人肾高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白基因的克隆和生物信息学分析

为探讨人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白 (humanhigh affinitysodium dependentdicar boxylatetransporter,hSDCT2orhNaDC3 )基因在人体内的生理功能及其与疾病的关系 ,借助生物信息学成功地从人肾中克隆了hSDCT2基因 (GenBank接收号 :AY0 72 810 ) .首先将大鼠SDCT2cDNA与人EST数据库进行同源性比较 ,获得具有高度同源性EST片段并用DNAstar软件将它们拼接成EST重叠群 .在重叠群上设计PCR引物从人肾总RNA中用RT PCR扩增出hSDCT2基因并测序 ,然后用软件对其结构特性、组织分布及基因定位进行分析 .序列测定结果显示 ,hSDCT2开放阅读框为180 9bp ,共编码 6 0 2个氨基酸 .蛋白同源性分析表明 ,其氨基酸序列与大鼠及小鼠SDCT2分别有85 %和 87%相同 .二级结构分析显示 ,该蛋白有 12个跨膜螺旋区 .Northern分析显示 ,该基因可在肾、肝、脑、胎盘等多种组织中表达 ,并定位于 2 0号染色体的q12～q13

慢性乙型肝炎患者肝组织和外周血白细胞中钠离子依赖性维生素C转运体的表达

用免疫组化和Western blot技术检测SVCT1和SVCT2蛋白在慢性乙型肝炎患者及正常人外周血白细胞中的表达.免疫组化结果显示:在慢性乙型肝炎患者肝组织中SVCT1和SVCT2蛋白的阳性表达率和阳性表达强度显著低于正常肝组织(P<0.01);Western-blot检测显示,慢性乙型肝炎患者外周血白细胞中SVCT1表达缺失,SVCT2蛋白表达强度为0.481±0.056,均显著低于正常人(分别为0.325±0.085和0.971±0.140)(P<0.01).提示慢性乙型肝炎患者体内肝细胞和外周血白细胞存在SVCT1和SVCT2蛋白表达低下或缺失;SVCT1和SVCT2蛋白表达低下或缺失可能是乙型肝炎病毒易感性的主要原因之一.

β-螺旋桨植酸酶的金属离子依赖性

β-螺旋桨植酸酶主要来源于芽孢杆菌,是能够分解植酸释放磷元素,并且与金属离子有关的一类酶。β-螺旋桨植酸酶具有独有的Ca2+依赖性和对植酸-Ca2+复合物的底物专一性。本文综述以Ca2+为主的金属离子与β-螺旋桨植酸酶的关系。

活化钙离子依赖性蛋白酶诱导血小板凋亡的研究

目的:探讨钙离子依赖性蛋白酶(calpain)在血小板凋亡中的作用。方法:Calpain活化剂dibucaine处理血小板后,采用流式细胞仪检测血小板线粒体跨膜电位(ΔΨm)去极化,磷脂酰丝氨酸(PS)外翻;western blot检测caspase-3活化以及calpain底物talin酶切。结果:Dibucaine能诱导血小板ΔΨm去极化,PS外翻,caspase-3活化,以及calpain底物talin的酶切;calpain抑制剂能完全抑制dibucaine诱导的ΔΨm去极化、PS外翻、caspase-3活化,以及talin的酶切。结论:Calpain在血小板凋亡中发挥重要作用,活化calpain能诱导血小板凋亡。

野葛钙离子依赖性核酸酶PlCaN基因克隆和生物信息学分析

拟克隆野葛钙离子依赖性核酸酶PlCaN基因全长cDNA序列,并对其进行生物信息学分析,同时构建其原核表达载体。提取野葛材料总RNA作为模板,利用逆转录PCR(RT-PCR)、cDNA末端快速扩增技术(rapidamplification of cDNA ends,简称RACE)等方法获取野葛PlCaN的cDNA全长序列,利用相关软件和在线网站进行生物信息学分析,构建原核表达载体p BRT7-PlCaN并鉴定。结果表明,PlCaN的cDNA全长1 008 bp,编码335个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量为37.3 ku,理论等电点(pI)为9.4,为亲水性蛋白,无信号肽,表明原核表达载体p BRT7-PlCaN构建成功,为探究其在不同组织中的表达情况,建立原核表达体系,并为后期PlCaN的功能研究提供理论基础。

