氟氏链霉菌离子束注入突变谱的分析

用低能N+离子束注入转谷氨酰胺酶产生菌氟氏链霉菌后,通过试验,初步确定了注入的效应曲线,获得了一系列突变菌株。提取原始菌株和突变菌株的DNA,采用PCR反应分段扩增出转谷氨酰胺酶基因进行单链构象多态性分析(SSCP),并将特异性条带克隆测序进行基因突变型的鉴定,分析离子束注入引起链霉菌基因的基因突变类型及特点。结果显示:碱基变异的类型包括转换、颠换和缺失。在检测到的24个碱基突变中,主要是碱基的置换(87.5%),碱基缺失的比例比较小(12.5%)。在碱基置换中,转换的频率(58.3%)高于颠换的频率(29.2%)。转换主要以C→T,A→G为主,颠换以G→T,C→G为主。此外构成DNA的4种碱基均可以被离子束辐照诱发变异,其中胞嘧啶发生突变的频率较高。

大肠杆菌离子束诱变及rpoB基因两个新的利福平抗性位点鉴定

以6 0 Co γ射线辐照为参照体系 ,研究了低能氮离子诱发大肠杆菌利福平抗性突变。结果表明 ,低能氮离子注入具有损伤轻而突变率较高的特点。碱基置换型突变与其检出频率分析表明 ,CG→TA、GC→AT、AT→GC转换与AT→TA颠换为低能氮离子诱发大肠杆菌活体细胞内的高频突变 ,占检出总突变数的 87 5 % ( 77 88)。并鉴定出大肠杆菌rpoB基因中两个新的利福平抗性决定位点。位点一位于 1 5 5 1位鸟嘌呤脱氧核苷酸 (dG)被胞嘧啶脱氧核苷酸(dC)取代 ,导致Gln5 1 7(谷氨酰胺残基 )被His (组氨酸 )替代 ;位点二位于 1 692的胞嘧啶脱氧核苷酸 (dC)被胸腺嘧啶脱氧核苷酸 (dT)替代 ,导致Pro5 64(脯氨酸残基 )被Leu (亮氨酸 )取代 ,使突变子产生抗性。其中位点一还未见报道 ,位点二的同义突变已有报道 ,但 1 692位点C到T的核苷酸突变并没有得到鉴定。