凝集素捕获微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体在原发性肝癌中的应用评价

目的探讨凝集素捕获微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在原发性肝癌(PLC)中的临床应用。方法采用电化学发光法(ECL)和凝集素捕获微量离心柱法分别定量检测622例甲胎蛋白(AFP)阳性PLC、24例AFP阴性PLC、17例AFP阳性良性肝脏疾病患者AFP-L3,并比较凝集素捕获微量离心柱法和凝集素亲和免疫电泳自显影法检测AFP-L3的符合率。结果 622例AFP阳性PLC患者中,AFP-L3阳性患者的γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、总胆红素(TBil)明显高于AFP-L3阴性患者(P<0.05)。AFP-L3与患者的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(Alb)均无相关性。凝集素捕获微量离心柱法和凝集素亲和免疫电泳自显影法检测AFP-L3的阳性率分别是46%、50%,两者的符合率为92%。按AFP浓度分层分析AFP-L3阳性率后发现,随AFP浓度升高,AFP-L3阳性呈现上升趋势。AFP-L3在AFP阳性的PLC患者和AFP阳性的良性肝脏疾病患者中的检出率分别为16.67%、23.53%,显著低于AFP阳性的PLC患者(63.5%,P<0.05)。结论凝集素捕获微量离心柱法与凝集素亲和免疫电泳自显影法具有较好的一致性;AFP-L3在AFP阳性的PLC患者中有较高的检出率,对临床具有辅助诊断和鉴别诊断价值。

酶联免疫吸附法和凝集素微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体的研究

目的:比较酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent,ELISA)和吸附柱微量离心柱法[lens cu-linaris agglutinin(LCA)-coupled spin column,ACSC]检测甲胎蛋白异质体(alpha-fetoprotein isoforms,AFP-L3)在甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)阳性的良恶性肝病鉴别诊断中的价值。方法:采用ELISA法检测92例原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC),45例慢性肝炎及肝硬化患者血清中AFP-L3浓度,用ACSC法检测该批标本的AFP-L3/AFP%,比较两种方法对良恶性肝病鉴别诊断的价值。结果:ELISA法检测AFP-L3浓度和ACSC法检测AFP-L3/AFP%对92例原发性肝癌(HCC)的敏感性分别是83.69%和85.86%,对45例慢肝、肝硬化的特异性分别为88.88%和82.22%,ELISA法和ACSC法两种方法诊断原发性肝癌的符合率分别为85.40%和84.67%,在受试者工作特征曲线(recover operatin characteristic,ROC)下的面积AUC分别为0.819和0.823。结论:ELISA法检测AFP-L3浓度和ACSC法检测AFP-L3/AFP%在HCC鉴别诊断中具有相似的临床价值,但是ELISA法操作简便、省时、经济、患者易接受,更利于临床推广应用。

一步法和离心柱法提取小鼠肝组织RNA的比较研究

从动物组织中提取总RNA技术被广泛使用在现代生物学研究中.文中比较了两种从新鲜动物组织中提取、鉴定纯度及完整性较高的总RNA的技术方法.用进口离心柱法和自行研制的一步法RNA提取试剂TRI-pure分别提取12例小鼠肝脏组织的总RNA,并通过电泳和紫外分光光度计检测,鉴定其提取效率和纯度.两种方法提取小鼠肝组织总RNA的纯度和产量经t检验无显著性差异.自行研制的一步法RNA提取试剂TRIpure可以取代进口离心柱法.

微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体对原发性肝癌诊断的意义

目的探讨采用微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在原发性肝癌诊断中的意义。方法选择原发性肝癌(PHC)组45例、肝硬化组26例、慢性肝炎组58例,采用预装有耦联小扁豆凝集素(LCA)的琼脂糖微量离心柱分离血清AFP-L3,化学发光法检测AFP和AFP-L3,并计算AFP-L3在AFP中的含量比例[AFP-L3(%)],以[AFP-L3(%)]≥10%作为阳性判断标准,分析AFP-L3(%)升高者与良恶性肝病的关系。结果PHC患者血清中AFP-L3(%)明显高于其它肝病患者(均P<0.01),以AFP-L3(%)≥10%作为诊断标准,在已经确诊为肝癌的患者中灵敏度是91.1%,与慢性肝病的鉴别诊断的特异性为92.8%;AFP-L3含量与血清AFP浓度及原发性肝癌癌灶大小无关。结论微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体在PHC诊断,尤其是小肝癌的早期诊断和与低AFP含量肝病的鉴别诊断中具有重要的临床应用价值。

