糖尿病冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道开放概率及蛋白表达的变化

目的研究糖尿病对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道(BK通道)开放概率(NP0)及蛋白表达的影响,探讨糖尿病冠状动脉损伤的分子机制。方法采用链脲霉素腹腔内注射建立糖尿病大鼠动物模型,成功建立20只糖尿病大鼠动物模型作为糖尿病组;对照组(n=20)相应注射生理盐水。酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,单通道膜片钳实验技术记录大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流;采用Western blot实验方法测定大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道亚基的蛋白表达。结果在电极外液钙离子浓度为1μmol/L,刺激电位为0,20,40,60,80,100和120 mV条件下,糖尿病组冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0明显低于对照组(P<0.05)。如刺激电位为120 mV时,对照组和糖尿病组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0分别为1.210 5±0.048 1(n=5)和0.5217±0.1346(n=5);与对照组比较,糖尿病组BK通道α亚基蛋白表达无差异(P>0.05),但β1亚基蛋白表达下降了63%(P<0.05)。结论糖尿病冠状动脉平滑肌细胞BK通道β1亚基表达下调、BK通道NP0降低可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因。

视网膜动脉平滑肌细胞中大电导钙离子激活钾通道电流和钙离子浓度变化对糖尿病视网膜动脉收缩的影响

背景糖尿病视网膜病变（DR）是常见的视网膜微血管并发症，视网膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道（BK）是调节血管舒缩和血液动力的主要因素。目前关于视网膜动脉平滑肌细胞（RASMCs）上BK通道的功能变化在DR形成中的作用鲜有研究报道。目的研究正常及糖尿病模型大鼠RASMCs中BK通道电流、钙离子浓度及不同钙离子浓度下BK通道开放概率（NP0）的变化，探讨DR早期的血管损伤机制。方法采用随机数字表法将50只SPF级8～12周龄SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组，糖尿病模型组40只大鼠腹腔内注射60mg／kg链脲佐菌素（STZ）法制作1型糖尿病模型，正常对照组大鼠10只同法注射枸橼酸钠溶液。采用酶消化法分离大鼠RASMCs，应用全细胞膜片钳技术记录大鼠RASMCs中BK通道电流；采用荧光探针法测定大鼠RASMCs内钙离子浓度；采用膜内向膜外型单通道膜片钳技术记录不同钙离子浓度条件下RASMCs中BK单通道NP。的变化。结果36只大鼠糖尿病造模成功，造模成功率为90％。刺激电压大于60mV时，糖尿病模型组大鼠RASMCs中BK通道电流密度明显下降，刺激电压为100mV时，正常对照组和糖尿病模型组大鼠RASMCsBK通道电流分别为（100±23）PA／PF和（50＋7）PA／PF，差异有统计学意义（t=19．80，P〈0．05）。当加入BK通道特异性阻滞剂非洲蝎毒素100nmol后，正常对照组的BK通道电流明显减弱，而糖尿病模型组BK通道电流无明显变化；正常对照组和糖尿病模型组大鼠RASMCs内钙离子浓度分别为（123±11）nmol／L和（255±10）nmol／L，差异有统计学意义（t=32．50，P〈0．05）。在刺激电位为60mV条件下，随着钙离子浓度增加，BK通道NP。增加，差异有统计学意义（F=15．28，P〈0．05）。结论糖尿病模型大鼠RASMCs中BK通道电流下降，细胞内钙离子浓度升高，BK单通道NP0下降。BK通道功能改变可能是导致糖尿病时视网膜动脉异常收缩的主要原因之一。

ω-3多不饱和脂肪酸对大电导钙离子激活钾通道的影响

ω-3多不饱和脂肪酸主要包括二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸,二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸经细胞色素P450环氧化酶代谢可分别生成环氧二十碳四烯酸和环氧二十二碳五烯酸。环氧二十二碳五烯酸和环氧二十碳四烯酸可激活大电导钙离子激活钾通道,这可能是ω-3多不饱和脂肪酸扩张血管和降低血压的机制。

丙酮酸激酶的离子激活

丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK,EC2.7.1.40)又称三磷酸腺苷、丙酮酸2-O-磷酸转移酶,是调节糖酵解的3个限速酶之一。PK在有锰离子和镁离子存在情况下催化磷酸烯醇式丙酮酸生成丙酮酸,这一原理被用来测定血清钾离子浓度。为了证实PK活性与血清阳离子之间的关系,特别是确定与此酶活性有关的无机离子,我们进行了PK的离子激活研究,测定钾、钠、钙、锂、锰、氨和镁7种离子对PK活性的影响。由于PK的反应产物丙酮酸并不能直接指示PK活性,因而需偶联LDH系统,通过测定NADH的衰减程度来间接指示PK活性。

