基于钙离子内流的Piezo1在细胞外基质硬度上负调控肺癌细胞迁移

目的实体瘤组织细胞外基质(ECM)成分如胶原和弹性纤维沉积、交联,导致其ECM硬度增加。力敏感离子通道Piezo1在ECM硬度调控癌细胞功能中发挥重要作用。研究表明,Piezo1与大多数肿瘤的迁移呈正相关,但在肺癌中呈现负相关。体内癌细胞功能受化学和物理因素协同调控。但在单一物理性因素ECM硬度下,Piezo1如何调控肺癌细胞的迁移目前尚未知。本研究探究Piezo1在ECM硬度调控肺癌细胞A549迁移中的作用。方法PA胶制备生理和病理性ECM硬度,A549接种于其上,Western Blot检测Piezo1蛋白表达、Transwell检测细胞迁移、钙成像检测细胞内钙浓度变化,比较Yoda1激活或钌红阻断Piezo1前后、BAPTA-AM螯合细胞内钙后对A549迁移的影响。结果在生理性ECM上A549高表达Piezo1,将其阻断促进细胞迁移;在病理性ECM上低表达Piezo1,但其激活则抑制细胞迁移。钙浓度变化与此相反:在生理性ECM上A549钙浓度较高,Piezo1阻断降低细胞内钙浓度;在病理性ECM上A549钙浓度较低,Piezo1激活增加细胞内钙浓度。结论Piezo1直接介导A549细胞内钙浓度的变化,并且钙螯合实验证明:胞内钙浓度与A549迁移呈负相关,无论生理还是病理性ECM均促进A549迁移。因此,在病理性ECM上,低表达Piezo1减少了钙离子内流从而促进A549细胞的迁移。

金丝桃甙对钙离子内流的影响

研究表明，金丝桃甙（ＨｙＰ）对兔乳头肌模型，与维拉帕米（Ｖｅｒ）一样，呈剂量依赖性抑制ＣａＣｌ２诱发的正性肌力作用，使ＣａＣｌ２的量－效曲线显著右下移动，但不平行，可能系非竞争性拮抗；对豚鼠心室肌动作电位模型，Ｈｙｐ可显著缩短动作电位二相平台期，而对膜静息电位、动作电位零相上升幅度和速率及动作电位时程无明显影响；在小鼠心房组织标本上，Ｈｙｐ和Ｖｅｒ一样，可抑制高钾诱发的４５Ｃａ内流。上述结果提示Ｈｙｐ对钙内流有一定阻滞作用。

谷氨酸对神经元钙离子内流和凋亡的影响及谷氨酸受体拮抗剂保护作用的研究

目的 探讨兴奋性氨基酸谷氨酸介导神经元钙离子内流与诱导神经元凋亡间的关系。方法 体外培养新生大鼠皮质神经元 ,用原位末端标记技术显示凋亡细胞 ;用激光共聚焦方法来观察细胞内钙离子浓度变化 ;谷氨酸处理神经元造成兴奋性氨基酸毒性 ;用MK 80 1做保护研究。结果 体外培养 9d的大多数神经细胞 ,用 1mmol/L谷氨酸处理后 ,细胞内钙离子快速增加 ;谷氨酸处理后细胞死亡的形式主要是凋亡。预先用MK 80 1(10 μmol/L)可明显的减少由谷氨酸介导的钙离子反应 ,并且MK 80 1可同时减少谷氨酸诱导的细胞凋亡。结论 谷氨酸诱导的神经元钙离子内流与细胞凋亡有明显的关系 ,钙离子内流在与谷氨酸毒性导致的细胞凋亡中起重要作用。

