6-羟多巴损伤黑质导致弓状核离子钙接头蛋白1和阿片-促黑素皮质素原表达的变化

目的:观察6-羟多巴(6-OHDA)损伤大鼠黑质(SN)后下丘脑弓状核(Arc)中酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白1(Iba1)和阿片-促黑素皮质素原(POMC)的表达变化,为帕金森病(PD)患者消瘦的发生机制提供线索。方法:20只SD大鼠随机分为6-OHDA大鼠组(双侧SN内注射6-OHDA)和对照组(注射等体积生理盐水)。免疫荧光染色和Western blot检测SN内TH,以及Arc内TH、Iba1和POMC的表达。结果:与对照组比较,6-OHDA大鼠组体重无明显变化,但腹膜后脂肪重量从(7.550±0.670)g减少到(3.895±0.465)g(P<0.01)。SN内TH阳性细胞数量从56±5减少至14±2(P<0.05);蛋白表达水平从0.75±0.11降低至0.41±0.09(P<0.01)。Arc中TH阳性细胞数量从21±2减少到10±3(P<0.05);Iba1阳性细胞数量从12±2增加到30±5(P<0.05);POMC阳性细胞数量从16±4增加到31±2(P<0.05)。下丘脑内TH蛋白的表达水平从0.35±0.05降低到0.21±0.02(P<0.01);Iba1蛋白的表达水平从0.23±0.06增加至0.51±0.04(P<0.01);POMC的蛋白表达水平从0.37±0.05增加至0.65±0.03(P<0.01)。结论:Arc中TH、Iba1和POMC表达变化可能与PD脂肪减少存在一定的联系。

6-羟多巴损伤黑质导致室旁核离子钙接头蛋白表达变化

目的观察6-羟多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)损伤大鼠黑质损伤后下丘脑室旁核(paraventricular nucleus of hypothalamus,PVN)中离子钙接头蛋白1(ionized calcium binding adapter molecule-1,Iba1)的含量变化。方法 30只SD大鼠根据随机数字表分为6-OHDA大鼠组和对照组各15只。6-OHDA大鼠组双侧黑质内注射6-羟多巴,对照组双侧黑质(substantia nigra,SN)内注射等体积的生理盐水。6周后断头取脑,Nissl染色、免疫组化、免疫印迹方法鉴定成模,免疫组化、免疫印迹和RT-PCR检测室旁核Iba1的表达。结果与对照组比较,6-OHDA大鼠组SN内酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性神经细胞数量从(58±5)个减少到(10±2)个(P<0.05),蛋白表达水平从(0.71±0.12)降低至(0.28±0.12)(P<0.05),室旁核中Iba1阳性细胞数量从(7±2)个增加到(14±3)个(P<0.05),蛋白表达水平从(0.1±0.08)增加到(0.19±0.06)(P<0.05)。结论 6-OHDA大鼠PVN中Iba1的表达变化有可能与帕金森病患者的胃肠功能障碍存在一定的联系。

电针对膝关节骨关节炎慢性痛大鼠脊髓背角及海马离子钙接头蛋白1表达的影响

目的:观察电针干预对膝关节骨关节炎(KOA)慢性痛大鼠痛行为学、海马形态学、脊髓背角及海马炎性细胞因子含量和离子钙接头蛋白1(Iba-1)表达、海马脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响,探讨电针治疗KOA慢性痛的中枢神经机制。方法:SD雌性大鼠随机分为空白组、盐水组、模型组、电针组,每组10只。采用左膝关节腔注射谷氨酸钠碘乙酸法复制KOA慢性痛大鼠模型。电针组于左侧“阳陵泉”“内膝眼”行电针刺激,15 min/次,1次/d, 5次为1个疗程,共治疗2个疗程。造模前1 d,造模第7、14、20、26天进行痛行为学评价。HE染色法观察左侧海马CA1区形态学变化,ELISA法检测左侧腰(L)3—L5脊髓背角及海马CA1区白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,免疫荧光染色法检测左侧脊髓背角及海马CA1区Iba-1的表达,Western blot法检测左侧海马CA1区BDNF的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠造模后各时点机械痛缩足阈值(MWT)和后肢负重能力显著下降(P<0.01);海马CA1区神经元排列散乱且数量明显减少,细胞轮廓不清晰,细胞核与胞质界限不清楚,存在核固缩现象;脊髓背角和海马CA1区IL-1β、TNF-α含量显著升高(P<0.01),Iba-1表达显著上调(P<0.01);海马CA1区BDNF的蛋白表达显著下调(P<0.01)。电针干预后,与模型组比较,电针组MWT和后肢负重能力显著升高(P<0.01);海马CA1区神经元在形态、完整性和排列方面均明显优于模型组;脊髓背角及海马CA1区IL-1β、TNF-α含量显著降低(P<0.01),Iba-1表达显著下调(P<0.01);海马CA1区BDNF的蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:电针“阳陵泉”“内膝眼”可缓解KOA大鼠的痛行为表现,其机制可能与电针抑制脊髓背角及海马小胶质细胞介导的炎性反应,上调海马BDNF的表达有关。

