禽内源白血病病毒ev3、ev6和ev21对雏鸡免疫器官指数和血清指标的影响

试验旨在探究禽内源性白血病病毒ev3、ev6和ev21对雏鸡免疫性能的影响。试验利用PCR技术检测太行鸡、大午金凤雏鸡的羽型和ev3、ev6、ev21整合性,测定雏鸡的体重、免疫器官指数,利用ELISA技术检测雏鸡血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)、白细胞介素4(IL-4)和白细胞介素10(IL-10)含量。结果显示,ev3在太行鸡的整合阳性率显著高于大午金凤鸡(P<0.05)。ev3整合阳性太行鸡的法氏囊指数显著高于阴性个体(P<0.05),体重显著低于阴性个体(P<0.05)。ev21阴性太行鸡体重显著高于阳性鸡(P<0.05)。太行鸡母鸡体重和免疫器官总重显著高于公鸡(P<0.05)。ev3阳性太行鸡血清IgG和IL-4含量显著高于ev3阴性鸡(P<0.05)。ev6阳性太行鸡血清IL-10含量显著低于ev6阴性鸡(P<0.05)。ev3阳性大午金凤鸡血清IgM含量显著低于ev3阴性鸡(P<0.05)。ev21阳性慢羽大午金凤公鸡血清IL-4含量显著高于ev21阴性快羽母鸡(P<0.05)。太行慢羽鸡和母鸡的血清IgG含量显著高于快羽鸡和公鸡(P<0.05)。ev21阴性太行快羽鸡血清IgG含量显著低于ev21阴性太行慢羽鸡和ev21阳性太行慢羽鸡(P<0.05)。研究表明,ev3整合提高了1日龄太行鸡的免疫性能,降低了其体重和大午金凤鸡血清IgM含量;ev6整合降低了太行鸡血清IL-10含量;ev21整合降低了1日龄太行鸡的体重,提高了大午金凤鸡血清IL-4含量。

七彩山鸡内源性禽白血病病毒的鉴定及其env基因序列分析

为了解七彩山鸡感染内源性禽白血病病毒(ALV)情况,从上海某七彩山鸡场采集200份血浆样品,经DF1细胞分离和ALV p27抗原ELISA方法检测出13份阳性样品。将含有阳性样品的第一代细胞裂解液及细胞上清液同时盲传接种至第2代细胞,培养9 d后,p27抗原均未被检测到。对ALV p27抗原阳性细胞培养物进行env基因的扩增,最终得到了1株内源性ALV前病毒序列,其基因序列与已知的禽白血病病毒同源性为39.1%~66.7%。以上结果表明,该七彩山鸡品系中存在内源性禽白血病病毒感染。

鸡羽速基因与內源禽白血病病毒的关系及其在育种中的应用

家禽生产中常用伴性遗传的羽速基因(K/k+)来建立自别雌雄品系。但是,慢羽型鸡,特别是白来航鸡,常被发现在生活力和抗病力方面与快羽型鸡相比存在劣势。本文阐述了慢羽基因K与ev21等禽内源性病毒以及生产性能和抗病力的关系,总结了可能提高慢羽蛋鸡品系抗病力的育种策略及其在生产中的应用。

内源性禽白血病病毒ev/J基因克隆与分析

用位于内源性禽白血病病毒ev/J 5′和3′长末端序列(LTR)上的引物,对我国的灵山麻鸡、江汉鸡、肉鸡和SPF鸡正常基因组中内源性ev/J进行扩增,结果扩增出长约为4 kb、2.2 kb和2 kb 3种大小的片段。测序分析表明,这些片段分属于Ⅱ型和Ⅳ型ev/J以及另一类具有更大缺失的ev/J基因。ev/J在这几个品系鸡中分布并不完全相同,肉鸡和SPF鸡均具有Ⅱ型和Ⅳ型ev/J,江汉鸡只含Ⅱ型ev/J,而灵山麻鸡则含有另一类具有更大缺失的ev/J基因。此次获得的Ⅳ型ev/J序列不仅相互之间高度同源,而且其env基因与外源性ALV-J原型株HPRS-103env基因以及我国外源性ALV-J主要分离株env基因也高度同源,表明内源性ev/J在宿主正常基因组中高度保守。

