稳定同位素标记结合Nano SIMS亚细胞成像技术分析化合物在微生物体内代谢活性研究

本研究选用前期从受污染土壤中筛选出来的多环芳烃高效降解菌BDG-3为研究对象,以^(13)C^-葡萄糖为底物对其进行培养,并利用Nano SIMS亚细胞成像技术对稳定同位素13 C标记的化合物在菌体内的代谢活性进行分析.将降解菌BDG-3养在含有13 C标记的葡萄糖培养基中,对选中的研究区域内质量数为12、13、16、26的信号进行收集,分别用于表征^(12)C^-、^(13)C^-、^(16)O^-和^(26)(^(12)C1^(14)N)^-离子的信号及分布特征.利用Image J软件处理并分析数据.单菌体切面内各元素的分布有一定规律,存在明显的峰值点.以选定的线域为ROI研究对象,^(13)C^-、^(16)O^-和^(26)(^(12)C^(14)N)^-离子变化趋势接近,在横坐标为10附近达到峰值,含量最高的是^(26)(^(12)C^(14)N)^-.以单一菌体为ROI研究对象,以13 C^-葡萄糖为底物生长出的BDG^-3内单菌体内部^(13)C含量平均值(54.38)远高于以^(12)C葡萄糖为底物的单菌内部^(13)C的信号(5.59).研究结果表明菌体可以吸收13 C^-葡萄糖,用于自身的生长,代谢活性良好.通过对该种方法学的探索,为进一步研究更为复杂的环境污染物质在微生物体内的降解代谢过程提供了一种新的可靠的分析手段.

胃癌AGS细胞内pH值的测定及酸性环境对其增殖和凋亡的影响

目的:测定胃癌AGS细胞内pH(intracellular pH,pHi),探讨细胞外酸性环境对AGS细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用离子成像分析系统测定AGS细胞的pHi,MTT及流式细胞术分别检测培养环境pH值为6.0时AGS细胞的活力、细胞周期和凋亡。结果:AGS细胞内pH明显碱化,在pH值为6.0的酸性环境培养时,细胞活力在12小时内明显抑制,细胞停滞在S和G2/M期,细胞凋亡不明显。结论:胃癌细胞AGS明显碱化,pH值为6.0的酸性环境使细胞数量减少和活力下降,其机制是使细胞出现增殖抑制而与凋亡无关。