NOS抑制剂的对抗作用,为模拟失重对肺循环局部调节和立位耐力和运动能力降低机制研究积累资料。方法 -30°尾吊(TS)模拟失重的生理效应,Wistar雄性大鼠被随机分成3组:对照组(Con,n=8)、7 d尾吊组(TS7,n=10)和14 d尾吊组(TS14,n=11)。在人工胸腔内,采用离体肺灌流技术,超声流量计和恒流蠕动泵将肺循环流量控制在13.58 mL/min。PowerLab/4SP生理记录系统检测模拟失重对大鼠最大肺动脉压、静脉压和阻力影响和10-5 mol/L L-NAME的对抗作用。结果 TS7,TS14组大鼠离体灌流的肺动脉压最大值显著降低(P<0.01),肺动脉端阻力和肺循环阻力显著降低(P<0.01),10-5 mol/L L-NAME能较好对抗模拟失重对肺循环的影响。结论 NOS抑制剂对抗立位耐力和运动能力降低有应用前景。

利用兔离体肺灌流模型评价肺微小血管通透性

目的 :准确、定量的评价肺微小血管通透性。方法 :利用兔离体肺灌流模型 ,采用肺重量分析法测定肺毛细血管滤过系数 (Kf)。结果 :肺毛细血管滤过系数测定值为 4 .78± 0 .73mg·min-1.cmH2 O-1·g-1。结论 :这种利用离体肺灌流模型定量评价肺微小血管通透性的方法具有直接、测定准确的优点 ,对于了解肺的生理状态、评价急性肺损伤和肺水肿程度具有重要意义 ,是一种新型的实验方法。

离体肺组织切片的制备和孵育

目的建立一种简便有效的离体肺组织切片孵育方法。方法利用肺组织精细切片技术制备肺组织切片 ,以 0 .5mLKrebs Henseleit(K H)缓冲液作为孵育液 ,在 37℃培养箱内分别孵育 1、2、3、4h ,测定肺片的四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色、乳酸脱氢酶 (LDH)释放率和三磷酸腺苷 (ATP)含量 ,以反映肺组织活性。结果肺片在 37℃培养箱内孵育 1、2、3、4h后MTT比色、LDH释放率和ATP含量均无统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论应用 0 .5mLKrebs Henseleit(K H)缓冲液作为孵育液、在 37℃培养箱对肺片进行孵育时组织活性没有明显变化 。

离体肺灌注技术的临床应用

肺移植是治疗多种终末期肺病的有效手段,但供肺短缺严重限制了肺移植的发展。离体肺灌注技术(EVLP)能再次评估和改善供肺肺功能,提高供肺的利用率,目前在欧美国家逐步开始应用,取得了较好的临床效果。本文总结了肺移植供肺选择标准、EVLP适应证、EVLP的类型以及国外应用现状,同时介绍了无锡市人民医院EVLP初步经验,以期为同行提供参考。

Euro-Collins液、LPD液、前列腺素E_1及硝酸甘油对离体肺保护作用的比较

目的 应用兔离体肺再灌注模型研究 Euro- Collins液、低钾保护液 (L PD)及 L PN液 (前列腺素 E1 、硝酸甘油加入 L PD)在离体肺保护中的作用。 方法 2 7只实验用兔随机分为 3组 (n=9) ,分别以 Euro- Collins液 (E组 ) ,L PD液 (L组 )及 L PN液 (L PN组 ) )进行肺灌洗及保存。每组再分为 3小组 (各含 6个肺 )分别保存 2 ,4,8h后进行再灌注 ,测定再灌注后肺血管阻力 (PVR)、肺通气阻力 (L R)、肺含水量 (L W)及 PO2 以了解肺保护效果。 结果 保存 8h后 E组 L R显著增高 ,且明显高于 L组及 L PN组 ;L PN组 PVR在保存各时间明显低于 E组及 L组。 结论 L PN组在保护肺血管内皮细胞及降低肺血管阻力方面优于 E组及 L组 ,作用机制可能通过扩张肺动脉 ,改善肺早期灌洗及抑制中性粒细胞 ,血小板在肺内聚集而减轻肺再灌注损伤。