乳腺肿瘤细胞周期蛋白E被钙离子依赖性蛋白酶剪切成低分子量片断

乳腺肿瘤富含高活性的低分子量细胞周期蛋白E,并导致细胞周期蛋白依赖性激酶2功能失调,但其低分子量片断的形成机制尚不清楚。对乳腺肿瘤低分子量细胞周期蛋白E通过翻译后水平的某种蛋白酶作用形成的这一假说进行了探讨。钙离子可诱发乳腺肿瘤培养细胞ZR75周期蛋白E剪切为分子量与乳腺肿瘤组织相似的小分子片断。纯化Calpeptin能抑制上述过程,提示剪切过程与钙离子依赖性蛋白酶(Calpain)活性有关。同样,钙离子+纯化Calpain也能引起乳腺肿瘤细胞和组织免疫沉淀周期蛋白E的剪切。钙离子还能引起肿瘤细胞和组织Calpain调节(小)亚基有限水解,表明Cal-

钠离子依赖性中性氨基酸转运载体2特性、表达调控及功能

转运系统A载体——钠离子依赖性的中性氨基酸转运载体2(SNAT2)是近年发现的氨基酸转运感受体的典型代表,是体内主要的氮转运载体。SNAT2通过转运过程调节细胞内氨基酸浓度,进而调控细胞内氨基酸感受体的下游信号,发挥氨基酸转运载体和信号受体的双重功能,而成为近年氨基酸营养感应的研究热点。本文围绕SNAT2的分子特性、生物学特性、表达调控及其介导的氨基酸感应信号的研究进展进行综述。

顶端钠离子依赖性胆汁酸转运体在小肠癌组织中的表达及其意义

目的:研究顶端钠离子依赖性胆汁酸转运体(ASBT)在小肠癌组织中的表达,探讨其在小肠癌发生中可能的意义。方法:采用免疫组织化学显色和蛋白印迹检测ASBT在人小肠腺癌、黏液腺癌、小细胞癌及其癌旁正常组织中的表达。结果:ASBT在癌旁正常小肠组织主要表达于小肠吸收细胞游离面的胞膜;在小肠癌中,ASBT表达明显下调,在小肠黏液腺癌和小细胞癌还可见ASBT的细胞核异位表达。结论:ASBT在小肠癌组织中表达下调和异位表达提示编码ASBT的基因第10溶质转运蛋白家族第2成员(SLC10A2)可能作为一种新的抑癌基因在小肠癌的发生过程中起重要作用。

培养的主动脉平滑肌细胞的钙离子依赖性钾通道开放状态检测及其门控模型的初步研究

对培养的主动脉平滑肌细胞的钙离子依赖性钾通道 (Ca2 + -dependent k+ channels in cultural aortic smooth musclescells)单通道记录进行了分析 ,检测其开放 (关闭 )状态个数 ,并提出相应的备择马尔科夫门控动力学模式 。

以金属离子依赖性蛋白为靶标的抗病毒药物研究进展(2021-2023)

金属离子依赖性蛋白在病毒复制、组装和宿主细胞侵袭等关键环节中发挥着核心作用,使其成为抗病毒治疗策略的理想靶点。从药物化学的角度出发,综述了2021—2023年,以金属离子依赖性蛋白为靶标的抗病毒药物研究的新进展。详细分析了人类免疫缺陷病毒、人类巨细胞病毒、乙型肝炎病毒、流感病毒、裂谷热病毒、严重急性呼吸综合征冠状病毒等重要病毒的金属离子依赖性蛋白抑制剂,探讨了这些抑制剂的药理活性、作用机制及临床应用潜力。同时强调了设计病毒金属酶抑制剂面临的挑战,如确保高度选择性和特异性、药物稳定性、生物利用度等,以及应对病毒高变异率导致的耐药性问题。最后总结了抗病毒药物研发的新趋势,包括结构基础药物设计、高通量筛选、片段生长和多位点结合策略等,为开发新型高效低毒抗病毒药物提供了新的思路和方法。

