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分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定
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作者 单松华 韩国珍 +4 位作者 袁勇 王巧全 胡永强 刘学忠 黄忠荣 《中国兽医科技》 CSCD 1996年第2期20-22,共3页
采用腹腔接种和1次脾内注射禽呼肠孤病毒(ARV)蛋白免疫小鼠,经3次融合后,共筛选出8株分泌抗禽呼肠孤病毒(单克隆抗体杂交瘤细胞株。这8株McAb均可与ARVS1133株、FDO株发生反应,而与IBDV,MDV,ED... 采用腹腔接种和1次脾内注射禽呼肠孤病毒(ARV)蛋白免疫小鼠,经3次融合后,共筛选出8株分泌抗禽呼肠孤病毒(单克隆抗体杂交瘤细胞株。这8株McAb均可与ARVS1133株、FDO株发生反应,而与IBDV,MDV,EDS-76病毒不发生反应。经亚类鉴定,AE7,AF8,BD1,DH10,EE5为IgG1;AD6,CG4为IgG2a;AG7为IgG2b。腹水效价在10 ̄3~10 ̄5之间。 展开更多
关键词 呼肠病毒 单克隆抗体 杂交瘤细胞株 鸡病
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基因Ⅳ型禽呼肠孤病毒σC蛋白单克隆抗体的制备及功能鉴定
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作者 高金慧 王素艳 +8 位作者 刘芮 祁小乐 陈运通 张艳萍 崔红玉 刘永振 段雨路 高立 高玉龙 《中国动物检疫》 CAS 2024年第8期98-104,共7页
为制备基因Ⅳ型(GCⅣ)禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)σC蛋白单克隆抗体,构建了重组原核表达质粒pCold-I-ARV-GCⅣ-σC,将重组质粒导入感受态细胞BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达;随后将纯化后的σC蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技... 为制备基因Ⅳ型(GCⅣ)禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)σC蛋白单克隆抗体,构建了重组原核表达质粒pCold-I-ARV-GCⅣ-σC,将重组质粒导入感受态细胞BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达;随后将纯化后的σC蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选获得阳性杂交瘤细胞;以间接免疫荧光(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot)试验鉴定杂交瘤细胞后,将杂交瘤细胞株通过腹腔注射小鼠制备单克隆抗体腹水,以ELISA测定腹水效价。结果显示:成功筛选出一株分泌ARV GCⅣσC蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株(1H4);制备的单克隆抗体能与ARV GCⅣσC蛋白发生反应,同时与感染不同基因型ARV的鸡肝癌细胞(LMH)均有良好的反应性;该单克隆抗体识别重链为IgG1,其腹水ELISA效价为1:256000。结果表明,成功制备ARV GCⅣσC蛋白单克隆抗体,其效价高,反应性良好,为进一步研究σC蛋白功能、ARV致病机理以及建立临床诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 呼肠病毒 基因Ⅳ型 σC蛋白 单克隆抗体 功能鉴定
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单克隆抗体用于比较禽呼肠孤病毒株的抗原关系 被引量:3
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作者 陈士友 陈溥言 蔡宝祥 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第1期96-99,共4页
利用淋巴细胞杂交瘤技术在国内首次建立了8株分泌禽呼肠孤病毒(ARVS)的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,腹水效价在10^(-3)~10^(-5)之间。用琼脂扩散试验鉴定,5株属 IgGl,2株属IgG2b,1株属 IgG3.ELISA 阻断试验表明,4个 ARVS 分离株的抗... 利用淋巴细胞杂交瘤技术在国内首次建立了8株分泌禽呼肠孤病毒(ARVS)的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,腹水效价在10^(-3)~10^(-5)之间。用琼脂扩散试验鉴定,5株属 IgGl,2株属IgG2b,1株属 IgG3.ELISA 阻断试验表明,4个 ARVS 分离株的抗原结构明显不同,提示利用 McAb 进行 ARVS 的分型具有很大潜力.在与两个国内毒株(广州分离株和 NAU-8902)分别发生特异性反应的4株 McAb 中,有3株是相同的,说明两者具有很近的亲缘关系.试验还发现,McAb D19株能被试验的所有毒株阻断,提示 D19株有希望成为检测 ARVS 的群特异性 McAb。 展开更多
关键词 单克隆抗体 呼肠病毒