线粒体大电导钙离子激活钾通道的研究进展

线粒体由内外两层膜封闭而成，其中线粒体内膜作用极为重要，呼吸链蛋白复合体附着于线粒体内膜，同时于此完成其生理功能。目前，线粒体内膜已鉴定出多种钾离子通道蛋白，如线粒体选择性钾离子通道。

腺苷三磷酸对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道的作用

冠状动脉平滑肌细胞膜上存在许多大电导钙离子激活钾通道(BK通道),该通道具有电压依赖性和钙敏感性。研究发现,腺苷三磷酸可通过激活非选择性阳离子门控通道P2X受体使细胞外钙离子内流增加,也可以通过G蛋白偶联受体P2Y使细胞内三磷酸肌醇敏感钙库释放钙离子,升高细胞内钙浓度,从而激活BK通道,起到扩张冠状动脉的作用。

前列腺癌组织钙离子激活氯离子通道蛋白7的表达及其与术后生化复发的关系探讨

目的探讨前列腺癌组织钙离子激活氯离子通道蛋白7(ANO7)的表达及其与术后生化复发的关系。方法回顾性选取空军军医大学第一附属医院于2014年3月至2018年4月收治的168例行根治性切除术治疗的前列腺癌患者作为研究对象。采用免疫组化法检测患者的前列腺癌组织与癌旁组织ANO7的表达情况,并根据根治术后3年内生化复发情况将患者分为生化复发组(n=30)与未生化复发组(n=138),分析前列腺癌组织ANO7的阳性表达与患者术后生化复发的关系。结果前列腺癌组织ANO7的阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05);生化复发组前列腺癌组织ANO7的阳性表达率低于未生化复发组(P<0.05);临床分期、术前血清前列腺特异性抗原(PSA)水平、标本Gleason评分、手术切缘是否阳性,有无包膜侵犯、精囊侵犯、神经周围侵犯、血管侵犯,以及前列腺癌组织ANO7表达均是前列腺癌患者术后生化复发的影响因素(P<0.05)。结论前列腺癌组织ANO7呈低表达,且ANO7阳性表达是前列腺癌患者术后发生生化复发的保护因素。

钙离子激活钾通道与肺动脉高压的研究进展

肺动脉高压(Pulmonary arterial hypertension,PAH)是一种难治性疾病,所有肺动脉高压的发生都表现为肺血管阻力增加和肺血管重构,最终导致右心室衰竭乃至过早死亡。据报道,钙离子激活性钾离子通道(KCa)在介导缺氧性肺血管收缩反应(Hypoxic pulmonary vasoconstriction,HPV)和心血管疾病中发挥重要作用。该文对近年来有关钙离子激活钾通道与肺动脉高压的研究进展作一总结。

自变频激光晶体稀土离子激活的稀土钼酸盐

本发明涉及晶体材料领域，它阐述一类新型高非线性光学系数的自变频激光晶体Re^3＋：Re2（MoO4）3（Re=Nd，Y，La,……Yb稀土离子）。具有无心对称的正交晶系结构的Re2（MoO4），（Re=Y，La，Ce，Pr等稀土元素）晶体材料具有良好的物理化学性能，它们的倍频系数与LiNbO3相当，是KDP的3—5倍，

中电导钙激活钾离子通道在心脑血管疾病中的研究进展

在非传染性疾病中,心血管疾病(CVD)是导致死亡的主要原因。根据2023年更新的美国心脏学会报告,2017~2020年全球心血管疾病的患病率高达48.6%[1]。在中国,CVD的患病率和死亡率逐年上升,给社会带来巨大的经济负担。因此,心血管疾病的机制研究及诊治具有重要意义。

Anoctamin家族中钙激活氯离子通道调节剂筛选及应用研究进展

钙激活氯离子通道(CaCC)是一类能通过胞内钙离子激活转运氯离子的通道蛋白,其主要在神经元和肌细胞中参与调节膜电位、细胞内钙平衡和细胞兴奋性等重要的生理作用。Anoctamin(Ano)家族中Ano1是最经典的CaCC,Ano1的靶向调节剂对癌症、囊性纤维化、高血压、腹泻和哮喘等疾病具有潜在治疗作用。自2008年Ano1首次被发现后,先后出现了多种CaCC特异性调节剂的筛选方法,主要包括基于荧光蛋白的高通量初级筛选、电生理膜片钳技术和虚拟筛选,进而发现了多种药理学作用不同的小分子调节剂。本文综述了目前较为主流的筛选方法的原理和优缺点,并对迄今发现的Ano1特异性调节剂的化学结构和潜在的应用进展进行综述。