电压依赖性阴离子通道与糖尿病肾脏疾病研究进展

电压依赖性阴离子通道(voltage dependent-anion channel,VDAC)位于线粒体外膜,是一种转运三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)和细胞间代谢产物的通道蛋白,对线粒体代谢及细胞生长起着重要的调节作用。最近的研究表明,VDAC在心肌病、动脉粥样硬化、高血压和糖尿病(diabetes mellitus,DM)中均有显著升高。糖尿病肾脏疾病(diabetes kidney disease,DKD)是糖尿病的主要微血管并发症,是导致终末期肾病的最常见原因,其发病机制复杂,VDAC参与其中。本文对VDAC蛋白的结构、特性、作用机制以及与DKD关系的研究进展进行综述。

中电导性钙离子依赖性钾通道在肝细胞再生蛋白-3促进结肠癌上皮间质化中的作用机制

目的 探讨中电导性钙离子依赖性钾通道（KCNN4）通道在肝细胞再生蛋白-3（PRL-3）诱导结肠癌细胞Lovo上皮间质化（EMT）中的作用机制.方法 用KCNN4通道蛋白特异性阻滞剂TRAM-34和KCNN4-小干扰RNA（siRNA）分别处理已经稳定表达PRL-3的结肠癌Lovo-P细胞和对照组Lovo-C细胞,Western blot检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、Snail以及波动蛋白（Vimentin）的水平变化,Transwell小室检测Lovo细胞侵袭能力变化.结果 Lovo-P分别经过TRAM-34和KCNN4-siRNA处理后,侵袭能力明显降低（45.78±3.89比32.69 ±2.15,45.78 ±3.89比28.76±4.25）.Western blot结果提示与对照组比较,TRAM-34处理组E-cadherin蛋白表达上升了69％,Snail蛋白表达下降了36％,而KCNN4-siRNA处理组都E-cadherin蛋白表达上升了57％,Snail蛋白表达下降了30％（P＜0.05）.结论 KCNN4通道蛋白参与了PRL-3诱导结肠癌EMT的过程.

蛋白酪氨酸磷酸酶-3通过诱导肿瘤性巨噬细胞钙离子依赖性钾离子通道表达增强LoVo细胞侵袭性

目的观察结肠癌肿瘤微环境中肿瘤细胞与巨噬细胞（M2）相互作用及对肿瘤细胞功能学的改变。方法将转入蛋白酪氨酸磷酸酶．3（PRL-3）的LoVo细胞和M2细胞模拟肿瘤微环境进行共培养，通过Westernblot检测M2细胞钙离子依赖性钾离子通道（KCNN4）蛋白表达，并检测LoVo细胞侵袭性的改变。结果Westernblot检测示PRL-3能通过共培养后诱导M2细胞KCNN4蛋白表达升高，而未作共培养的M2细胞KCNN4蛋白表达未升高。此外，经过共培养后LoVo细胞侵袭性升高（3367±135比1442±89，P〈0．05），而在阻断KCNN4蛋白表达后，LoVo细胞侵袭性降低（1388±87比2893±163，P〈0．05）。结论PRL-3在结肠癌肿瘤微环境中通过提高KCNN4表达从而增强LoVo细胞的侵袭性。

钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠胚胎心肌肥大细胞中调控血管紧张素Ⅱ诱导的细胞自噬

目的:探讨钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)与细胞自噬在胚胎心肌细胞肥大发展过程中的相互作用。方法:使用血管紧张素Ⅱ作用于大鼠胚胎心肌细胞株H9c2细胞,建立体外心肌细胞肥大模型,通过药物抑制和基因过表达及敲除等方法分析细胞自噬通路AMPK-LC3 Ⅱ。结果:血管紧张素Ⅱ可快速诱导CaMKⅡ及细胞自噬相关通路AMPK磷酸化以及细胞自噬标记蛋白LC3 Ⅱ表达,CaMKⅡ抑制剂以及基因敲除和药物抑制CaMK Ⅱ下游因子组蛋白乙酰转移酶4(HDAC4)可显著阻断血管紧张素Ⅱ诱导的LC3 Ⅱ蛋白表达(P<0.05)。结论:CaMK Ⅱ作为心肌肥大病理过程的中心调控子,可以通过AMPK或其下游HDAC4直接或间接调控细胞自噬,进而调节心肌肥大的发生发展。