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禽呼肠孤病毒σB蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:5
4
作者 陈祥 吴海洋 +3 位作者 王永强 李晓齐 曹红 郑世军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第6期3-6,I0001,共5页
为了制备禽呼肠孤病毒(ARV)σB蛋白的单克隆抗体,以实验室保存的融合蛋白His-σB为免疫原免疫BALB/c小鼠,经过融合、筛选、亚克隆后,获得2株能稳定分泌抗σB蛋白单克隆抗体的特异性杂交瘤细胞株,分别命名为3C3、4H11。经间接ELISA方法测... 为了制备禽呼肠孤病毒(ARV)σB蛋白的单克隆抗体,以实验室保存的融合蛋白His-σB为免疫原免疫BALB/c小鼠,经过融合、筛选、亚克隆后,获得2株能稳定分泌抗σB蛋白单克隆抗体的特异性杂交瘤细胞株,分别命名为3C3、4H11。经间接ELISA方法测定,2株单抗的亲和力解离常数分别为5.17×10-10和5.04×10-10,均为高亲和力抗体。2株单抗的重链类型分别为Ig G2a和Ig G2b。间接免疫荧光和Western Blot结果分析表明,该两株单抗均能特异性识别ARV感染DF-1细胞后产生的σB蛋白。以Western blot方法利用单抗检测不同截短的σB蛋白,初步确定3C3、4H11两株单抗抗原识别表位分别位于101 aa^120 aa之间和121 aa^140 aa之间。该单抗为检测ARV及研究ARVσB蛋白的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 呼肠病毒 σ-B蛋白 单克隆抗体
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禽呼肠孤病毒(ARV)p10蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
5
作者 何至远 吴海洋 +3 位作者 王永强 李晓齐 曹红 郑世军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第4期20-23,26,共5页
为了深入研究禽呼肠孤病毒(ARV)的致病机理,从其基因组中克隆病毒非结构蛋白p10基因,并将其与原核表达载体连接,转入大肠杆菌BL21中,使其表达携带His标签的p10融合蛋白,经镍柱纯化得到高纯度重组p10蛋白,以该蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠... 为了深入研究禽呼肠孤病毒(ARV)的致病机理,从其基因组中克隆病毒非结构蛋白p10基因,并将其与原核表达载体连接,转入大肠杆菌BL21中,使其表达携带His标签的p10融合蛋白,经镍柱纯化得到高纯度重组p10蛋白,以该蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,经过3次亚克隆后获得2株能够稳定分泌针对p10蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为2B12与4H10。通过间接ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)方法测定其腹水效价均为1:1.01×10~7,亲合力解离常数(kD)分别为3.91×10^(-10)、5.75×10^(-10),2株单抗的IgG亚型均为IgG2b。经Western Blot鉴定,该2株抗体均能特异性识别ARV感染DF-1细胞中的p10蛋白。这些单抗的制备为深入研究ARV的致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 呼肠病毒 p10蛋白 原核表达 单克隆抗体
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草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:11
6
作者 曾伟伟 王庆 +2 位作者 王英英 石存斌 吴淑勤 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期450-456,共7页
为了建立针对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)流行株的血清学检测方法,实验构建了能高效表达GCRV HZ08株主要衣壳蛋白VP4的重组表达载体pET32a-S6,利用纯化的VP4重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,经过克隆和筛选,获得3... 为了建立针对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)流行株的血清学检测方法,实验构建了能高效表达GCRV HZ08株主要衣壳蛋白VP4的重组表达载体pET32a-S6,利用纯化的VP4重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗VP4重组蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2C2、2F3和5E5。抗体经亚型鉴定均为IgG1,轻链为κ链;间接ELISA试验证明,3株杂交瘤细胞分泌的MAb可特异性识别GCRV-HZ08,与GSRV,ISKNV,IHNV均无交叉反应。选择2C2作为腹水生产细胞株,免疫小鼠后腹水ELISA效价为1∶720 000;IFA和Western-blotting结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的MAb能够特异性识别GCRV-HZ08病毒粒子。本实验制备的MAb具有良好的生物学特性,为GCRV流行株血清学检测方法的建立及VP4蛋白相关功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 草鱼呼肠病毒 VP4蛋白 单克隆抗体