麻黄肉种鸡蛋清中内源性禽白血病病毒的分离与遗传鉴定

为了解麻黄肉种鸡蛋清中内源性禽白血病病毒(内源性ALV)的分布情况,从广东某麻黄肉种鸡场采集1 038份蛋清,经ALV p27抗原ELISA检测出30份阳性蛋清;将阳性蛋清同时接种DF1和CEF细胞,培养7 d后,p27抗原ELI-SA检测到13份样品为DF1-CEF+;以这13份CEF+细胞培养物的基因组DNA为模板,经PCR扩增克隆测序最终得到了1株内源性ALV前病毒序列。将经ELISA、PCR和IFA等方法鉴定的该内源性ALV命名为HN1301株。基于遗传分析表明,HN1301株的前病毒基因序列与已知的E亚群毒株ev1、SD0501的相似性均为99.4%。表明该麻黄肉种鸡品系中存在有复制能力的内源性ALV,因而易干扰基于p27抗原的ELISA检测;本研究对于麻黄肉种鸡禽白血病的防控与净化有参考价值。

湖北省鸡群内源性禽白血病病毒分子特征研究

为了解内源性禽白血病病毒在我国鸡群中的存在状况,利用特异性引物对湖北省鸡群—江汉鸡和灵山麻鸡的鸡胚中内源性禽白血病病毒进行了PCR检测。结果显示,所有的鸡胚中均检测出内源性禽白血病病毒EAV、ev、ev/J和ART-CH基因序列。进化树分析发现,相对于内源性病毒原型株E51,江汉鸡的EAV基因组更加接近于原型株EAV-0;江汉鸡和灵山麻鸡的ART-CH核苷酸序列之间相似度很高,但与已知的ART-CH5和ART-CH14核苷酸序列存在较大差异;尽管江汉鸡和灵山麻鸡的ev和ev/J核苷酸与其他已知的ev和ev/J的相关序列差异较小,但其在系统进化树上仍属于不同的分支。该结果说明江汉鸡和灵山麻鸡的内源性病毒基因的进化路径与其他已知的内源性病毒基因的进化路径不同。

海兰鸡内源性白血病病毒位点序列鉴定与分析

鉴定和比较海兰鸡基因组中内源性禽白血病病毒(ALV)位点。使用超嗜热古菌Thermococcus sp.4557来源重组表达的Pol B DNA聚合酶,通过一次PCR反应从海兰鸡的基因组DNA中扩增到了包括gag、pol、env基因部分片段及3′-LTR的内源性ALV位点,将其命名为HL-E1。序列比较表明,其env基因与E亚群内源性ALV高度同源;与完整的ALV基因组相比,其gag、pol、env三个主要功能基因分别缺失了93、1 960和805个碱基。海兰鸡基因组中存在4 663bp的缺陷型ALV基因组片段,其env基因和LTR都与鸡基因组上经典的ev1位点的相应基因有96.8%和97.4%的相似性,表明这是整合进海兰鸡染色体基因组中的一个内源性E亚群ALV片段构成的ev位点,这是又一个ev位点的全序列报道。

鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒的研制

用特定引物通过PCR合成了经地高辛标记的鸡致病性外源性及内源性禽白血病病毒特异性核酸探针,通过交叉斑点分子杂交,这些探针将可用于检测病料样品中致病性外源性禽白血病毒特异性核酸的存在。利用此试剂盒,对从病料组织样品中提取的基因组DNA作交叉斑点分子杂交或对提取的DNA用相应引物扩增后的PCR产物作交叉斑点分子杂交,可在24～36 h内完成检测并报告结果。