小电导钙离子激活钾通道与心律失常的发生机制

钙离子激活钾通道（Ca2-activated K＋channels,KCa）是一大类钾离子通道的总称,根据通道电导大小分为3种类型：大电导钙离子激活钾通道（large conductance KCa,BK通道）、中电导钙离子激活钾通道（intermediate conductance KCa,IK通道）、小电导钙离子激活钾通道（small conductance KCa,SK通道）.其中,SK通道在人体许多组织中分部广泛,包括脑、外周神经、骨骼肌、平滑肌、心房肌和心室肌等.自发现SK通道在心肌细胞上的存在以来,其与心律失常发生的机制一直为研究热点.本文主要综述心肌细胞SK通道的基本电生理特性及与心律失常的发生机制.

大电导钙离子激活钾通道与高血压关系的研究进展

高血压是心力衰竭、卒中和心肌梗死等心脑血管疾病的主要危险因素之一.血压水平主要与心输出量和外周血管阻力有关,当外周血管阻力增加时血压升高,而外周血管阻力增加与血管平滑肌细胞膜上离子通道开放和关闭密切相关,因此血管平滑肌细胞膜上离子通道异常在高血压的发生、发展中起重要作用,其确切机制尚不明确.近年,许多研究表明大电导钙离子激活钾通道（BKCa通道）异常表达与高血压的发生发展有关[,本文对BKCa通道特性、高血压时BKCa通道改变及BKCa通道作为高血压治疗新靶点的研究进行综述.

冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道电流的特点

目的探讨正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道（BK通道）电流的特点，为研究疾病状况下冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流异常变化提供正常对照。方法酶消化法分离大鼠冠状动脉平滑肌细胞；采用不同阻滞剂，对冠状动脉血管平滑肌细胞上钾通道进行鉴定；采用全细胞和单通道膜片钳实验技术分别记录冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流，计算开放幅度和电导，观察BK通道电压敏感性和钙敏感性及加入特异性BK通道阻滞剂IBTX后BK通道电流的变化。结果正常冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流约占总钾离子流65％±4％（t／,=12），BK通道电导为（258±42）pS（n=6），在刺激电位150mV时，电流密度为（275±40）pA／pF（n=8）；在电极外液钙离子浓度为1μmol／L，刺激电位为0、20、40、60、80、100、120、140和160mV条件下，BK通道开放概率（NP0）分别为0、0．0002、0．0016±0．0005、0．0283±0．0081、0．05694±0．0102、0．3533±0．0514、1．4922±0．1578、2．5975±0．3632和4．6041±0．7834（P〈0．05，n=5）；在刺激电位60mV，电极外液钙离子浓度为0、0．001、0．01、0．1、1、10、50和100μmol／L条件下，BK通道NP。分别为0、0．0001、0．0031±0．0008、0．0042±0．0090、0．0808±0．0105、0．7591±0．1274、2．7242±0．4612和3．2366±0．5728（P〈0．05，n=6）。结论BK通道广泛分布于冠状动脉平滑肌细胞上，具有电压敏感性和钙敏感性，对冠状动脉血管张力调节起重要作用。

糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞中大电导钙离子激活钾通道电流和钙离子浓度变化

目的探讨糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞中大电导钙离子激活钾通道(BK通道)电流及钙离子浓度的变化。方法 40只SD大鼠随机均分为正常对照组(A组)和糖尿病组(B组)。采用链脲霉素腹腔内注射建立糖尿病大鼠模型,酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,全细胞膜片钳实验和荧光测定方法分别检测冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流和钙离子浓度。结果与A组相比,当刺激电压大于60mV时,B组冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流密度明显下降(P<0.05);A组冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度明显低于B组[(103±23)nmol/L vs.(193±22)nmol/L](P<0.05)。结论冠状动脉平滑肌细胞中BK通道电流下降及细胞内钙离子浓度升高可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因。

心肌钙离子激活钾通道的研究进展

钙离子激活的钾通道(KCa)广泛分布于神经组织,近10年研究发现KCa在心脏组织中呈差异性分布,并对心肌动作电位的形成具有重要作用.KCa将钙信号转变为膜电位改变,不仅影响心肌复极,对房性心律失常及传导系统自律性和传导性均有影响.KCa阻滞剂可能成为抗心律失常的治疗靶点,为临床心律失常的治疗提供新视角.