低钾保护液对离体肺保护的实验研究

目的 应用兔离体肺再灌注模型研究低钾保护液 ( LPD)与 Euro- Collins液 ( EC)对肺保护的作用。 方法 18只实验用兔随机分为两组 ,分别用 L PD液及 EC液进行肺灌洗保存。每组 9只再分为 3小组 (各含 6个肺 ) ,分别保存 2 ,4及 8h后进行肺再灌注 ,测定再灌注后肺血管阻力( PVR) ,肺通气阻力 ( L R) ,肺含水量 ( L W)及肺静脉血气分析以了解肺保护效果。 结果 ( 1) EC组随保存时间的延长 ,L R逐渐增加 ,8h后明显增高 ( P<0 .0 1) ,但保存 2 h及 4h无统计学差异。在 L PD组 ,各保存时间内 L R无明显变化。保存 8h后 LPD组 LR明显低于 EC组 ( P<0 .0 5 )。( 2 )两组在保存的 8h内再灌注后 PVR均无明显增高 ,虽然 LPD组 PVR低于 EC组 ,但无统计学差异。 ( 3)肺含水量及 PO2 两组间在保存 8h内均无明显改变。 结论 ( 1)应用 L PD液对离体肺灌洗及保存的效果优于 EC液 ;( 2 )肺通气阻力的改变可能较肺血管阻力对损伤的反应更为敏感。

家兔离体肺恒流灌流负压通气模型的建立

作者用9只家兔,取出肺脏,于体外用自体稀释抗凝血液进行灌流,采用负压通气方法,在控制灌流液流量率(133.33ml/min)恒定的条件下,在70min的灌流期内,灌流压力略有上升,但均不超过227kPa,肺重量略下降。模型稳定后10min测定灌流液pH值为7.58±0.13,Po_2:36.57±9.43kPA,Pco_2:233±0.45kPa;灌流血液血球压积开始为24.13％±3.12％,结束为24.12％±3.04％,无明显改变(P>0.05);肺湿/干重比值(对照组为4.74±0.16;离体肺值为4.75±0.12,P>0.05);肺水含量与正常在体肺的相应值比较无显著性差别。灌流70min内肺的外观形态大体现正常。上述结果表明,本实验所建立的模型在灌流期间内是稳定的,可信的。

肺动脉灌注压力对兔离体肺脏保存质量的影响

目的应用肺保存液Ｅｕｒｏ－ｃｏｌｉｎｓ（ＥＣ液），观察不同肺动脉灌注压力对兔离体肺脏保存质量的影响。方法根据灌注压力１，２，３，４ｋＰａ的不同将兔分为Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３、Ｇ４组，每组１０只，按７０ｍｌ／ｋｇ的总量经肺动脉灌ＥＣ液，根据压力调节流量，灌洗后肺脏置４℃保存液中冷藏４ｈ后予新鲜静脉血进行复灌，测定血气分析、肺阻力、气道压力、肺组织的湿／干重比例及病理切片光镜检查。结果发现Ｇ２、Ｇ３的上述各项指标优于Ｇ１、Ｇ４组，Ｇ２、Ｇ３血氧满意，肺阻力降低，而Ｇ１组肺阻力明显增加，病理切片肺水肿明显，Ｇ４则肺泡出血明显。结论ＥＣ液对兔肺脏保存其最佳肺动脉的灌注压力为２～３ｋＰａ之间。

黄芩甙-锌络合物对致敏豚鼠离体肺释放SRS-A作用的观察

为了研究哮喘的防治,本文观察黄芩甙-锌络合物对致敏豚鼠离体肺释放SRS-A的抑制作用及对小鼠血清锌水平的影响。结果表明黄芩甙-锌络合物有减少肺灌流液中SRS-A含量作用及短暂的提高血清锌作用。

丹参酮在离体肺保护中应用的实验研究

目的本研究是探讨丹参酮对离体肺保护的作用。方法以离体兔肺模型为肺保护实验对象,以肺动脉灌洗再次肺动脉灌注为实验方法,以新西兰兔为实验动物,随机分为两组。一组用LPD液行肺动脉灌洗和保存,另一组用丹参酮加LPD液组成实验组,用同样的方法灌洗和保存。保存18 h后,观察病理形态、含水量以及测量NO(一氧化氮)、SOD(超氧化物歧化酶)及MDA(丙二醛)的含量。结果肉眼见组织新鲜红润,部分组织充血、水肿及淤血;光镜下两组的肺泡、支气管及毛细血管结构完整,高倍视野下对照组较实验组肺泡上皮及毛细血管上皮细胞肿胀、肥大,少部分组织可见肺泡内有红细胞渗出、间隔增宽等。实验组的含水量低于对照组(P<0.05)。实验组肺组织中的NO及SOD含量高于对照组(P<0.05),MDA含量低于对照组(P<0.05)。结论丹参酮能清除氧自由基,有较强的抗氧化性,能较明显的减轻肺的再灌注损伤。在LPD液中加入丹参酮,能够对离体肺起到更好的保护效果。离体兔肺再灌注模型是一种较理想的实验动物模型。