针刺对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脊髓钙离子接头蛋白-1、环氧合酶-2及血清肿瘤坏死因子-α水平的影响

目的观察针刺对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脊髓钙离子接头蛋白-1(IBA-1)、环氧合酶-2(COX-2)及血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响,探讨其可能的作用机制。方法将36只C57BL/6小鼠随机分为4组,正常组小鼠不予处理,其余小鼠均制作EAE模型。造模后第14日开始,正常组和模型组小鼠每日抓取1次,激素组小鼠给予醋酸泼尼松灌胃,针刺组小鼠针刺双侧"肾俞""足三里""大椎"。造模后28 d取材,检测小鼠血清TNF-α含量及脊髓COX-2、IBA-1阳性表达。结果与正常组比较,模型组小鼠神经功能评分及TNF-α、COX-2、IBA-1水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组和激素组小鼠神经功能评分和TNF-α、COX-2、IBA-1水平均明显降低(P<0.01);与针刺组比较,激素组小鼠神经功能评分和COX-2、IBA-1水平均明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论针刺可降低EAE小鼠炎症反应,减轻脊髓神经损伤,其机制可能与降低血清TNF-α含量,减少脊髓COX-2、IBA-1阳性表达有关。

灸法对阿尔茨海默病小鼠胶质细胞相关蛋白表达的影响

目的:探讨胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、离子钙接头蛋白(Iba-1)在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病中的作用,以及心俞、肾俞麦粒灸法对其的影响。方法:鉴定APP/PS1双转基因AD传代小鼠的基因表型,选取1.5月龄雌性转基因阳性Tg6799小鼠随机分为模型组9只和治疗组8只,同龄、同背景的C57BL/6J野生型雌性小鼠9只为正常对照组。治疗组取双侧心俞、肾俞行麦粒灸治疗,每日1次,10次为1个疗程,共治疗9个疗程,每个疗程之间间隔2 d。应用免疫组化法检测小鼠额叶皮层及海马区GFAP、Iba-1的表达水平。结果:与正常组相比,模型组额叶皮层区和海马区GFAP、Iba-1的表达增强(P<0.01);经麦粒灸法治疗后,治疗组小鼠大脑额叶皮层和海马区GFAP、Iba-1表达较模型组减少(P<0.05)。结论:心俞、肾俞麦粒灸疗法可减少GFAP、Iba-1的表达,抑制AD病理过程中胶质细胞的过度激活、增生,抑制神经炎症反应。

