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FXYD6 shRNA表达载体的构建及其在体外对胰腺癌细胞增殖的影响
被引量:
5
1
作者
刘军桂
周宁新
张效东
《生物技术通讯》
CAS
2009年第4期458-461,共4页
目的:构建FXYD6短发夹RNA(shRNA)表达载体,体外评价其对胰腺癌细胞sw1990的增殖与FXYD6蛋白表达的抑制效果。方法:基于microRNA mir-30天然结构,设计表达4对FXYD6shRNA的互补DNA序列,克隆入pCGM30质粒载体,连接产物转化感受态大肠杆菌DH...
目的:构建FXYD6短发夹RNA(shRNA)表达载体,体外评价其对胰腺癌细胞sw1990的增殖与FXYD6蛋白表达的抑制效果。方法:基于microRNA mir-30天然结构,设计表达4对FXYD6shRNA的互补DNA序列,克隆入pCGM30质粒载体,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,PCR法筛选阳性克隆,经酶切和基因测序鉴定;利用LipofectAMINE2000将pCGM30-FXYD6shRNA转染至胰腺癌细胞sw1990,MTT法检测转染后胰腺癌细胞增殖的变化,Western blot检测胰腺癌细胞中FXYD6蛋白表达水平的变化。结果:设计合成了4对表达FXYD6shRNA的互补DNA序列,构建了4个表达FXYD6shRNA的重组质粒;基因测序证实shRNA编码序列与设计的片段完全一致,酶切鉴定证实载体构建成功;体外实验表明,转染胰腺癌细胞sw1990的增殖能力和FXYD6蛋白表达水平明显降低(P<0.05),FXYD6蛋白表达水平随时间延长逐渐降低(P<0.01),但细胞增殖能力无明显变化(P>0.05)。结论:构建了4个表达FXYD6shRNA的重组质粒载体,可有效抑制FXYD6的表达;抑制胰腺癌细胞sw1990中FXYD6的表达可以抑制细胞的增殖,提示FXYD6可能是一个具有潜在临床应用价值的基因治疗靶点。
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关键词
离子转运调节因子
FXYD结构域
RNA干扰
短发夹RNA
重组质粒载体
胰腺癌
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职称材料
抗人FXYD6单克隆抗体的制备及鉴定
2
作者
刘军桂
周宁新
张效东
《科学技术与工程》
2009年第10期2579-2582,共4页
制备了抗人FXYD6单克隆抗体,并进行初步鉴定。以FXYD6合成多肽作为免疫原,利用单克隆抗体杂交瘤技术建立阳性克隆细胞株;腹水诱导法制备抗人FXYD6单克隆抗体;蛋白A亲合层析法纯化;ELISA测定FXYD6单克隆抗体的特异性和效价;以所得特异性...