补肾益智方对AD细胞模型钙离子内流、细胞骨架、细胞凋亡的影响

目的 :观察补肾益智方含药血清对AD(Alzheimer’sDisease)细胞模型钙离子内流、细胞骨架、细胞凋亡的影响。方法 :在神经母细胞瘤和神经胶质瘤杂交的NG10 8 15细胞培养液中加入预先老化 4d的Aβ2 5 35片段共同孵育 ,建立AD细胞模型。分别加入正常老年大鼠血清、补肾益智方高剂量含药血清和补肾益智方低剂量含药血清培养 4 8h后 ;应用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度 (Ca2 + )的变化情况 ;荧光显微镜观察细胞骨架的重组情况 ,流式细胞仪检测细胞的凋亡细胞。结果 :与正常大鼠血清加Aβ2 5 3 5组比较 ,高剂量补肾方含药血清组、低剂量补肾方含药血清组细胞内Ca2 + 浓度的相对荧光值明显降低 (P <0 0 1) ,而他们间两两比较则差异显著 (P >0 0 5 )。正常大鼠血清加Aβ2 5 3 5的NG10 8 15细胞组可以看到 ,细胞骨架严重解聚并向边缘扩散 ,细胞形态变性 ,还有细胞死亡现象 ;而高、低剂量补肾方含药血清组细胞骨架呈现微弱解聚现象 ,细胞形态正常 ,无变性和死亡现象。与正常大鼠血清加Aβ2 5 3 5组比较 ,高、低剂量补肾方含药血清组NG10 8 15细胞凋亡率明显减少 (P <0 0 1)。结论 :补肾益智方含药血清可以抑制细胞Ca2 + 内流 ,平衡控制细胞内Ca2 + 浓度 ;对Aβ引起NG10 8 15细胞骨架解聚、细胞变性等?

牛磺酸对大鼠培养心肌细胞感染病毒后钙离子内流的影响

观察牛磺酸对心肌细胞感染 ＣｏｘｓａｃｋｉｅＢ３病毒（ＣＶＢ３）后 Ｃａ２＋内流的影响。取新生 ＳＤ大鼠心室肌制备培养搏动心肌细胞， １８ ｈ后接种 １００ ＴＣＩＤ５０的 ＣＶＢ３作为实验性病毒性心肌炎模型，并采用放射性同位素４５Ｃａ２＋示踪技术，观察了 １～２０ ｍｍｏｌ／ Ｌ牛磺酸对正常及感染 ＣＶＢ３后心肌细胞 Ｃａ２＋内流的影响。结果：（ｌ）１０～２０ ｍｍｏｌ／ Ｌ牛磺酸对正常心肌细胞不同胞外 Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］０， ０．５、 １．５和 ４．０ ｍｍｏｌ／ Ｌ）下的 Ｃａ２＋内流均有抑制作用，而 １ｍｍｏｌ／ Ｌ牛磺酸只抑制高［Ｃａ２＋］０（４．０ ｍｍｏｌ／ Ｌ）时 Ｃａ２＋内流，对低［Ｃａ２＋］０（０．５ ｍｍｏｌ／ Ｌ）和正常［Ｃａ２＋］０（１．５ ｍｍｏｌ／ Ｌ）时 Ｃａ２＋内流无明显作用；（２） ｌ～２０ ｍｍｏｌ／ Ｌβ－丙氨酸对 Ｃａ２＋内流无明显影响；（３）感染ＣＶＢ３后Ｃａ２＋内流增加，加用１ｍｍｏｌ／ Ｌ牛磺酸后能减少感染ＣＶＢ３后的Ｃａ２＋内流。结论：牛磺酸具有抑制培养心肌细胞感染ＣＶＢ３后Ｃａ２＋内流的作用，这可能是牛磺酸能减轻ＣＶＢ３所致细胞损伤的机理之一。

硫化氢通过抑制镉离子内流降低拟南芥体内的镉毒性（英文）

硫化氢(H2S)作为一种新兴的气体信号分子,在植物体内主要由半胱氨酸脱巯基酶(CDes)降解半胱氨酸产生。已有报道表明,H2S信号与植物激素共同作用增强植物的镉(Cd)耐受。然而,H2S信号响应重金属Cd胁迫的作用机制尚缺乏系统研究。本文以拟南芥为实验材料,从不同水平探究H2S分子对Cd胁迫诱导氧化应激的保护作用。结果表明,CDes基因表达量和H2S的产率随CdCl2浓度升高而逐渐增加。重金属Cd胁迫导致幼苗干重降低约33%、体内过氧化氢显著增加、丙二醛含量升高约110%、超氧化物歧化酶活性增加约100%、谷胱甘肽还原酶活性和过氧化氢酶活性分别下降27%和21%,还原性谷胱甘肽含量随之显著降低。生理浓度NaHS(H2S供体)预处理显著缓解以上Cd胁迫产生的影响,使恢复到对照水平。同时,H2S处理可显著下调质膜中Cd转运蛋白(HMA4和IRT1)的表达,同时上调液泡膜中MRP3和CAX2的表达。利用非损伤微测技术测定植物根系Cd2+的流动速度和流动方向。结果显示,生理浓度的H2S显著抑制Cd2+内流,最终表现为植物叶片和根中的Cd含量显著降低,分别下降了15%和38.4%。总之,在Cd胁迫条件下,H2S信号可激活植物体内的抗氧化酶促和非酶促系统,以清除细胞内H2O2。H2S对Cd2+转运和液泡区式化的调节,降低了体内Cd2+的浓度,减小Cd毒性对植物生长的影响。为理解农作物应对重金属胁迫的机制提供了新的思路。

