目的 本研究旨在探讨细胞外基质刚度变化对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的影响及其作用机制。方法 本研究基于成功构建脊髓损伤大鼠模型,并制备不同刚度(0.7 k Pa、40 k Pa)的聚丙烯酰胺凝胶基底,将大鼠原代NSCs于不同刚度...目的 本研究旨在探讨细胞外基质刚度变化对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的影响及其作用机制。方法 本研究基于成功构建脊髓损伤大鼠模型,并制备不同刚度(0.7 k Pa、40 k Pa)的聚丙烯酰胺凝胶基底,将大鼠原代NSCs于不同刚度基底上培养。压电型机械敏感离子通道组件1 (piezo type mechanosensitive ion channel component 1,Piezo1) sh RNA质粒转染NSCs细胞。免疫荧光染色检测神经元标志物双皮质醇(doublecortion,DCX)和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性细胞百分比。免疫组织化学及蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测损伤组织及NSCs细胞中Piezo1蛋白的表达水平。结果 与0.7 k Pa基质刚度组相比,40 k Pa基质刚度组中DCX阳性细胞数增加,而GFAP阳性细胞数减少,Piezo1蛋白表达量上升。脊髓损伤大鼠损伤组织Piezo1蛋白表达显著高于空白对照(sham)组。40 k Pa基质刚度条件下沉默Piezo1后,DCX阳性细胞数减少,而GFAP阳性细胞数增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。机制研究发现,沉默Piezo1导致IV型胶原及纤连蛋白表达下降。重组纤连蛋白逆转了Piezo1 sh RNA对NSCs分化的影响,即DCX阳性细胞数增加,而GFAP阳性细胞数减少。结论 综上可见,硬基底刚度通过促进Piezo1蛋白表达,上调IV型胶原及纤连蛋白表达,从而调控NSCs细胞分化。本研究为基于生物材料治疗脊髓损伤提供了新的视角。展开更多
目的制备猫爪草提取物离子敏感型原位凝胶,并对其灭菌工艺、溶蚀率、粘度、最佳Ca2+浓度、体外释药行为进行考察。方法以海藻酸钠作为辅料,猫爪草提取物(10%乙醇作为溶剂),在室温下磁力搅拌使其充分溶胀,采用智能溶出试验仪、粘度仪和...目的制备猫爪草提取物离子敏感型原位凝胶,并对其灭菌工艺、溶蚀率、粘度、最佳Ca2+浓度、体外释药行为进行考察。方法以海藻酸钠作为辅料,猫爪草提取物(10%乙醇作为溶剂),在室温下磁力搅拌使其充分溶胀,采用智能溶出试验仪、粘度仪和流变仪等分别对灭菌工艺、溶蚀率、粘度、最佳Ca2+浓度、体外释药行为等原位凝胶的性质进行表征。结果 1%海藻酸钠离子敏感型原位凝胶采用先制备凝胶再高压灭菌的工艺对溶蚀率和小毛茛内酯含量影响最小[溶蚀率为(52.13±4.17)mg/(cm2·h)、小毛茛内酯含量为(1.23±0.18)%],此方法制备的原位凝胶粘度为1.49±0.18(Pa·s)、最佳Ca2+浓度为1ml原位凝胶:10-5mol Ca Cl2,采用Franz扩散池测定体外释放速率可知12h小毛茛内酯的累积释放率为91.46%,分别用不同的数学模型对各时间点累积释放量进行处理可知其释药规律符合Weibull方程,拟合方程为ln[-1/(1-Q)]=-0.3618lnt-1.7174(r=0.9931)。结论采用海藻酸钠作为猫爪草提取物离子敏感型原位凝胶的载体,其凝胶性质良好,体外释药缓慢,可为中药治疗肺结核提供一种新型的缓释制剂。展开更多
目的:观察强筋壮骨祛风合剂对髓核致炎大鼠背根神经节中3型酸敏感离子通道(acid-sensing ion channel 3,ASIC3)的影响。方法:选取40只清洁级成年雄性SD大鼠,随机分为空白组、假手术组、模型组、阿米洛利组和中药组,每组8只。除空白组外...目的:观察强筋壮骨祛风合剂对髓核致炎大鼠背根神经节中3型酸敏感离子通道(acid-sensing ion channel 3,ASIC3)的影响。方法:选取40只清洁级成年雄性SD大鼠,随机分为空白组、假手术组、模型组、阿米洛利组和中药组,每组8只。除空白组外,其余各组大鼠均手术暴露L5背根神经节。假手术组暴露L5背根神经节后直接缝合切口;模型组和中药组取出大鼠尾部的髓核组织置于暴露的L5背根神经节上,缝合切口;阿米洛利组将取自大鼠尾部的髓核组织置于暴露的L5背根神经节上,并在暴露的L5背根神经节周围滴入含0.1 mg盐酸的阿米洛利药液1 m L,缝合切口。自造模后第1天开始,中药组按5 m L·kg-1以强筋壮骨祛风合剂灌胃,每天2次,连续30 d;空白组、假手术组、模型组不进行药物干预。分别于造模前1 d及造模后3、5、9、15、23、29 d,采用Up-Down法测定大鼠左后足50%机械刺激缩足阈值(50%paw withdrawal threshold,50%PWT)。中药组药物干预结束后,处死所有大鼠,取出L5背根神经节分成2份,一份采用免疫组织化学法计算ASIC3阳性面积,另一份采用Western Blot技术检测ASIC3蛋白表达量。结果:造模后3 d内,模型组、阿米洛利组和中药组均有部分大鼠出现左后足外翻以及足趾背伸现象。造模前后不同时间50%PWT的差异有统计学意义,即存在时间效应(F=50.132,P=0.000)。