改良离心柱法检测ALP-L3在原发性肝细胞癌诊断中的应用研究

目的探讨甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在诊断原发性肝细胞癌中的临床意义。方法选择原发性肝细胞癌(HCC)患者117例、肝硬化患者46例、慢性肝炎患者58例,采用改良离心柱法分离血清AFP-L3,电化学发光法检测甲胎蛋白(AFP)和AFP-L3,并计算AFP-L3与AFP含量比值[AFP-L3/AFP(%)],以比值≥10%作为阳性判断标准,分析AFP-L3(%)水平与原发性肝细胞癌的关系。结果 HCC患者血清中AFP-L3(%)明显高于其它肝病患者(P<0.001),灵敏度为83.8%;不同浓度AFP的HCC患者之间,AFP-L3(%)的浓度差异无统计学意义,但随着AFP浓度的升高,AFP-L3的阳性率也逐惭升高。结论改良离心柱法检测AFP-L3对HCC和良性肝病的诊断具有重要意义,尤其是在低浓度AFP的原发性肝细胞癌和良性肝病的鉴别诊断方面。

新微量离心柱法测定肝癌AFP—L3117例

肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，病死率位居癌症第i位．乙肝是最重要的致病因素，主要诊断方式是影像学、甲胎蛋白和肝脏穿刺活检…。我国每年有l1万人死于肝癌，约为全世界肝癌死亡人数的一半[2J。肝癌病情发展迅速，从AFP升高进展到肝癌晚期仅需1年左右，

凝集素微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体联合血清巨噬细胞抑制因子1对原发性肝癌的诊断价值

目的探讨凝集素微量离心柱法(ACSC)检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3%)联合血清巨噬细胞抑制因子1(MIC-1)检测对原发性肝癌的诊断价值。方法选取我院2018年1月-2019年6月收治113例经临床确诊为原发性肝癌的患者设为观察组;选取同期49例健康体检者作为对照组。应用ACSC法检测原发性肝癌患者及健康体检者血清中的AFP-L3%,并应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测原发性肝癌患者及健康体检者两组血清MIC-1浓度,分析两项指标联合检测对诊断原发性肝癌的临床效果。结果健康组的AFP-L3%和MIC-1的浓度均远低于肝癌组患者,差异有统计学意义(P<0.01),AFP-L3%诊断原发性肝癌的灵敏度为84.07%(95/113),特异度为85.71%(42/49),诊断正确率是84.57%(137/162);MIC-1浓度诊断原发性肝癌的灵敏度为84.95%(96/113),特异度为77.55%(38/49),诊断正确率是82.71%(134/162);AFP-L3%联合MIC-1浓度诊断原发性肝癌的灵敏度为91.15%(103/113),特异度为91.83%(45/49),诊断正确率是91.35%(148/162)。AFP-L3%联合MIC-1浓度诊断灵敏度、特异度,正确率均高于单一AFP-L3%、MIC-1。结论凝集素微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体百分含量联合血清巨噬细胞抑制因子1浓度在原发性肝癌的诊断中,具有重要的临床价值,可明显提高诊断的特异性,值得在临床推广。

微量离心柱法检测肝癌患者血清甲胎蛋白异质体临床意义分析

目的探讨微量离心柱法检测血清甲胎蛋白(AFP)异质体(AFP-L3)在肝癌诊断及良、恶性肝病鉴别诊断中的临床应用价值。方法选择2011年6月至2012年10月于阳山县人民医院就诊的原发性肝癌(PLC)患者80例(PLC组)、肝硬化患者66例(肝硬化组)和慢性肝炎患者54例(慢性肝炎组)作为研究对象,应用国产微量离心柱法试剂分离纯化血清AFP-L3,采用化学发光法检测血清AFP和AFP-L3水平,并计算AFP-L3在总AFP中所占比例(AFP-L3%)。结果 PLC组患者血清AFP、AFP-L3%水平均高于肝硬化组和慢性肝炎组(P<0.05)。以AFP>25ng/mL,AFP-L3%≥10%作为阳性判断标准,PLC组患者血清AFP阳性率高于肝硬化组和慢性肝炎组,且PLC组患者血清AFP-L3%阳性率亦明显高于肝硬化组和慢性肝炎组(P<0.05),但具有不同血清AFP水平的PLC患者之间,血清AFP-L3%水平和阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论微量离心柱法检测血清AFP-L3%在肝癌的早期诊断和良、恶性肝病的鉴别诊断中具有重要价值。