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禽呼肠孤病毒S1733株单克隆抗体的制备及特性鉴定 被引量:5
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作者 谢志勤 谢芝勋 +5 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 彭宜 范晴 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第11期47-51,共5页
将增殖的禽呼肠孤病毒S1733毒株进行浓缩,然后进行蔗糖梯度纯化,测定纯化后病毒的浓度,按每只鼠100μg的病毒用量免疫BALB/c小鼠,免疫5次后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1进行融合。对融合后的杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经3次有限... 将增殖的禽呼肠孤病毒S1733毒株进行浓缩,然后进行蔗糖梯度纯化,测定纯化后病毒的浓度,按每只鼠100μg的病毒用量免疫BALB/c小鼠,免疫5次后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1进行融合。对融合后的杂交瘤细胞进行筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆。通过间接ELISA方法测定抗体效价,并通过Western blotting、Dot-ELISA、直接免疫荧光和中和反应等方法对2株单克隆抗体特性进行检测。试验结果表明,纯化的病毒含量为43 mg/mL,用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠后与骨髓瘤细胞融合,通过克隆筛选成功获得2株能稳定传代并分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株SF6-3K3和SB2-1K3。2株单克隆抗体的腹水经间接ELISA测定效价达105以上,其抗体为IgG1亚类,特异性试验表明其与其他病毒株没有交叉反应,具有良好的特异性,并且这2株单克隆抗体没有中和禽呼肠孤病毒的能力,具有识别禽呼肠孤病毒的能力,可以用于禽呼肠孤病毒的特异性检测。 展开更多
关键词 呼肠病毒 单克隆抗体 制备 鉴定
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禽呼肠孤病毒σ3蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定 被引量:3
8
作者 谢志勤 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 范晴 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期135-139,共5页
用体外表达的蛋白作为免疫原来制备特异的单克隆抗体,并对制备的抗体进行鉴定。将ARVσ3蛋白基因在体外扩增,扩增产物与载体PGEX-4T-1连接并在基因工程菌中表达,体外表达的蛋白经纯化后作为免疫原来制备特异的单克隆抗体和ELISA检测包... 用体外表达的蛋白作为免疫原来制备特异的单克隆抗体,并对制备的抗体进行鉴定。将ARVσ3蛋白基因在体外扩增,扩增产物与载体PGEX-4T-1连接并在基因工程菌中表达,体外表达的蛋白经纯化后作为免疫原来制备特异的单克隆抗体和ELISA检测包被抗原,测定纯化后蛋白的浓度,按每鼠100μg的蛋白用量免疫BALB/c小鼠,免疫4次后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1进行融合。对融合后的杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,通过间接E-LISA方法测定其抗体效价,并通过Western Blot、Dot-ELISA、直接免疫荧光、病毒中和等方法对获得的单抗特性进行检测。结果通过纯化的病毒含量为41.5 mg/mL,应用纯化的病毒免疫BALB/c小鼠后与骨髓瘤细胞融合,通过克隆筛选成功获得1株能稳定传代并分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株σ3 B6-3 K3,用其制备的腹水经间接E-LISA测定效价达105以上,并且与其他参试病毒株没有交叉反应,具有良好的特异性;病毒中和试验证明其中和能力低。应用ARVσ3蛋白制备并获得的杂交瘤细胞株σ3 B6-3 K3具有很好的特异性,不具有中和ARV的关键表位,可以用于ARV的特异性检测。 展开更多
关键词 呼肠病毒 σ3蛋白 单克隆抗体 制备 鉴定
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鱼呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定 被引量:9
9
作者 贺路 杜先林 +2 位作者 左文功 董继华 田慕贞 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 1990年第5期3-5,共3页