帕瑞昔布钠对切口痛大鼠脊髓Iba-1和GFAP蛋白表达的影响

探讨帕瑞昔布钠(PS)对切口痛大鼠脊髓小胶质细胞离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)和背角胶质纤维酸性(GFAP)蛋白表达的影响。方法 随机将30只SPF级雄性SD大鼠分为空白对照组(K组)、模型组(M组)及PS治疗组(PAR组),每组各10只。K组不做任何处理,M组只做切口痛模型,PAR组术后注射40μg/μL PS-生理盐水溶液10mL。采用免疫组织化学染色测定Iba-1、GFAP蛋白水平。比较各组术后1h、12h时的Iba-1、GFAP蛋白水平及疼痛累计评分。结果 M组术后1h、12h时的Iba-1为[(0.09±0.03)、(0.07±0.02)]、GFAP蛋白水平为[(0.54±0.08)、(0.46±0.05)]高于PAR组、K组,PAR组术后1h、12h时的Iba-1、GFAP蛋白水平高于K组,有统计学差异(P<0.05);M组的疼痛累计评分为(16.97±3.28)分,高于PAR组(10.28±2.46)分、K组(1.51±0.35)分,PAR组疼痛累计评分高于K组,有统计学差异(P<0.05)。结论 PS能够对切口痛大鼠产生良好的镇痛效果,减轻疼痛程度,降低脊髓Iba-1和GFAP蛋白表达。

二甲双胍对脑出血模型小鼠血肿周围脑组织炎症反应的影响

目的探讨二甲双胍干预小鼠脑出血(ICH)后血肿周围脑组织炎症反应的作用机制。方法 60只成年雄性C57/BL6小鼠,简单随机抽样分成3组:假手术组、模型组和二甲双胍组,每组20只。其中模型组和二甲双胍组经微量注射器向脑实质内注射Ⅵ型胶原酶(1μL,0.075 U)制作ICH模型,假手术组注射1μL生理盐水。二甲双胍组小鼠在造模后6 h予以二甲双胍(100 mg/kg)连续灌胃7 d,模型组予以等量的生理盐水灌胃。于治疗后第3、7天应用免疫组化染色方法检测血肿周围脑组织髓过氧化物酶(MPO)、离子钙接头蛋白(Iba-1)表达情况。Westernblot法检测出血后第3天血肿周围的白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达。结果分组处理后第3、7天,与模型组相比,二甲双胍组小鼠血肿周围脑组织MPO和Iba-1阳性细胞数量明显减少(P<0.05)。处理后第3天,二甲双胍组IL-1β、TNF-α的表达水平较模型组降低(P<0.05)。结论二甲双胍能够减轻ICH后小鼠脑血肿周围炎症因子和炎症细胞的浸润以及小胶质细胞的过度激活。

刺槐素腹腔注射对局灶性脑缺血小鼠脑再灌注损伤的预防作用及其机制

目的观察刺槐素对局灶性脑缺血小鼠脑再灌注损伤的预防作用,并探讨其可能机制。方法 36只清洁级雄性C57BL/6J小鼠随机分为刺槐素组、模型组、对照组各12只,刺槐素组、模型组小鼠均制备局灶性脑缺血模型,刺槐素组于再灌注时腹腔注射刺槐素,模型组同时点给予等量0. 9%生理盐水;对照组小鼠仅分离颈内动脉,但不闭塞大脑中动脉,同时点给予等量刺槐素。制模24 h后,对各组小鼠进行神经功能评分,并测算小鼠脑梗死体积,计数小鼠海马区、皮层区离子钙接头蛋白1(Iba-1)阳性细胞数。结果刺槐素组、模型组、对照组小鼠神经功能评分分别为(1. 67±0. 52)、(2. 83±0. 41)、0分,刺槐素组与模型组比较,P <0. 05。刺槐素组、模型组、对照组小鼠梗死体积分别为(22. 15±3. 85)、(70. 48±12. 57)、0 mm^3,刺槐素组与模型组比较,P <0. 05。刺槐素组、模型组、对照组海马区Iba-1阳性细胞数分别为(8. 480±1. 633)、(12. 370±2. 150)、(3. 670±0. 790)个/HP,皮层区Iba-1阳性细胞数分别为(8. 330±0. 983)、(13. 130±1. 860)、(4. 470±0. 370)个/HP,刺槐素组、对照组分别与模型组比较,P均<0. 05。结论刺槐素对局灶性脑缺血小鼠脑再灌注损伤有预防作用,机制可能与抑制小胶质细胞的增殖及激活有关。