微量离心柱法检测HCVRNA对原发性肝癌的预测价值

目的通过微量离心柱法检测不同丙型肝炎病毒(HCV)感染患者血清HCV RNA水平,以探讨血清HCV RNA水平在不同感染患者中的差异及其预测原发性肝癌的临床意义。方法选取本院2011年5月至2015年11月收治的HCV感染的原发性肝癌患者51例、肝硬化和慢性重度肝炎患者65例和慢性轻度肝炎患者83例为研究对象,采用微量离心柱法分离纯化血清HCV RNA,并采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测RNA水平,同时采用化学发光法检测患者血清甲胎蛋白(AFP)水平,分析HCV RNA与AFP的相关性。结果 HCV感染患者血清HCV RNA水平依次为:原发性肝癌组<肝硬化和慢性重度肝炎组<慢性轻度肝炎组,AFP水平依次为:原发性肝癌组>肝硬化和慢性重度肝炎组>慢性轻度肝炎组。进一步相关性分析提示血清AFP水平与HCV RNA水平呈显著负相关(P<0.05)。肝硬化和慢性重度肝炎组中存在部分高AFP水平和低HCV RNA水平患者。结论高AFP水平和低HCV RNA水平可能是原发性肝癌的重要临床生物学特征,对于预测易患原发性肝癌的高危患者具有一定的临床价值,但尚待进一步长期随访证实。

微量离心柱法检测AFP-L3的临床应用

目的本文旨在探讨微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在肝癌预警及良恶性肝病鉴别诊断中的临床应用价值。方法应用装有耦联小扁豆凝集素(LCA)的微量离心柱分离200例肝病患者的AFP-L3,采用化学发光法检测AFP及AFP-L3,计算AFP-L3占总AFP的比率(判断标准以AFP-L3%≥10%者为阳性)。结果①原发性肝癌组AFP-L3(%)均值和阳性率明显高于肝硬化组和慢性肝炎组(P【0.001);低浓度AFP(AFP【200ng/ml)原发性肝癌组AFP-L3(%)经过临床检验也明显高于肝硬化组和慢性肝炎组(P【0.01)。②在原发性肝癌组中,比较不同浓度的AFP(%)均值和阳性率,相互间的差异值P】0.05,在统计学上没有意义。结论经过临床研究,我们认为微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体(AFP-L3)在肝癌细胞诊断、预警及与良恶性肝病的鉴别诊断中具有重要的临床应用价值。

凝集素微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体在肝癌诊断中的价值

目的:探讨凝集素微量离心柱法(lens culinaris agglutinin(LCA)-coupled spin column,ACSC)法检测甲胎蛋白异质体(alpha-fetoprotein isoforms,AFP-L3)对甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)阳性的良恶性肝病鉴别诊断价值。方法:采用凝集素微量离心柱法及电化学发光法检测92例原发性肝癌(hepatocellu-lar carcinoma,HCC),45例慢性肝炎及肝硬化患者血清中AFP及AFP-L3浓度,以AFP-L3%≥10%为阳性判断标准,分析AFP-L3%与良恶性肝病的关系。结果:ACSC法检测AFP-L3%对92例原发性肝癌(HCC)的灵敏度是85.86%,对45例慢肝、肝硬化的特异性为95.56%,诊断准确度为89.05%,在受试者工作特征曲线(receiver operatin characteristic curve,ROC)曲线下的面积为0.9226。结论:ACSC法检测AFP-L3指标在PHC鉴别诊断中具有临床价值。

牡蛎中诺如病毒核酸两种提取方法比较

目的寻找简便有效的更适合长期监测的牡蛎中诺如病毒核酸提取的方法。方法通过甘氨酸聚乙二醇富集后硅胶膜离心柱法(方法A)和蛋白酶K生物消化后顺磁性硅胶基法(方法B)两种核酸提取方法,采用实时RT-PCR检测自然状态的牡蛎和人工染毒状态的牡蛎来进行比较。结果两种方法的阳性检出率没有差异,总体比较方法B的病毒回收率高。结论方法B优于方法A,且方法B更快捷,故方法B更适合长期监测。