采用杂交瘤技术,用浓缩的鱼呼肠孤病毒(Fish Reovirus FRV)免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/O细胞融合,经筛选克隆,共获得B_7、C_6.D_9.G_7、E_4、F_5,F_7七株分泌抗鱼呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这七株细胞经液氮反... 采用杂交瘤技术,用浓缩的鱼呼肠孤病毒(Fish Reovirus FRV)免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/O细胞融合,经筛选克隆,共获得B_7、C_6.D_9.G_7、E_4、F_5,F_7七株分泌抗鱼呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这七株细胞经液氮反复冻存、复苏及连续培养,可稳定分泌抗FRV的单克隆抗体.这七株杂交瘤细胞的染色体数为90~98条,明显高于SP2/O细胞(71条).分泌的单克隆抗体经琼脂双扩散法证实分别属于小鼠r球蛋白中的IgG_1、IgG_(2a)和IgG_(26)亚类.ELISA测得腹水抗体滴度1:2万~1:40万,病毒中和试验显示C_6、G_7有中和作用,滴度达1:64. 展开更多
关键词 呼肠病毒 抗体 杂交瘤细胞株
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一株草鱼呼肠孤病毒检测用单克隆抗体的制备及其特性 被引量:4
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作者 杨倩 曹海鹏 +2 位作者 和永杏 姜有声 吕利群 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期240-241,共2页
草鱼出血病是由草鱼呼肠孤病毒(Grass CrapReovirus,GCRV)引起的病毒性疾病,传染性强,对草鱼的致死率极高,是危害我国水产养殖业最严重的疾病之一[1]。因此,采用快速有效的手段检测草鱼呼肠孤病毒对诊断草鱼出血病具有重要的意义。
关键词 呼肠病毒 病毒检测 单克隆抗体 草鱼 病毒性疾病 制备 出血病 传染性
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新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定 被引量:4
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作者 华炯钢 叶伟成 +4 位作者 倪征 陈柳 朱寅初 云涛 张存 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期428-434,共7页
B蛋白是新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的外衣壳蛋白之一,可诱导宿主机体产生群特异性抗体。为制备NDRVσB蛋白的单克隆抗体(MAb),并鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达后纯化的重组σB蛋白(rσB)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞融合... B蛋白是新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的外衣壳蛋白之一,可诱导宿主机体产生群特异性抗体。为制备NDRVσB蛋白的单克隆抗体(MAb),并鉴定其抗原表位,本研究利用原核表达后纯化的重组σB蛋白(rσB)免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞融合,以纯化的rσB为包被抗原,通过间接ELISA方法筛选出3株杂交瘤细胞,其分泌的MAb分别命名为10-A5、A1-A9和B7-E5。将NDRV ZJ00M株以MOI 0.01感染DF-1细胞72 h后收获细胞,通过western blot鉴定获得的MAb与天然表达的σB蛋白的反应性;分别将NDRV ZJ00M株、鸭经典呼肠孤病毒(CDRV)ZJ2000M株和鸡呼肠孤病毒(ARV)S1133株均以MOI 0.01感染DF-1细胞,48 h后经间接免疫荧光试验(IFA)鉴定MAb的交叉反应性。Western blot结果显示,3株MAb均在41 ku出现特异性条带,表明其均能够与NDRVσB蛋白发生特异性反应;IFA结果显示:3株MAb均与NDRV反应,而不与CDRV和ARV发生交叉反应。上述结果表明,本研究制备的MAb反应原性和特异性均较强。利用人工合成的37条NDRVσB蛋白多肽及其截短的多肽,采用肽扫描法结合间接ELISA方法对3株MAb识别的抗原表位进行鉴定,并通过抗原表位氨基酸序列比对,分析该抗原表位在禽正呼肠孤病毒各成员中的保守性。结果显示,3株MAb识别的最小抗原表位均为33DIEEFHTPDVI43,且该抗原表位氨基酸序列在不同地域和不同宿主来源的NDRV分离株间的保守性均较高。本研究首次制备了NDRVσB蛋白的MAb,并鉴定了其抗原表位及该表位的保守性,为NDRV检测方法和表位标记疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠病毒 σB蛋白 单克隆抗体 抗原表位
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禽腺病毒4型Fiber-2蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立