基质相互作用分子蛋白介导的钙池调控的钙离子内流与神经退行性疾病

神经元的钙离子内流主要依赖于电压门控钙通道和谷氨酸受体通道。最近研究表明,还存在另一种通过基质相互作用分子(STIM)蛋白介导的钙池调控的钙离子内流(SOCE)方式,这种方式在神经退行性疾病中发生变化,SOCE的恢复以及STIM蛋白表达的正常化可能为神经退行性疾病的治疗带来潜在的益处。本文对STIM蛋白介导的SOCE在神经元生理及神经退行性变的病理情况下的作用方式进行综述。

热休克蛋白90a通过增强钙库操作性钙离子内流活性促进肝癌细胞转移

目的探讨细胞外热休克蛋白90α(eHsp90α)对肝癌细胞转移的影响及机制。方法 Westernblot检测细胞培养基上清中eHsp90α的水平和细胞中基质相互作用分子1(STIM1)蛋白表达,Confocal检测钙库操作性钙离子内流(SOCE)活性,免疫荧光双染检测STIM1和ORAI1的相互作用水平,Transwell和划痕实验检测细胞转移能力。结果肝癌细胞系中e Hsp90α较正常肝细胞系LO-2显著增加;高度转移能力的MHCC87H和HCCLM3细胞中e Hsp90α水平、STIM1蛋白表达和SOCE活性较低转移能力的HepG2、HL-7702和SNU-449显著升高。hrHsp90α可以显著增加HepG2的转移能力、STIM1蛋白变化和SOCE活性。敲低STIM1蛋白表达或抑制SOCE活性,可以抑制MHCC87H的转移能力和hrHsp90α诱导的HepG2转移能力增加。结论eHsp90α可促进肝癌细胞的转移,其机制是通过诱导STIM1蛋白表达,进而增加SOCE活性。

Gd络阴离子进入人红细胞并影响CI^-内流的机制

用质子诱导X射线发射法测定人红细胞与Gd柠檬酸和乳酸络合物温育时，胞浆、细胞膜、膜脂和膜蛋白上Gd含量随时间的变化及阴离子通道抑制剂对Gd进入细胞的影响。结果表明，Gd络离子可以从膜上的阴离子通道摄入，但并不排除其他摄入方式。Gd进入红细胞是一双时相过程，在起始阶段有一部分Gd以快速反应与细胞膜结合，之后以慢过程释放，释放的Gd中一部分又逐渐进入细胞。Gd的络合物能促进氯离子内流，但不能促进钙离子内流。氯离子内流的增加可能与Gd的络合物在细胞膜诱导的"孔洞"结构和开启了阴离子通道相关。

酸敏感离子通道1a介导的钙离子内流在酸诱导的终板软骨细胞凋亡中的作用

椎间盘退行性疾病形成的关键因素之一是软骨终板退变.椎体软骨终板退变与椎间盘退变呈正相关,而终板软骨细胞是终板生理功能维持的关键.如何阻止软骨终板内软骨细胞损伤,将是预防软骨终板乃至整个椎间盘退变的关键.酸敏感离子通道1a （ASIC1a）是新发现的一类对酸敏感的阳离子通道,其主要通过介导钙离子内流发挥作用[1],在脑缺血等病理过程中发挥作用.我们前期研究结果显示ASICs在终板软骨细胞的表达[2].本实验旨在观察ASIC1 a介导的钙离子内流在酸诱导的终板软骨细胞凋亡中的作用.