Milrinone在离体肺保护中应用的实验研究

目的 :本研究是探讨Milrinone(米力农 )对离体肺保护的作用。材料与方法 :以离体兔肺模型为肺保护实验对象 ,以肺动脉灌洗再次肺动脉灌注为实验方法 ,以新西兰兔 2 4只为实验动物 ,随机分为两组 ,每组 12只。一组用LPD液行肺动脉灌洗和保存 ,另一组用米力农加LPD液组成实验组 ,用同样的方法灌洗和保存。保存 18h后 ,观察病理形态、含水量以及测量NO(一氧化氮 )、SOD(超氧化物歧化酶 )及MDA(丙二醛 )的含量。结果 :肉眼见组织新鲜红润 ,部分组织充血、水肿及淤血 ;光镜下两组的肺泡、支气管及毛细血管结构完整 ,高倍视野下对照组较实验组肺泡上皮及毛细血管上皮细胞肿胀、肥大 ,少部分组织可见肺泡内有红细胞渗出、间隔增宽等。实验组的含水量低于对照组 (P <0 0 5 )。实验组肺组织中的NO及SOD含量高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,MDA含量低于对照组 (P <0 0 5 )。结论 :米力农能清除氧自由基 ,有较强的抗氧化性 ,能较明显的减轻肺的再灌注损伤。在LPD液中加入米力农 ,能够对离体肺起到更好的保护效果。离体兔肺再灌注模型是一种较理想的实验动物模型。

用地塞米松冷藏保存的离体肺顺应性的变化

目的观察用地塞米松冷藏保存的离体肺顺应性的变化。方法将32只家兔肺随机均分至对照组、用地塞米松冷藏(4℃)保存24 h组7、2 h组和120 h组。对照组:测定室温条件下的肺顺应性。冷藏组:在相应时间取出肺,室温条件下复温后,置入生理盐水中,测定注气(生理盐水)和抽气(生理盐水)过程中,肺容积在10mL、20mL、30mL时的肺的顺应性。结果各组与对照组比较,均存在显著性差异,P<0.05或P<0.01。结论用地塞米松冷藏保存后离体肺顺应性增强,其影响程度随冷藏时间增加而增大。

家兔离体肺冷藏后表面活性物质及顺应性的变化

目的:观察家兔离体肺冷藏后表面活性物质及顺应性的变化。方法:将32只家兔肺随机均分为对照组、冷藏(4℃) 2 4h组、72h组和12 0h组。对照组:测定室温条件下的肺表面活性物质及顺应性。冷藏2 4h组、72h组和12 0h组:肺离体后立即置于台式液中冷藏。在相应时间取出肺,室温条件下复温后,置入生理盐水中,测定表面活性物质并测定注气(和生理盐水)和抽气(和生理盐水)过程中,肺容积在10ml、2 0ml、30ml时的肺的顺应性。结果:2 4h前肺顺应性以及12 0h内表面活性物质的含量与对照组比较,差异无显著性(P >0 .0 5 )。2 4h后顺应性与对照组比较,差异有显著性(P <0 .0 5 )。结论:冷藏后家免肺泡表面活性物质在一定时间内影响不大,但对肺顺应性可随时间延长而减小。本实验亦为在不同时间、温度条件下,进行肺顺应性和肺泡表面活性物质含量的变化的研究,奠定了冷藏保存的有效程度和有效时限的研究基础。

离体肺气体容积和肺密度在肺气肿小鼠模型中的变化

目的研究以猪胰弹性蛋白酶(PPE)诱导小鼠肺气肿模型的离体肺气体容积(ELGV)和肺组织的密度变化规律,探讨ELGV和肺密度与肺气肿的相关性。方法30只雄性C57BL/6小鼠随机均分为对照组、PPE 3d组和PPE 7d组,气管内滴注PPE,建立肺气肿模型。以密度测量仪测量ELGV和肺组织密度,同时进行肺组织病理学观察及图像半定量分析。结果与对照组相比,PPE 3d组和PPE 7d组肺湿重的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。对照组、PPE 3d组和PPE 7d组的ELGV分别为(0.217±0.011)、(0.271±0.016)和(0.420±0.034)cm^3,PPE 3d和PPE 7d组显著高于对照组(P值均<0.01),PPE 7d组又显著高于PPE 3d组(P<0.01)。对照组、PPE 3d组和PPE 7d组的肺组织密度分别为(0.606±0.016)、(0.541±0.033)和(0.368±0.032)g/cm^3,PPE 3d和PPE 7d组显著低于对照组(P值均<0.01),PPE 7d组又显著低于PPE 3d组(P<0.01)。结论ELGV和肺组织密度与肺气肿的形态学改变密切相关,可以作为监测和评价肺气肿形态学改变的可行性指标。