人精子膜表面电压依赖性阴离子通道的初步研究

目的:研究人类精子膜表面是否存在电压依赖性阴离子通道(VDAC),并研究其生物学特性。方法:设计VDAC的特异性引物,从睾丸cDNA文库中用PCR技术扩增该通道的基因产物,用分子克隆技术体外表达重组VDAC的蛋白质。从精子表面用1%TritonX-100提取及氯仿/甲醇分离疏水性的膜表面蛋白,用免疫印迹法检测精子表面是否存在天然VDAC蛋白质。结果:人类睾丸cDNA文库含有VDAC的基因表达,人类精子膜表面发现靠N端α螺旋连接在精子膜上的VDAC蛋白质。结论:人类精子膜表面镶嵌VDAC蛋白质,该通道是以α螺旋连接在精子膜上,调控精子膜内外离子的转运和信号的转导,对精子的运动和功能至关重要。

白藜芦醇对抗线粒体电压依赖性阴离子通道介导心肌损伤作用的研究

目的从细胞水平探讨白藜芦醇抗心肌损伤保护作用机制,明确其与线粒体电压依赖性阴离子通道(VDAC)的关系。方法以pFLAG质粒为载体,构建VDAC1真核表达载体pFLAG-VDAC1。H9c2心肌细胞随机分为5组,Control组、缺氧/复氧(A/R)组、白藜芦醇组、pFLAG-VDAC1-白藜芦醇组和pFLAG-白藜芦醇组。Western blot法测定VDAC1的蛋白表达,MTT法检测细胞存活率,生化自动分析仪测定LDH、CPK活性,线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔道(mPTP)的开放。结果 A/R处理后,VDAC1表达上调,细胞存活率下降,LDH和CPK活性增高,mPTP开放;而白藜芦醇则能抑制VDAC1的上调,并降低mPTP开放程度,对抗A/R损伤;但VDAC1高表达的pFLAG-VDAC1-白藜芦醇组则可取消白藜芦醇的心肌保护作用。结论白藜芦醇抗A/R损伤作用与VDAC1密切相关,其可通过下调VDAC1从而防止mPTP的开放,保护心肌细胞。

电压依赖性阴离子通道在线粒体依赖性细胞凋亡中作用的研究进展

电压依赖性阴离子通道(VDAC)是线粒体外膜上含量极为丰富的孔状蛋白,是细胞内代谢物分子进出线粒体的必经通道,VDAC的功能状态与线粒体的代谢和功能关系十分密切。VDAC的异常通常会引发线粒体功能紊乱,导致ATP水平或转膜电位下降、细胞色素c释放等凋亡程序的启动。VDAC可与许多物质相互作用而发挥诱导细胞凋亡或抑制细胞凋亡的效应,从而在线粒体依赖性细胞凋亡途径中有着十分重要的作用。VDAC对细胞凋亡的影响机制可应用于药物治疗靶点、外源化学物毒性机制的研究,因此,VDAC的作用是近年来外源化学物所致细胞凋亡机制研究领域中的热点问题。

海刺参(Stichopus japonicus)电压依赖性钙离子通道β亚基基因及其编码产物的结构特点

电压依赖性钙离子通道(voltage-dependent calcium channels,VDCC)是细胞膜上控制Ca2+进入胞内的特殊蛋白质,VDCCβ亚基具有调节其通道活性的作用.使用RT-PCR和RACE PCR技术,从海刺参(Stichopus japonicus)肠中克隆得到电压依赖性钙离子通道β亚基(SjCaβ)基因,所得序列提交GenBank,登录号EU853658.该基因全长1 867 bp,包含1个1 614 bp的开放阅读框(ORF),编码537个氨基酸.将SjCaβ与多种无脊椎动物钙离子通道β亚基进行分析比较,发现它们有较高的同源性,并具有钙离子通道β亚基基因内保守的2个功能区域,即SH3功能区(src-homology 3 domain)和GK功能区(guanylate kinase domain).在功能区域附近还具有电压依赖性钙离子通道β亚基特有的BID区(βinteraction domain),氨基酸保守序列为PYDVVP-RP---VGPSLKGYEVTDMMQKALFDF,进一步确定了得到的cDNA序列为海刺参电压依赖性钙离子通道β亚基.对SjCaβ的二级结构进行了预测,构建了系统进化发育树,并运用同源建模法构建了SjCaβ的三维结构模型.研究结果对深入研究海刺参离子通道的结构以及在信号传导过程中的作用有着重要意义,并为研究海刺参自溶等问题提供一定的理论基础.