哮喘与钙库操纵钙离子内流的关系研究进展

支气管哮喘是严重影响人类日常生活的慢性疾病之一，近年来全世界范围内儿童哮喘发病呈逐年上升的趋势，但目前哮喘的发生机制仍未十分明确。研究发现钙库操纵钙离子内流（store-operated calcium entry，SOCE）在机体生理活动中起着重要作用，在细胞生长中，SOCE活性的增强可以促进多种类型细胞的增殖、增生以及迁移，其中构成SOCE重要分子的基质相关作用因子1（stromal interaction mole—cule1，STIM1）和钙离子释放激活钙离子通道蛋白1（calcium release-activated calcium channel protein1，ORAI1）可能参与哮喘气道高反应性的发生及气道的重塑，与支气管哮喘的发生、发展有密切关系。

骨形态形成蛋白4增强大鼠远端肺动脉平滑肌细胞中的经典瞬间受体离子通道表达和钙池操纵性钙离子内流及基础钙水平

背景和目的：近期研究结果表明骨形态形成蛋白4（BMP4）在肺血管重塑中发挥重要作用，但其作用机制尚不明确。在我们的早期研究中已发现钙离子通过钙池操纵性钙离子通道（SOCC）内流可能是导致慢性缺氧性肺动脉高压的致病因素之一，

钙离子内流参与利妥昔单抗增强辐射诱导的Raji细胞凋亡

钙离子是细胞生命活动的重要信使，刺激B细胞受体可诱导细胞内钙库的损耗，导致质膜上调控钙库的钙通道激活。已经发现，随着游离钙离子稳态被打破以及CD20与其单克隆抗体（利妥昔单抗）偶联，可导致细胞凋亡。细胞转染CD20后，可增加钙离子通过质膜进入细胞内，证明CD20具有调节细胞周期进程和作为钙离子通道平衡细胞内外钙浓度的功能。在Ramos B细胞中，src家族蛋白酪氨酸激酶的CD20调节刺激提高了细胞内钙离子浓度，并且诱导了Caspase 3的活性。除此之外，利妥昔单抗诱导的CD20和脂筏的高亲和性是钙进入细胞和激活下游凋亡信号的先决条件，与B细胞抗原受体的表达密切相关。在淋巴瘤细胞系中，利妥昔单抗联合辐射能显著提高辐射诱导细胞凋亡，利妥昔单抗通过改变细胞程序性死亡相关蛋白的表达、提高细胞内ROS水平、调节细胞周期等提高淋巴瘤细胞的辐射敏感性。然而，钙离子是否参与辐射和CD20靶向诱导细胞死亡尚不明确。闵凤玲等的“Influx of extracellular calcium participates in rituximab-enhanced ionizing radiation-induced apoptosis in Raji cells”一文，研究了利妥昔单抗和X射线照射后，淋巴瘤细胞内钙离子水平变化与DNA双链断裂和辐射诱导细胞死亡的关系，探讨了利妥昔单抗在辐射诱导细胞死亡中的作用机制。

钙离子在牙釉质矿化中的作用

牙釉质的矿化形成是一个信号分子贯穿始终的过程,釉质矿化通过细胞内多种离子与信号通道的紧密调节和上皮与间充质的相互作用,最终使牙釉质成为人体中矿化程度最高、最硬的组织。Ca^(2+)作为细胞内重要的第二信使分子,在生物矿化中调节许多过程,其中就包括调节釉质蛋白的表达。在牙釉质的基本结构羟基磷灰石晶体中,约含有60%质量的Ca^(2+),由此可见Ca^(2+)是牙釉质的关键和必需成分。因此,Ca^(2+)的正常转运在牙釉质矿化过程中起着关键作用。

穿心莲通过阻滞电压调控的钙通道和抑制钙离子内流引起子宫松弛

穿心莲的粗提取物可预防狗因再灌注损伤引起的心肌缺血,该作用与其在心肌缺血再灌注过程中降低 Ca^(2+)超载有关。因而推测该植物可影响钙介导的收缩反应并引起平滑肌松弛。在该项研究中作者证实了穿心莲可阻滞电压调控的钙通道并抑制经雌二醇处理的大鼠子宫平滑肌 Ca^(2+)内流。实验用该植物的70%乙醇提取物(含6%穿心莲内酯)。SD