12
作者 刘文健 王帅雯 +5 位作者 吉梅 刘萌 汤智辉 张硕 宋素泉 闫丽萍 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第6期101-109,共9页
旨在制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber-2蛋白的单克隆抗体并建立Fiber-2蛋白的定量检测方法。本研究将原核表达的Fiber-2蛋白免疫BALB/c雌鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,并通过免疫印迹、间接免疫荧光和抗体相加试验筛选杂交瘤细胞株... 旨在制备禽腺病毒4型(FAdV-4)Fiber-2蛋白的单克隆抗体并建立Fiber-2蛋白的定量检测方法。本研究将原核表达的Fiber-2蛋白免疫BALB/c雌鼠,通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,并通过免疫印迹、间接免疫荧光和抗体相加试验筛选杂交瘤细胞株;以制备的单克隆抗体为捕获抗体和酶标检测抗体,通过优化捕获抗体包被浓度和酶标抗体稀释度等条件,建立特异性检测Fiber-2蛋白的双抗体夹心ELISA方法。结果:本研究成功筛选到3株能够稳定传代的杂交瘤细胞株1H2、2A9和3E1,其分泌的抗体均与FAdV-4全病毒具有良好的反应性,可识别不同抗原表位;进一步发现,以1H2为捕获抗体、2A9为酶标检测抗体,能够建立检测Fiber-2蛋白的ELISA方法;该方法具有良好的重复性,批内重复及批间重复试验变异系数均小于10%;敏感性高,Fiber-2蛋白检测限为0.078 ng/μL;特异性好,不与FAdV-4的其他结构蛋白及鸭腺病毒3型的Fiber-2蛋白发生反应。综上,本研究成功制备了3株Fiber-2蛋白单克隆抗体,并建立了定量检测Fiber-2蛋白的双抗体夹心ELISA方法,为后续FAdV-4基础研究和Fiber-2亚单位疫苗研究奠定了物质基础。 展开更多
关键词 病毒血清4型 单克隆抗体 抗体夹心ELISA
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抗番鸭呼肠孤病毒(MDRV)单克隆抗体的制备及应用 被引量:1
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作者 朱小丽 陈少莺 +5 位作者 蔡羲 程晓霞 林锋强 陈仕龙 王劭 李兆龙 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2012年第6期41-46,共6页
【目的】制备抗番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的单克隆抗体,建立番鸭呼肠孤病毒病的间接免疫荧光(IFA)快速诊断方法。【方法】制备MDRV抗原,用之免疫Babl/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,采用IFA和ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株... 【目的】制备抗番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的单克隆抗体,建立番鸭呼肠孤病毒病的间接免疫荧光(IFA)快速诊断方法。【方法】制备MDRV抗原,用之免疫Babl/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,采用IFA和ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备单克隆抗体,检测其生物学特性,应用制备的单克隆抗体建立MDRV IFA快速诊断方法。【结果】筛选到237-11,45-12和3-H3 3株特异性好并能稳定分泌抗MDRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中45-12株单抗为IgM亚型,237-11和3-H3株单抗为IgG3亚型。45-12和3-H3 2株单抗具有ELISA特性,效价分别为104和105;237-11株单抗具有IFA特性,效价达103。特异性测定结果显示,3株单抗仅与MDRV反应,而与正常细胞培养物(MDEF)、番鸭细小病毒(MPV)、鹅细小病毒(GPV)、禽呼肠孤病毒(ARV)、鸭副黏病毒(PMV)和鸭肝炎病毒(DHV)均无交叉反应。应用抗MDRV单抗建立的IFA方法与病毒分离法(VI)的符合率为91%。【结论】筛选到2株具有ELISA特性、1株具有IFA特性且能分泌抗MDRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,建立了MDRV IFA快速诊断方法,为番鸭呼肠孤病毒病的快速诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 番鸭呼肠病毒 单克隆抗体 间接免疫荧光
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半番鸭呼肠孤病毒单克隆抗体的制备
14
作者 许秀梅 苏敬良 +3 位作者 黄瑜 傅光华 程龙飞 赵继勋 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第1期29-30,共2页
关键词 番鸭呼肠病毒 单克隆抗体 呼肠病毒感染 呼肠病毒 病原分离鉴定 制备 病毒性关节炎 临床感染
