期刊文献+
共找到36篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
广西H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的筛选
1
作者 李孟 谢芝勋 +7 位作者 李丹 徐倩 罗思思 张民秀 谢丽基 黄超 沈前程 黄娇玲 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期243-252,共10页
【目的】筛选出免疫原性更优的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗候选株用于新型疫苗研发,为加强对H9N2亚型AIV的防控提供技术支持。【方法】以2000—2020年广西地区分离获得的36株H9N2亚型AIV分离株为试验材料,依据HA基因遗传进化分析选择1... 【目的】筛选出免疫原性更优的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗候选株用于新型疫苗研发,为加强对H9N2亚型AIV的防控提供技术支持。【方法】以2000—2020年广西地区分离获得的36株H9N2亚型AIV分离株为试验材料,依据HA基因遗传进化分析选择12株不同年份、不同地域及不同宿主来源的H9N2亚型AIV代表株,与目前使用的商品化H9亚型AIV疫苗株(SS株)进行交叉血凝抑制试验(HI)及抗原性分析,根据抗原分析结果选择其中具有不同抗原差异的代表株制备油乳剂灭活疫苗,并分别与商品化H9亚型AIV疫苗(SS株)进行交叉免疫保护试验。【结果】在36株H9N2亚型AIV广西分离株中有31株属于Y280-Like(9.4.1),其中26株属于分支I、5株属于分支II,另外5株属于G1-Like(h9.4.1),与我国常用疫苗株分属于不同进化分支。12株H9N2亚型AIV广西代表性分离株灭活后的HA效价≥7 log2,病毒灭活效果良好,可用于制备油乳剂灭活疫苗,且制备的油乳剂灭活疫苗稳定性和安全性良好。根据交互HI抗体滴度计算出各毒株间的抗原相关值(R),结果发现A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株(简称C227株)与其他毒株的抗原性无明显差异,对应的R在0.72~0.93间波动;疫苗交叉保护试验结果也表明,C227株制备的油乳剂灭活疫苗对不同毒株的免疫保护率均高于80%,且免疫保护效果优于A/chicken/Guangxi/CX/2013(H9N2)株(简称CX13株),说明C227株更适合作为H9N2亚型AIV灭活疫苗的候选株。【结论】基于抗原性分析和免疫原性测定筛选出的A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株对广西地区绝大部分H9N2亚型AIV流行株的免疫保护效果良好,可作为疫苗候选株用于研制新型H9N2亚型AIV疫苗。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) H9N2亚型 油乳灭活疫苗 抗原相关性 疫苗交叉保护
下载PDF
禽流感病毒抗原成份免疫活性的分析研究 被引量:6
2
作者 李海燕 于康震 +4 位作者 辛晓光 田国彬 李雁冰 张晶 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期94-97,共4页
用SDS-PAGE和Western-blot对纯化的禽流感病毒(AIV)A/Duck/Ukraine/1/63(H3N8)进行分析,该病毒主要有14种多肽成份。其中11种成份可被AIV多克隆阳性血清特异性识别,分子量... 用SDS-PAGE和Western-blot对纯化的禽流感病毒(AIV)A/Duck/Ukraine/1/63(H3N8)进行分析,该病毒主要有14种多肽成份。其中11种成份可被AIV多克隆阳性血清特异性识别,分子量分别为95.79KDa、76KDa、70.1KDa、63.17KDa、58.73KDa、50.62KDa、44.5KDa、31.82KDa、29.67KDa、23.67KDa、17.96KDa,这些成份相对百分含量之和为 86.33%;另有分子量为 84.53KDa、12.50KDa和10.05KDa的三种多肽成份不具有抗原性。用0.05%的NP-40处理病毒蛋白作为间接酶联免疫吸附试验(间接-ELISA)、斑点-ELISA和琼脂凝胶扩散(AGP)试验用抗原,能检出禽流感各亚型阳性血清,而与鸡新城疫(ND)、鸡马立克氏病(MD)、鸡传染性支气管炎(IB)、鸡传染性法氏囊病(IBD)、鸡传染性贫血(CIA)、鸡白痢(PD)、鸡鼻炎(IC)、鸡腺病毒感染(ADV)、鸡减蛋综合征(EDS-76)、病毒性关节炎(VA)、禽霍乱(FC)、鸡传染性喉气管炎(ILT)、鸡白血病(AL)、鸡痘(AP),鸡慢性呼吸? 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) 蛋白分析 抗原性 免疫活性
下载PDF
禽流感病毒疫苗研究进展 被引量:13
3
作者 谭伟 谢丽基 谢芝勋 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1492-1497,共6页
疫苗接种仍然是防控禽流感的最有效措施之一,目前有紧急接种、预防接种、系统接种及替代接种等4种常见形式。禽流感疫苗的主要类型包括灭活全病毒疫苗、亚单位疫苗、重组病毒载体疫苗、DNA疫苗、复制缺陷型疫苗、病毒样颗粒疫苗及通用... 疫苗接种仍然是防控禽流感的最有效措施之一,目前有紧急接种、预防接种、系统接种及替代接种等4种常见形式。禽流感疫苗的主要类型包括灭活全病毒疫苗、亚单位疫苗、重组病毒载体疫苗、DNA疫苗、复制缺陷型疫苗、病毒样颗粒疫苗及通用疫苗等,影响其免疫效果的因素有免疫原选择及佐剂类型、病毒变异、决策机构的反应速度、免疫覆盖率、疫苗质量及稳定性、遗传结构及机体免疫状态、加强免疫方案等。鉴于传统禽流感疫苗不能对不同亚型禽流感病毒(AIV)及变异株提供交叉保护,且所使用的油佐剂副作用较大,对动物机体损伤较严重,今后应加强研制新型免疫佐剂及其他更安全高效的新型疫苗来弥补现有禽流感疫苗的不足。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) 疫苗 类型 影响因素 免疫效果
下载PDF
禽流感病毒分子生物学检测技术研究进展 被引量:10
4