机械牵拉对培养人视网膜色素上皮细胞内钙离子的影响

目的:观察培养人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cells,RPEs)在受机械牵拉力时细胞内Ca^2+的变化。方法:将胶原包被的磁珠悬液加入培养人RPE细胞后孵育,附着磁珠的细胞放置在恒定磁场中,使用钙荧光指示剂fluo-3/AM和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察在机械牵拉作用的前后细胞内钙离子的变化情况。结果:RPE细胞荧光着色很强,遍布整个细胞,其中细胞核比细胞质更强。机械牵拉后荧光强度显著增强,加入氯化锰后迅速降低。EGTA预处理的细胞在受力后荧光强度增加不显著,加入氯化钙后明显增强。细胞松弛素D预处理的细胞在受力后荧光强度比正常组增高2倍以上。结论:机械牵拉能显著增加钙离子内流,并且增加细胞内的钙库释放。钙离子内流可能是RPE细胞损伤前的信号。

依托咪酯对大脑皮质突触体钙离子通道亚型的作用

目的 研究依托咪酯对大鼠大脑皮质突触体上不同钙通道的作用 ,探讨其抑制突触体内钙离子浓度升高可能涉及的钙离子通道亚型。方法 利用SD大鼠新鲜分离的大脑皮质突触体为研究对象 ,以KCl作为化学刺激剂去极化 ,采用荧光分光光度法测定依托咪酯 10 0mmol/L单用或与钙通道阻断剂合用的情况下对KCl诱发的突触体内钙离子浓度升高的影响。结果 P/Q型钙通道约占突触体钙内流的 5 0 % ,N型钙通道约占 2 0 % ,而L型钙通道不影响KCl诱发的突触体内钙离子浓度的升高。P/Q型钙通道阻断剂ω agatoxinIVA在单用或及与加入依托咪酯 10 0 μmol/L合用后对钙内流抑制作用没有差异 ,而L或N型钙通道阻断剂在加入依托咪酯后抑制钙内流作用增加。结论 P、N型钙通道在神经末梢去极化后钙离子内流中起主要作用。依托咪酯抑制高浓度KCl刺激引起的突触体内钙离子浓度升高可能与阻断P型 (可能还包括Q型 )钙离子通道有关。

环维黄杨星D对心肌钙离子通道的作用

目的 研究环维黄杨星 D(CVB D)对心肌钙离子通道的作用 ,探讨其抗心律失常的电生理机制。方法 取豚鼠室间隔标本 ,37℃恒温 ,通混合氧 ,稳定 4 5min ,再以KCl 3mol/L灌充的微电极记录电刺激产生的动作电位 (AP) ,标本分为 3组 :(1)CVB D组 :每 5min依次累积加入浓度为 3× 10 -8,1× 10 -7,3× 10 -7,1×10 -6,3× 10 -6,1× 10 -5mol/L的CVB D ,分别记录AP ;(2 )CVB D +维拉帕米 (Ver)组 :加入维拉帕米 0 .1μmol/L ,10min时记录AP ,然后每 5min依次累积加入浓度为 3× 10 -8,1× 10 -7,3× 10 -7,1× 10 -6,3× 10 -6,1× 10 -5mol/L的CVB D ,分别记录AP ;(3)Ver组 :加入维拉帕米 0 .1μmol/L ,分别纪录 (2 )中相应时间点的AP。统计给药前后AP幅度 (APA)和时程 (APD)的变化。结果 CVB D对APA影响不大 ,但能显著延长APD ,延长幅度随着剂量的加大而增大 ;但在有维拉帕米存在的情况下 ,CVB D却能使APA和APD缩减 ,尤其是较高浓度1× 10 -6,3× 10 -6,1× 10 -5mol/L时 ,缩减幅度较为明显 ;而单纯加入维拉帕米后 ,APA和APD的改变轻微。结论 CVB D能影响细胞膜上的钙离子通道 ,促进细胞外钙离子内流 ,从而延长APD。当膜钙离子通道被阻断后 ,CVB D却缩短APD。因此可以认为CVB D除影响膜钙离子通道外 。