代谢型谷氨酸受体亚型1基因在锂—匹罗卡品致痫大鼠齿状回中的长期高表达

目的:观察锂-匹罗卡品诱导的癫痫大鼠模型海马结构中代谢型谷氨酸受体亚型1(mGluRl)mRNA的动态表达变化。方法:用地高辛标记的多相寡核苷酸探针通过原位杂交方法检测海马各个区域在7d、14d和28d时mGluRlmRNA的表达。结果:在上述3个时间点齿状回mGluRlmRNA的表达明显上调,而在海马CA1区仅7d时可见mGluRl mRNA的相对上调,其余时间点无明显变化。结论:本研究提示锂-匹罗卡品癫痫模型齿状回mGluRl mRNA表达长期上调可能与海马结构的重塑和癫痫易感性形成有关。

南极独角雪冰鱼与尼罗罗非鱼Grik1基因的克隆及其在低温胁迫下的作用比较

为了探究南极独角雪冰鱼(Chionodmco hamatus)和尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)离子型谷氨酸受体海人藻酸亚型1基因(glutamate ionotropic receptor kainate type subunit 1,Grik1)在低温胁迫下对细胞凋亡的影响,采用RT-PCR法克隆得到体质量约为500 g的南极独角雪冰鱼和尼罗罗非鱼Grik1基因,分别命名为ChGrik1和OnGrik1,并将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)上构建pcDNA3.1-ChGrik1和pcDNA3.1-OnGrik1过表达载体,对293T细胞系进行转染,24 h后在不同温度(37、28、18、8℃)下对细胞处理48 h,然后用流式细胞仪检测不同温度下转染不同质粒的细胞凋亡情况。结果表明:低温胁迫诱导293T细胞凋亡,8℃时最显著,凋亡率达到92.43%±0.46%(P<0.05);过表达ChGrik1或OnGrik1基因相比空载组均能显著降低细胞凋亡率2%~5%(P<0.05);进一步对8℃低温胁迫48 h的细胞进行转录组测序分析显示,空载组有1346个差异表达基因,过表达ChGrik1和OnGrik1基因组均会减少受低温胁迫的差异表达基因数目,分别为722个和1053个,同时还改变了与细胞凋亡相关基因的表达趋势,如NUPR1、STC2和CHAC1等基因由下调变为上调,HSP等基因由上调变为下调。研究表明,南极独角雪冰鱼和尼罗罗非鱼的生存温度差异较大,但两者的谷氨酸受体基因Grik1功能类似,均能通过减少细胞凋亡来应对低温胁迫。

大鼠代谢型谷氨酸受体1亚型基因片段的克隆及其在小脑的表达

目的 克隆大鼠代谢型谷氨酸受体 1亚型 (mGluR1 )基因特异片段 ,制备cRNA探针。方法 从Wistar大鼠小脑中提取总RNA ,以RT PCR方法得到预期的 599bp条带 ,将这一片段克隆到pGEM Teasy载体上 ,经酶切鉴定正确后送测序。将重组质粒经限制性内切酶酶切制备成线性模板 ,通过体外转录的方法合成地高辛标记的mGluR1cRNA正义及反义探针。取成年Wistar大鼠小脑组织进行原位杂交实验 ,以检测探针的可靠性。结果 测序证实用RT PCR的方法获得了mGluR1基因特异片段 ,成功地构建了pGEM TmGluR1重组质粒。根据斑点杂交实验结果计算出正义、反义探针浓度分别为 1 0ng/ μl及 30ng/ μl。原位杂交实验的结果显示 ,用mGluR1反义探针进行杂交的阳性信号主要分布在大鼠小脑蒲肯野氏细胞胞浆 ,用正义探针杂交无阳性信号。结论 本实验克隆了mGluR1基因特异片段 ,并制备了cRNA探针 ,用大鼠小脑进行的原位杂交实验显示 ,此探针灵敏度高 。