激光捕获技术在心房细胞定位分离中的应用

目的探索激光捕获显微切割技术（laser capture microdissection，LCM）定位分离心房细胞，并对提取的微量RNA进行β-actin及GAPDH基因扩增。方法首先验证预做LCM样品的完整性，然后常规制备冰冻切片，采用改进的HE快速染色脱水法染色，提取刮片组织的RNA验证其质量，确保在切片染色过程中RNA的完整性．最后进行LCM分离纯化心房细胞，通过逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增β-actin及GAPDH基因．结果经快速HE染色心房细胞形态学清晰；预做LCM的样品和染色后组织刮片可提取出高质量的RNA，紫外分光光度计测定吸光度值A260／A80为1．9～2．0之间。甲醛变性凝胶电泳显示清晰的28SrRNA和18SrRNA条带，捕获细胞提取的微量RNA经RT—PCR后进行凝胶电泳显示有300bp及357bp的扩增条带．结论LCM可以分离出纯度较高的心房细胞，提取的微量RNA可以扩增出管家基因β-actin和GAPDH．