探讨两种石蜡包埋组织DNA提取方法

随着精准医学和个体化医学的快速发展，人们对分子检测的研究越来越广泛、越来越深入；寻找疾病的遗传学发病因素，对不同患者实施适于其病情的治疗及使用不同剂量的药物逐渐成为医学发展的方向。新鲜组织、石蜡包埋组织、外周血、胸腹水等样本中核酸的提取，是分子生物学的基本要求。由于患者病程及身体状况等原因，很多情况下短期内获取人体新鲜组织、胸腹水等标本较困难，

简单快速的多糖植物双生病毒核酸提取方法

以朱槿曲叶病毒病株为材料,结合总DNA提取的CTAB法和质粒提取的离心柱方法,发展一种简单快速的多糖植物双生病毒基因组核酸的提取方法,用聚合酶链式反应(PCR)和实时定量PCR予以验证。结果显示:与目前的2种常用方法相比,改进的方法在灵敏度、时间、价格和产率上都具有一定的优势,更适合于双生病毒基因组核酸的提取和检测应用。

不同提取方法及3种试剂盒对SARS-CoV2核酸检测效果评估

目的对3种SARS-CoV2核酸检测试剂盒、4种病毒核酸提取试剂盒以及2种自动核酸提取仪对新型冠状病毒核酸检测效果进行比较分析。方法采集新冠病毒弱阳性病人咽拭子标本,比较3种SARS-CoV2核酸检测试剂盒的灵敏度;以不同浓度新型冠状病毒阳性对照质粒为模板,使用4种核酸提取试剂盒、2种自动核酸仪对模板进行提取后进行RT-qPCR扩增实验,比较提取试剂盒及提取仪的提取效率。结果 A品牌SARS-CoV2核酸检测试剂盒灵敏度最高;磁珠法对病毒核酸提取效率高于离心柱法;核酸自动提取仪中品牌H(进口品牌)性能更佳。结论在新型冠状病毒的实验室诊断中,各种商业试剂盒质量参差不齐,实验室选择性能稳定、品质优越的核酸提取仪以及灵敏度、特异性、重复性最佳的核酸检测试剂盒对于实验室检测结果的可靠性更为重要,既可以为临床诊治提供参考,更能为传染病防控措施提供方向。

不同蛋白提取方法对PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达量的影响

目的:探讨Ripa裂解液蛋白提取法和Invent离心管柱蛋白提取法对慢性应激模型大鼠海马组织PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达量的影响。方法:空白组和模型组大鼠各3只,取双侧海马组织,每个样品分别采用Ripa裂解液、Invent离心管柱蛋白提取法进行蛋白提取,分为空白+Invent组、空白+Ripa组、模型+Invent组、模型+Ripa组。采用Western Blot法检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达情况,析因设计方法分析各因素的效果。结果:大鼠海马PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR表达均受组别和提取方法的影响,组别和提取方法存在交互作用,运用Invent离心管柱蛋白提取法提取蛋白,模型组的PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR表达较空白组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:慢性应激抑制大鼠海马PI3K/Akt/mTOR信号通路, Invent离心管柱蛋白提取法操作便捷,蛋白提取率高,尤其对信号通路中磷酸化蛋白的提取具有明显的优势。

不同核酸提取方法在恶性疟原虫实时荧光定量PCR检测中的效果

目的比较不同核酸提取方法在恶性疟原虫荧光定量PCR检测中的扩增效果,为实验室的不同需求选择不同方法和试剂盒提供依据。方法以健康人群抗凝血对恶性疟血样标本按照1∶10、1∶100、1∶1000、1∶10000、1∶100000、1∶1000000进行倍比稀释,采用磁珠法、滤纸血离心柱法和检测试剂盒自带试剂抽提法对每个稀释度样本进行核酸提取和检测,每个方法每份样本分成3份平行开展。结果磁珠法提取的核酸样本稀释度到10-6时,3份平行样本检测均为阴性;滤纸血离心柱法提取的核酸样本稀释度到10-4时,检测均为阴性;检测试剂盒自带抽提试剂提取的核酸样本除了原血样有1份检测为阳性外,其余所有样本检测均为阴性。磁珠法提取的核酸,原血样、1∶10、1∶100、1∶1000稀释度下其检测CT均值分别为16.18、20.48、22.76、24.51,明显小于采用滤纸血离心柱法的CT值22.50、26.51、30.58、32.63,差异均有统计学意义(t=-16.041、-6.133、-8.737、-5.580,P均<0.05)。磁珠法除了1∶10稀释度的CV值小于滤纸血离心柱法,其他浓度的样本CV值均大于滤纸血离心柱法。根据绝对定量标准曲线计算的初始拷贝数,磁珠法提取的各稀释度DNA初始拷贝数大于滤纸血离心柱法。结论3种核酸提取方法中,磁珠法和滤纸血离心柱法效果较好,磁珠法适合大规模样品筛查及突发疟疾疫情的高效检测,滤纸血离心柱法适合长期保存样本的检测研究。