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禽呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 孙美玉 秦立廷 +4 位作者 高玉龙 祁小乐 高宏雷 王永强 王笑梅 《中国家禽》 北大核心 2011年第12期18-21,共4页
通过RT-PCR扩增禽呼肠孤病毒σC基因,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后与pET-30a原核表达载体连接,获得重组质粒pET-30a-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后通过Western blot分析表明重组目的蛋白获得表达,分... 通过RT-PCR扩增禽呼肠孤病毒σC基因,经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后与pET-30a原核表达载体连接,获得重组质粒pET-30a-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后通过Western blot分析表明重组目的蛋白获得表达,分子量约为42ku,主要以包涵体形式存在。重组蛋白经纯化后免疫新西兰白兔,三次免疫获得抗σC蛋白的高效免疫血清。经ELISA检测,该血清抗体效价为1∶105,并且能够与重组杆状病毒表达的σC蛋白发生特异性反应。禽呼肠孤病毒σC蛋白的表达与兔抗血清的制备为进一步研究该蛋白功能奠定了基础。 展开更多
关键词 呼肠病毒 σC基因 原核表达 兔抗血清
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呼肠孤病毒单克隆抗体的研究
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作者 贺争鸣 刘佐民 +2 位作者 卫礼 吴惠英 张然 《北京实验动物科学》 1993年第3期21-23,共3页
本文采用杂文瘤技术获得一株分泌呼肠孤病毒Ⅲ型(ReovirtusType3)待异性抗体的杂交瘤细胞。三次克隆化后阳性率达100%,染色体数在84~109来之间,与10种其他鼠源性病毒和正常传队细胞(BSC-1)无非侍异性反应。蛋白免疫印迹试验结果表明:... 本文采用杂文瘤技术获得一株分泌呼肠孤病毒Ⅲ型(ReovirtusType3)待异性抗体的杂交瘤细胞。三次克隆化后阳性率达100%,染色体数在84~109来之间,与10种其他鼠源性病毒和正常传队细胞(BSC-1)无非侍异性反应。蛋白免疫印迹试验结果表明:单抗所针对的单一抗原决定簇为病毒外壳α表面多肽(54KD)。血凝抑制抗体和中和抗体效价分别为1:128和1:32一64。 展开更多
关键词 单克隆抗体 呼肠病毒
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抗禽呼肠孤病毒S_(1133)株的单克隆抗体
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作者 李秉鸿 《畜牧兽医科技信息》 1996年第12期6-6,共1页
美国Auburn大学的学者们研究出抗禽呼肠孤病毒S<sub>1133</sub>株的单克隆抗体。单抗经同型鉴定用以诊断试验。做ELISA试验,从免疫小鼠中筛选脾细胞,两个杂交瘤(E<sub>9</sub>和H<sub>3</sub>)... 美国Auburn大学的学者们研究出抗禽呼肠孤病毒S<sub>1133</sub>株的单克隆抗体。单抗经同型鉴定用以诊断试验。做ELISA试验,从免疫小鼠中筛选脾细胞,两个杂交瘤(E<sub>9</sub>和H<sub>3</sub>)分泌抗S<sub>1133</sub>株禽呼肠孤病毒的单克隆抗体,E<sub>9</sub>分泌IgGl,H<sub>3</sub>分泌IgG<sub>2n</sub>,所有单抗轻链为K链。经试验这些单抗具有抗禽呼肠孤病毒四种毒株:S<sub>1133</sub>,1733,CO<sub>8</sub>和2408的特性。S<sub>1133</sub>,1733和2408为相同亚型,CO<sub>8</sub>株属另一亚型。在ELISA、点印迹、免疫荧光和免疫印迹的试验中。 展开更多
关键词 呼肠病毒 单克隆抗体 免疫印迹分析 诊断试验 ELISA试验 杂交瘤 免疫荧光 成纤维细胞 石蜡包埋组织 脾细胞
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禽呼肠孤病毒在我国部分地区蛋鸡群中的血清流行率和风险因素分析 被引量:1
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作者 郑好 杨霞 +8 位作者 张素 赵一萌 汤君宇 高丽 曹红 马国明 王占新 郑世军 王永强 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期1-8,共8页