制备了抗人FXYD6单克隆抗体,并进行初步鉴定。以FXYD6合成多肽作为免疫原,利用单克隆抗体杂交瘤技术建立阳性克隆细胞株;腹水诱导法制备抗人FXYD6单克隆抗体;蛋白A亲合层析法纯化;ELISA测定FXYD6单克隆抗体的特异性和效价;以所得特异性抗体为一抗,利用免疫组化法检测胰腺癌组织中FXYD6的表达。结果成功获得1株稳定分泌特异性抗人FXYD6单克隆抗体的杂交瘤细胞株;腹水诱导法生产抗人FXYD6单克隆抗体2.86mg;FXYD6单克隆抗体可以与FXYD6合成多肽特异性结合,抗体效价1:5400;免疫组织化学显示胰腺癌组织中胞膜呈阳性染色。成功获得FXYD6单克隆抗体可以为进一步研究FXYD6的组织分布、生物学作用创造条件。
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关键词
离子
通道
转运
调节
因子
FXYD6
单克隆抗体
酶联免疫吸附测定
免疫组织化学
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职称材料
题名
FXYD6 shRNA表达载体的构建及其在体外对胰腺癌细胞增殖的影响
被引量:
5
1
作者
刘军桂
周宁新
张效东
机构
第二炮兵总医院肝胆胃肠病研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2009年第4期458-461,共4页
基金
国家自然科学基金(30471699)
文摘
目的:构建FXYD6短发夹RNA(shRNA)表达载体,体外评价其对胰腺癌细胞sw1990的增殖与FXYD6蛋白表达的抑制效果。方法:基于microRNA mir-30天然结构,设计表达4对FXYD6shRNA的互补DNA序列,克隆入pCGM30质粒载体,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,PCR法筛选阳性克隆,经酶切和基因测序鉴定;利用LipofectAMINE2000将pCGM30-FXYD6shRNA转染至胰腺癌细胞sw1990,MTT法检测转染后胰腺癌细胞增殖的变化,Western blot检测胰腺癌细胞中FXYD6蛋白表达水平的变化。结果:设计合成了4对表达FXYD6shRNA的互补DNA序列,构建了4个表达FXYD6shRNA的重组质粒;基因测序证实shRNA编码序列与设计的片段完全一致,酶切鉴定证实载体构建成功;体外实验表明,转染胰腺癌细胞sw1990的增殖能力和FXYD6蛋白表达水平明显降低(P<0.05),FXYD6蛋白表达水平随时间延长逐渐降低(P<0.01),但细胞增殖能力无明显变化(P>0.05)。结论:构建了4个表达FXYD6shRNA的重组质粒载体,可有效抑制FXYD6的表达;抑制胰腺癌细胞sw1990中FXYD6的表达可以抑制细胞的增殖,提示FXYD6可能是一个具有潜在临床应用价值的基因治疗靶点。
关键词
离子转运调节因子
FXYD结构域
RNA干扰
短发夹RNA
重组质粒载体
胰腺癌
Keywords
ion transport regulator
FXYD domain
RNA interfering
small hairpin RNA
recombinant plasmid vector
pancreatic carcinoma
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
抗人FXYD6单克隆抗体的制备及鉴定
2
作者
刘军桂
周宁新
张效东
机构
第二炮兵总医院肝胆胃肠病研究所
出处
《科学技术与工程》
2009年第10期2579-2582,共4页
基金
国家自然科学基金(30471699)资助
文摘
制备了抗人FXYD6单克隆抗体,并进行初步鉴定。以FXYD6合成多肽作为免疫原,利用单克隆抗体杂交瘤技术建立阳性克隆细胞株;腹水诱导法制备抗人FXYD6单克隆抗体;蛋白A亲合层析法纯化;ELISA测定FXYD6单克隆抗体的特异性和效价;以所得特异性抗体为一抗,利用免疫组化法检测胰腺癌组织中FXYD6的表达。结果成功获得1株稳定分泌特异性抗人FXYD6单克隆抗体的杂交瘤细胞株;腹水诱导法生产抗人FXYD6单克隆抗体2.86mg;FXYD6单克隆抗体可以与FXYD6合成多肽特异性结合,抗体效价1:5400;免疫组织化学显示胰腺癌组织中胞膜呈阳性染色。成功获得FXYD6单克隆抗体可以为进一步研究FXYD6的组织分布、生物学作用创造条件。
关键词
离子
通道
转运
调节
因子
FXYD6
单克隆抗体
酶联免疫吸附测定
免疫组织化学
Keywords
ion transport regulator FXYD6 monoclonal antibody ELISA Immunohistoehemistry
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
FXYD6 shRNA表达载体的构建及其在体外对胰腺癌细胞增殖的影响
刘军桂
周宁新
张效东
《生物技术通讯》
CAS
2009
5
下载PDF
职称材料
2
抗人FXYD6单克隆抗体的制备及鉴定
刘军桂
周宁新
张效东
《科学技术与工程》
2009
0
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职称材料
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