自制肺灌流液在猪离体肺灌流中的应用

目的:研究自制肺灌流液在猪离体肺灌流中的应用。方法:7个供体猪肺体外灌流6h,灌流过程中每小时测定灌流液的pH值、电解质浓度、渗透压等,同时测定供体肺的肺功能指标,并计算动静脉氧分压差、肺循环阻力和氧合指数,以评价供肺质量。结果:自制灌流液的pH值、电解质浓度、渗透压在6h灌流过程中保持稳定。灌流4h时,供肺动静脉氧分压差、氧合指数最高,而肺循环阻力未见明显升高。结论:自制肺灌流液可用于猪离体肺灌流,对供肺具有一定的保护和修复作用。

环磷酰胺对兔离体肺保护的作用

目的应用兔离体肺再灌注模型研究环磷酰胺对兔离体肺保护的作用。方法20只实验兔随机平均分为两组,对照组术前腹腔注射生理盐水10 ml,实验组术前腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg(溶解在10 ml生理盐水中)。48 h后进行实验,由实验兔右室流出道尽量抽取兔血,造成肺组织热缺血。1 h后以低钾右旋糖苷肺保护液(LPD)进行肺灌洗及保存,保存4 h后用开始时抽取的兔血进行再灌注。再灌注10 min、30 min、60 min分别测定肺血管阻力(PVR)、肺通气阻力(LR)、以及肺静脉血氧分压(PvO2),再灌注结束后取肺组织进行肺含水量(LW)测定以了解肺保护效果。结果实验组再灌注后PVR明显低于对照组(P<0.05),PO2明显高于对照组(P<0.05)。LR、LW两组无明显差别。结论环磷酰胺对兔离体肺保存具有一定保护作用,其可能的机制是通过免疫抑制以及细胞毒作用减轻了炎性反应。

家兔离体肺冷藏后顺应性的变化

目的 :观察家兔离体肺冷藏后顺应性的变化。方法 :将 32只家兔肺随机均分为对照组、冷藏 (4℃ ) 2 4h组、72h组和 12 0h组。对照组 :测定室温条件下的肺顺应性。冷藏 2 4h组、72h组和 12 0h组 :肺离体后立即置于室温生理盐水中 ,测定注气 (生理盐水 )和抽气 (生理盐水 )过程中 ,肺容积在 10ml、2 0ml、30ml时肺的顺应性。结果 :对照组与冷藏 2 4h组相比 ,肺顺应性无明显改变 ;冷藏 72h组 ,在注气肺容积为 10ml,注气和抽气肺容积在 30ml时的顺应性降低 ,同对照组比较 ,差异具有显著性 (P <0 .0 5 )、12 0h组在注气和抽气肺容积在 30ml、在抽气和抽生理盐水肺容积为 10ml、抽生理相加水肺容积在 2 0ml时 ,肺顺应性降低 ,同对照组比较 ,差异具有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :在一定时间内 ,冷藏不会使肺顺应性发生明显变化 ;冷藏 72h或以后 ,肺的顺应性降低。

离体肺冷冻后顺应性的变化

目的:观察家兔离体肺冷冻后顺应性的变化。方法:将32只家兔肺随机均分为对照组、冷冻(0℃)24h组、120h组和240h组。对照组:测定室温条件下的肺顺应性。冷冻组:在相应时间取出冷冻肺,室温条件下复温后,置入生理盐水中,测定注气(或注入生理盐水)和抽气(或抽生理盐水)过程中,肺容积在10ml、20ml、30ml时的顺应性变化。结果:同对照组比较,冷冻24h组向肺内注气10ml,注或抽生理盐水20ml、30ml;冷冻120h组向肺内注气10ml、20ml、30ml,抽气30ml,注生理盐水30ml,抽生理盐水20ml、30ml;冷冻240h组向肺内注生理盐水10ml、20ml、30ml,抽生理盐水20ml、30ml时,差异具有显著性(P<0.05)。其余各组、项与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:冷冻不会使肺顺应性发生明显变化,肺顺应性降低与冷冻的时间无明显关系。