小胶质细胞在兔减压病脊髓损伤中的作用

目的探讨小胶质细胞的活化在减压病脊髓损伤中的作用。方法成年健康雄性新西兰兔21只,按简单随机抽样法分为正常对照组、减压病(DCS)组、安全减压组,每组7只。DCS组:5 min空气加压至0.8 MPa(绝对压),停留60 min,5 min匀速减至常压;安全减压组,参考我国海军空气潜水减压表减至常压。借助光镜观察胸腰段脊髓的病理形态学改变,免疫组化方法观察钙离子接头蛋白-1(IBA1)蛋白标记小胶质细胞。结果 DCS组脊髓白质内空泡形成,IBA1结果显示阳性细胞数量增加,突起粗而短且分支变少,胞体肥大且内含粗颗粒状深棕色物质。与对照组和安全减压组组间差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论小胶质细胞在减压病脊髓损伤的病理生理过程中发挥重要作用,在DCS的早期即由静息状态快速向活化状态转变,参与减压病致脊髓损伤的过程。

基于海马小胶质细胞M1型极化研究逍遥散对OVX联合CUS焦虑抑郁模型大鼠的影响

研究逍遥散对卵巢切除(ovariectomized,OVX)联合慢性不可预知应激(chronic unpredictable stress,CUS)模型大鼠的抗焦虑抑郁作用及机制。采用OVX联合CUS建立围绝经期抑郁症模型,通过旷场试验评价大鼠的焦虑抑郁水平;Real-time qPCR法检测大鼠海马中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)mRNA的水平;免疫荧光双染法检测大鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)区小胶质细胞离子钙接头蛋白分子-1(ionized calcium binding adaptor molecule-1,Iba-1)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的荧光表达;Western blot法检测大鼠海马DG区小胶质细胞Iba-1和iNOS的蛋白表达。结果显示,模型组大鼠水平穿格运动次数、垂直运动次数、中心停留时间明显减少,且梳理时间显著延长(P<0.05或P<0.01);海马炎症因子IL-1β和IL-6水平显著升高(P<0.05);大鼠海马DG区小胶质细胞Iba-1/iNOS共表达的阳性细胞增多;海马Iba-1和iNOS蛋白表达水平显著升高(P<0.01),提示应激状态大鼠海马DG区小胶质细胞被激活并向M1型极化。逍遥散高剂量组能显著增加模型大鼠水平穿格运动次数、垂直运动次数和中心停留时间(P<0.05或P<0.01),且可显著下调炎症因子IL-1β和IL-6水平(P<0.05),同时逆转海马小胶质细胞的激活及数量变化;逍遥散低剂量组虽对旷场试验行为学指标和IL-1β和IL-6水平影响不显著,但均表现出改善趋势;低剂量逍遥散显著下调iNOS蛋白水平(P<0.05),高剂量逍遥散对海马小胶质细胞Iba-1和iNOS蛋白表达水平均有显著下调(P<0.05或P<0.01)。因此,逍遥散可以改善OVX联合CUS模型大鼠的焦虑抑郁样行为,其机制与其抑制海马小胶质细胞M1极化而发挥抗炎作用有关。

艾灸“足三里”对疲劳模型大鼠海马炎症因子及小胶质细胞活化的影响

目的探讨艾灸足三里治疗疲劳的可能作用机制。方法 24只SD大鼠随机分为正常组、模型组和艾灸组,每组8只。模型组和艾灸组大鼠以慢性负重力竭游泳21天建立疲劳大鼠模型。艾灸组在造模同时艾灸大鼠双侧'足三里',隔日1次,共11次;正常组和模型组不予处理。干预前后比较各组大鼠力竭游泳时间。干预后观察各组大鼠旷场实验行为,采用实时荧光定量PCR法检测海马白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α) mRNA表达,采用免疫组化法检测海马(CA1区、CA3区)小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白1 (Iba-1)表达。结果干预后艾灸组力竭游泳时间为(658. 00±250. 76) s,较模型组(263. 38±105. 87) s显著延长(P <0. 01)。各组大鼠旷场实验的水平移动距离、垂直移动距离差异均无统计学意义(P> 0. 05)。与正常组比较,模型组大鼠海马IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达及Iba-1表达升高(P <0. 01);与模型组比较,艾灸组大鼠海马IL-6 mRNA表达及Iba-1表达降低(P <0. 05或P <0. 01)。结论艾灸'足三里'可改善大鼠运动性疲劳,其机制可能与抑制海马小胶质细胞的活化和炎症因子有关。