禽呼肠孤病毒(ARV)在我国流行范围较广,感染家禽后使其出现病毒性关节炎、生长不良和产蛋量下降等表现,对我国养禽业造成较严重的经济损失。为了解我国蛋鸡群中ARV的流行情况及存在的感染风险因素,本试验在2022年11月—2023年3月从北京... 禽呼肠孤病毒(ARV)在我国流行范围较广,感染家禽后使其出现病毒性关节炎、生长不良和产蛋量下降等表现,对我国养禽业造成较严重的经济损失。为了解我国蛋鸡群中ARV的流行情况及存在的感染风险因素,本试验在2022年11月—2023年3月从北京、天津、河北、山东、河南、江苏、陕西、湖北和重庆9个省市的45个蛋鸡养殖场(其中包括祖代蛋鸡群、父母代蛋鸡群和商品代蛋鸡群),收集共计45份调查问卷和968份血清样本。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的ARV抗体,并结合调查问卷,采用单因素分析和逻辑回归分析方法找到蛋鸡出现ARV感染症状的风险因素。ELISA检测结果显示,968份血清样本中检出阳性863份,阳性率为89.15%(95%CI:87.0%~91.0%);单因素分析结果显示,全进全出饲养模式下的蛋鸡出现ARV感染症状的概率显著低于区域性全进全出饲养模式或不同日龄、不同批次混养饲养模式下的蛋鸡,且具有较强程度的关联(P<0.05,0.1<OR<0.3);生物安全防控严格的大、中型规模化养殖场(5万只以上)的蛋鸡出现ARV感染症状的概率显著低于生物安全防控存在不足的小型养殖场(2万~5万只)的蛋鸡,且具有较强程度的关联(P<0.05,0.1<OR<0.3);员工不注意对鸡舍消毒的养殖场饲养的蛋鸡出现ARV感染症状的概率显著高于员工对鸡舍具有较强或一般消毒意识的养殖场饲养的蛋鸡,具有中等程度的关联(P<0.05,1.5<OR<3.0)。综上所述,饲养模式、养殖场规模和员工对鸡舍的消毒意识可能是产蛋鸡群感染ARV的风险因素。 展开更多
关键词 蛋鸡 呼肠病毒(ARV) 抗体检测 风险因素
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番鸭呼肠孤病毒p10.8蛋白单克隆抗体的制备
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作者 屈贵蜀 何晴 +6 位作者 严梦涵 陆芍华 黄瑞玲 彭瑶顺 庄许诺 许丽惠 王全溪 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2021年第5期655-660,共6页
为制备番鸭呼肠孤病毒(MDRV)p10.8蛋白的单克隆抗体(mAb),利用原核表达系统表达p10.8蛋白,采用Ni-NTA亲和层析法对其进行纯化,选择BALB/c小鼠进行免疫.4免后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,并以纯化的重组p10.8蛋白作为抗... 为制备番鸭呼肠孤病毒(MDRV)p10.8蛋白的单克隆抗体(mAb),利用原核表达系统表达p10.8蛋白,采用Ni-NTA亲和层析法对其进行纯化,选择BALB/c小鼠进行免疫.4免后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,并以纯化的重组p10.8蛋白作为抗原包被,用间接ELISA法筛选到1株针对MDRV p10.8蛋白的能稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株,命名为H3-7B株.用Western blotting法进行检测,以H3-7B株上清为一抗,分别与原核、真核表达系统获得的重组p10.8蛋白反应,结果均呈阳性.用抗体亚类试剂盒进行抗体亚类测定,显示H3-7B株mAb亚型为IgG2a类.用MDRV、禽腺病毒、鸭坦步苏病毒3种病毒与H3-7B株mAb进行Western blotting鉴定反应,特异性反应结果表明,H3-7B株mAb与MDRV反应呈阳性,特异性较好.结论:本试验成功制备了抗MDRV p10.8蛋白的mAb. 展开更多
关键词 番鸭呼肠病毒 p10.8蛋白 单克隆抗体
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鸭呼肠孤病毒p18重组蛋白表达、纯化及其单克隆抗体制备
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作者 黄聪 刘志艺 +6 位作者 刘忠媛 黄远玲 李嘉 刘静宜 刘英楠 陈鸿军 陈宗艳 《中国家禽》 北大核心 2023年第12期53-58,共6页
研究旨在制备DRV p18蛋白单克隆抗体。试验通过原核表达并纯化DRV p18重组蛋白,经BCA蛋白浓度测定后免疫BALB/c小鼠;通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,获得的p18单克隆抗体通过ELISA、IFA和Western blot试验进行鉴定,并将杂交瘤细胞腹腔... 研究旨在制备DRV p18蛋白单克隆抗体。试验通过原核表达并纯化DRV p18重组蛋白,经BCA蛋白浓度测定后免疫BALB/c小鼠;通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,获得的p18单克隆抗体通过ELISA、IFA和Western blot试验进行鉴定,并将杂交瘤细胞腹腔注射小鼠获得单抗腹水,通过Western blot试验验证其特异性。结果显示:纯化的重组p18蛋白浓度为1.37 mg/mL,经过三轮亚克隆获得4株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1E3、2C4、4A2和4D4,亚型鉴定1E3和4D4重链为IgG1型、2C4重链为IgM型、4A2为IgG2b型,轻链均为κ型;4株单克隆抗体均能使感染DRV的BHK-21细胞发出特异性荧光,并在18 ku处存在特异性条带;4D4腹水ELISA效价为1∶409600,Western blot效价达1∶102400,IFA效价为1∶51200;4D4与DRV反应,而不与其他禽源常见病毒反应。研究成功制备了抗DRV p18蛋白的单克隆抗体,为进一步研探究p18蛋白的功能奠定基础。 展开更多
关键词 呼肠病毒 p18蛋白 单克隆抗体
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