超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4在大鼠心肌成纤维细胞和心肌细胞中的表达

目的:探讨超极化激活环核苷酸门控阳离子通道4(HCN4)在大鼠体内和体外心肌成纤维细胞、心肌细胞中的表达分布及其增龄变化。方法:SD大鼠分为新生组(1~3 d),成年组(17个月)和老年组(22个月),每组8只,其中4只用于冰冻切片,另4只用于PCR;取新生SD大鼠心,酶消化法分离培养原代心肌成纤维细胞和原代心肌细胞。用免疫荧光、免疫组织化学检测原代心肌成纤维细胞和原代心肌细胞HCN4的表达;免疫印迹、实时荧光定量PCR检测原代心肌成纤维细胞HCN4的表达,用实时荧光定量PCR检测不同月龄大鼠心肌组织HCN4的表达。结果:体外细胞培养显示,成纤维细胞和原代心肌细胞中均表达HCN4。组织切片显示,新生、成年和老年大鼠心肌成纤维细胞和部分心肌细胞表达HCN4。P1~P4代成纤维细胞的免疫印迹和实时荧光定量PCR结果显示HCN4随着成纤维细胞代次增加,表达量逐渐降低;不同月龄大鼠左心室的实时荧光定量PCR结果显示随着大鼠月龄增加,HCN4的表达量逐渐降低,其结果与培养的细胞表达一致。结论:HCN4在心肌成纤维细胞和部分心肌细胞中表达。随增龄变化,心肌细胞和成纤维细胞HCN4的表达量逐渐下降。

小电导的钙激活钾离子通道1的真核表达及其在乳腺癌细胞增殖中的作用

目的构建重组的真核表达质粒pENTER-小电导的钙激活钾离子通道1(small conductance calcium-gated K+channel 1,SK_(Ca)1),并研究其在乳腺癌细胞密歇根癌症基金会7号(Michigan cancer foundation-7,MCF-7)中的表达;观察SK_(Ca)1的亚细胞定位;检测SK_(Ca)1在乳腺癌细胞增殖中的作用。方法从MCF-7细胞中抽提总RNA并逆转录成cDNA;以cDNA为模板扩增SK_(Ca)1基因,通过无缝克隆技术将基因片段克隆至真核表达质粒pENTER中;质粒转染MCF-7细胞后,分别用Western blot和免疫荧光实验检测SK_(Ca)1的表达及亚细胞定位,用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)实验测定SK_(Ca)1的细胞增殖效应。结果成功构建了带有标签的重组真核表达质粒pENTER-SK_(Ca)1,并在乳腺癌细胞MCF-7中高效表达;SK_(Ca)1主要分布于细胞质和细胞核,并能促进乳腺癌细胞增殖。结论成功制备了研究SK_(Ca)1的必要工具原料并对其分子机制进行了初步探索,为深入研究SK_(Ca)1在乳腺癌细胞中的信号转导作用奠定了基础。

大电导钙离子激活钾通道对胰岛素抵抗时血管功能的影响及其机制

胰岛素抵抗（IR）是指肝脏、脂肪、骨骼肌等胰岛素靶组织对胰岛素敏感性及反应性降低，而正常剂量胰岛素产生低于正常生物学效应的一种病理生理状态。有研究表明，IR是肥胖、代谢综合征、2型糖尿病以及心血管疾病等多种疾病的共同危险因素，且可导致心、脑、肾等靶器官损害。其中，IR时血管功能受损可能是其引起靶器官损害的原因之一，但其机制目前尚未完全阐明。

大电导钙离子激活钾通道与糖尿病冠状动脉病变

钙离子（Ca^2＋）激活钾通道根据电导大小和药理特性的差异可分为3类：即大电导ca^2＋激活钾通道（BK）、中电导Ca^2＋激活钾通道（IK）和小电导Ca^2＋激活钾通道（SK），其中BK通道因其对血管调节作用较大且分布广泛而备受关注^[1].BK通道广泛存在于兴奋和非兴奋细胞，在血管平滑肌细胞（VSMCs）膜上表达尤为丰富，不仅参与细胞膜电位的。