磁珠提取法和离心柱提取法在实时荧光定量聚合酶链反应中幽门螺杆菌核酸提取效果的对比研究

目的比较磁珠提取法和离心柱提取法在实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)中幽门螺杆菌(HP)核酸提取效果、重复性及临床标本检测能力。方法将100~10-6系列梯度稀释的HP标准菌株作为模板,分别采用磁珠提取法和离心柱提取法平行提取HP核酸,比较两种提取方法的核酸提取效果、变异系数(CV);将35份胃液标本作为模板,分别采用磁珠提取法和离心柱提取法平行提取HP核酸,比较两种提取方法对临床标本的检测能力。结果两种核酸提取方法提取100、10-5浓度HP标准菌株核酸的CT值比较,差异无统计学意义(P>0.05);离心柱提取法提取10^(-1)、10^(-2)、10^(-3)、10^(-4)、10^(-6)浓度HP标准菌株核酸的CT值低于磁珠提取法(P<0.05)。两种提取方法提取HP标准菌株核酸的CV比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两种提取方法提取胃液HP核酸的CT值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论磁珠提取法在实时荧光定量PCR中的HP核酸提取效果优于离心柱提取法,而其重复性及临床样本检测能力与离心柱提取法相当。

血液和尿液中巨细胞病毒DNA的检测研究

目的探讨血液和尿液不同类型标本中巨细胞病毒(CMV)-DNA的检测研究。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)对52例患者4种不同类型的血液标本和85例患者3种不同类型的尿液标本的CMV-DNA载量进行检测,比较血液和尿液不同类型标本的CMV-DNA检出率和病毒载量的差异。结果 52例患者血清、全血、血浆和外周血单个核细胞(PBMC)的CMV-DNA检出率分别为48.08%、71.15%、57.69%和69.23%;全血和PBMC的CMV-DNA检出率较高,差异有统计学意义(P<0.05)。PBMC的定量结果较高。85例患者混合尿、尿上清和尿沉渣的CMV-DNA检出率分别为72.94%、62.35%和84.71%,尿沉渣的CMV-DNA检出率较高,混合尿的定量结果较高。结论血液和尿液标本CMV-DNA的检测结果差异较大,在CMV感染的临床诊疗和监测中使用同一标本类型检测具有重要的临床意义。

对甲胎蛋白异质体在诊断肝细胞癌中的价值评估

目的对甲胎蛋白异质体在诊断肝细胞癌中的价值进行评估。方法选择186例良性肝病和79例肝癌患者的血清。通过偶联了小扁豆凝集素(LCA)的微量离心柱分离、洗脱获得AFP-L3,应用化学发光微粒子免疫分析法检测AFP和AFP-L3水平,计算AFP-L3占AFP的百分比即AFP-L3%。结果肝细胞癌组血清AFP、AFP-L3和AFP-L3%均高于良性肝病组(P<0.01);两组患者的AFP-L3与AFP水平均呈正相关关系(r=0.729,P<0.01);而AFP-L3%与AFP水平均无相关关系(r=-0.125,P>0.05);AFP,AFP-L3和AFP-L3%的ROC曲线下面积大小分别是0.64,0.79和0.92;AFP-L3%诊断肝细胞癌灵敏度是82.3%,特异度是92.4%,YOUDEN指数为0.747,阳性预测值为85.5%,阴性预测值为92.5%。结论甲胎蛋白异质体(AFP-L3%)作为肝细胞癌的诊断指标明显优于AFP,值得临床推广应用。