5组50%PWT总体上比较,组间差异有统计学意义,即存在分组效应(F=288.219,P=0.000)。除造模前1 d时外(F=0.332,P=0.854),造模后各时点5组大鼠50%PWT比较,组间差异均有统计学意义(F=288.015,P=0.000;F=308.588,P=0.000;F=374.945,P=0.000;F=560.713,P=0.000;F=343.043,P=0.000;F=459.914,P=0.000);造模后各时点模型组的50%PWT均低于空白组、假手术组、阿米洛利组和中药组(P=0.010,P=0.011,P=0.001,P=0.001;P=0.023,P=0.022,P=0.000,P=0.004;P=0.013,P=0.013,P=0.003,P=0.001;P=0.012,P=0.002,P=0.002,P=0.002;P=0.004,P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.003,P=0.005,P=0.003,P=0.013);造模后各时点空白组和假手术组50%PWT比较,差异均无统计学意义(P=0.640,P=0.710,P=0.590,P=0.480,P=0.330,P=0.390);造模后各时点阿米洛利组50%PWT均高于中药组(P=0.021,P=0.011,P=0.013,P=0.002,P=0.001,P=0.005)。时间因素与分组因素存在交互效应(F=2.358,P=0.002)。5组大鼠背根神经节中ASIC3阳性面积和ASIC3蛋白表达量比较,组间差异均有统计学意义(F=205.890,P=0.030;F=101.740,P=0.001);空白组、假手术组、阿米洛利组和中药组背根神经节中ASIC3阳性面积和ASIC3蛋白表达量均小于模型组(P=0.004,P=0.003,P=0.001,P=0.007;P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000);阿米洛利组背根神经节中ASIC3阳性面积和ASIC3蛋白表达量均大于中药组(P=0.001;P=0.000)。结论:强筋壮骨祛风合剂可以降低髓核致炎大鼠病变的背根神经节中ASIC3的水平,提高大鼠的疼痛阈值,但其作用效果不及盐酸阿米洛利。展开更多
文摘目的 本研究旨在探讨细胞外基质刚度变化对神经干细胞(neural stem cells,NSCs)分化的影响及其作用机制。方法 本研究基于成功构建脊髓损伤大鼠模型,并制备不同刚度(0.7 k Pa、40 k Pa)的聚丙烯酰胺凝胶基底,将大鼠原代NSCs于不同刚度基底上培养。压电型机械敏感离子通道组件1 (piezo type mechanosensitive ion channel component 1,Piezo1) sh RNA质粒转染NSCs细胞。免疫荧光染色检测神经元标志物双皮质醇(doublecortion,DCX)和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性细胞百分比。免疫组织化学及蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测损伤组织及NSCs细胞中Piezo1蛋白的表达水平。结果 与0.7 k Pa基质刚度组相比,40 k Pa基质刚度组中DCX阳性细胞数增加,而GFAP阳性细胞数减少,Piezo1蛋白表达量上升。脊髓损伤大鼠损伤组织Piezo1蛋白表达显著高于空白对照(sham)组。40 k Pa基质刚度条件下沉默Piezo1后,DCX阳性细胞数减少,而GFAP阳性细胞数增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。机制研究发现,沉默Piezo1导致IV型胶原及纤连蛋白表达下降。重组纤连蛋白逆转了Piezo1 sh RNA对NSCs分化的影响,即DCX阳性细胞数增加,而GFAP阳性细胞数减少。结论 综上可见,硬基底刚度通过促进Piezo1蛋白表达,上调IV型胶原及纤连蛋白表达,从而调控NSCs细胞分化。本研究为基于生物材料治疗脊髓损伤提供了新的视角。
文摘目的制备猫爪草提取物离子敏感型原位凝胶,并对其灭菌工艺、溶蚀率、粘度、最佳Ca2+浓度、体外释药行为进行考察。方法以海藻酸钠作为辅料,猫爪草提取物(10%乙醇作为溶剂),在室温下磁力搅拌使其充分溶胀,采用智能溶出试验仪、粘度仪和流变仪等分别对灭菌工艺、溶蚀率、粘度、最佳Ca2+浓度、体外释药行为等原位凝胶的性质进行表征。结果 1%海藻酸钠离子敏感型原位凝胶采用先制备凝胶再高压灭菌的工艺对溶蚀率和小毛茛内酯含量影响最小[溶蚀率为(52.13±4.17)mg/(cm2·h)、小毛茛内酯含量为(1.23±0.18)%],此方法制备的原位凝胶粘度为1.49±0.18(Pa·s)、最佳Ca2+浓度为1ml原位凝胶:10-5mol Ca Cl2,采用Franz扩散池测定体外释放速率可知12h小毛茛内酯的累积释放率为91.46%,分别用不同的数学模型对各时间点累积释放量进行处理可知其释药规律符合Weibull方程,拟合方程为ln[-1/(1-Q)]=-0.3618lnt-1.7174(r=0.9931)。结论采用海藻酸钠作为猫爪草提取物离子敏感型原位凝胶的载体,其凝胶性质良好,体外释药缓慢,可为中药治疗肺结核提供一种新型的缓释制剂。