作者 但晓雅 董英 +1 位作者 邹明强 薛强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期213-216,共4页
禽流感(avian influenza,AI)是A型流感病毒引起的一种禽类传染病,同时也是一种人和动物之间的高度传染性疾病。近年来,禽流感病毒的分子生物学检测技术发展迅速,文章就此进行了综述。
关键词 禽流感病毒(aiv) 分子生物学 检测
下载PDF
新城疫病毒和禽流感病毒复合型胶体金免疫层析试纸条的制备 被引量:11
5
作者 李蓓蓓 薛强 +3 位作者 李锦丰 张帆 邹明强 杨屹 《畜牧与兽医》 北大核心 2009年第8期33-37,共5页
为了建立一种简便、快速而且能同时检测新城疫病毒(NDV)和禽流感病毒(AIV)的方法,本试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,分别标记NDV单克隆抗体6C4和AIV单克隆抗体制备免疫检测探针。在硝酸纤维素膜上,用微定量喷头喷好2条病毒检测... 为了建立一种简便、快速而且能同时检测新城疫病毒(NDV)和禽流感病毒(AIV)的方法,本试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,分别标记NDV单克隆抗体6C4和AIV单克隆抗体制备免疫检测探针。在硝酸纤维素膜上,用微定量喷头喷好2条病毒检测线(T线)和1条羊抗鼠抗体质控线(C线),制备复合型免疫层析检测试纸条。结果在10 min内,可同时检测出两种病毒。试纸条检测NDV的灵敏度比HA试验结果提高8倍;AIV重组抗原的检测灵敏度为1.7μg/mL。两种病毒互相测试,未出现交叉反应。用缓冲液对照测试结果为阴性。在密封、干燥、低温的条件下,试纸条的灵敏性与特异性没有明显变化。说明本研究建立的NDV和AIV免疫层析检测法具有特异、灵敏、稳定、操作简单等特点,符合现场快速检测的要求。 展开更多
关键词 新城疫病毒(NDV) 禽流感病毒(aiv) 金标试纸条 胶体金
下载PDF
TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR技术快速检测H5亚型禽流感病毒 被引量:19
6
作者 卢亦愚 严菊英 +3 位作者 冯燕 徐昌平 史雯 茅海燕 《中国病毒学》 CSCD 2006年第5期472-476,共5页
建立以TaqMan-MGB荧光探针为特点的荧光定量RT-PCR方法,用于检测H5亚型禽流感病毒。针对H5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区域设计特异性引物与TaqMan-MGB荧光探针,筛选并优化荧光定量RT-PCR反应体系与反应条件,用以提高方法的特异... 建立以TaqMan-MGB荧光探针为特点的荧光定量RT-PCR方法,用于检测H5亚型禽流感病毒。针对H5亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因保守区域设计特异性引物与TaqMan-MGB荧光探针,筛选并优化荧光定量RT-PCR反应体系与反应条件,用以提高方法的特异性、敏感性与准确性;并通过体外克隆技术建立病毒基因拷贝数进行定量分析。结果表明:引物与探针的优化浓度分别640nmol/L和480nmol/L,体系具有良好的保守性和特异性,与其他呼吸道病毒均无交叉反应。方法检测灵敏度为100拷贝/反应,标准曲线线性范围为107~102拷贝/反应,从病毒核酸提取至检测完成仅需3h左右,操作简便,重现性好。本研究建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法特异、敏感、快速,适合于临床实验室进行H5亚型禽流感病毒的快速定量检测。 展开更多
关键词 荧光定量RT-PCR TAQMAN-MGB探针 H5亚型禽流感病毒(aiv H5)
下载PDF
H6N6亚型禽流感病毒N6基因的原核表达与多克隆抗体制备 被引量:4
7
作者 万润 华敏 +6 位作者 龙立书 贺欣薇 罗引幸 周碧君 王开功 程振涛 文明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期2989-2995,共7页
为表达H6N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)神经氨酸酶(NA)蛋白,并制备多克隆抗体,本试验根据GenBank中AIV N6基因序列(登录号:MG434500)设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型AIV贵州株进行N6基因PCR扩增,将其克隆到原... 为表达H6N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)神经氨酸酶(NA)蛋白,并制备多克隆抗体,本试验根据GenBank中AIV N6基因序列(登录号:MG434500)设计特异性引物,对贵州地区分离的H6N6亚型AIV贵州株进行N6基因PCR扩增,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组原核表达载体pET-32a-N6,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达His-N6重组蛋白,将诱导产物超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化,并利用SDS-PAGE和Western blotting对表达蛋白进行双重鉴定,将纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并通过间接ELISA检测其效价。结果显示,AIV贵州株N6基因编码区长1 380bp,可编码459个氨基酸,其中175-207bp缺失33个核苷酸;重组质粒pET-32a-N6经双酶切鉴定分别获得大小为5 900bp左右的载体条带和1 380bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-32a-N6重组质粒;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,重组蛋白主要存在于沉淀中,以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为70ku,与预期结果一致;纯化后的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在70ku处出现条带,说明纯化的蛋白为重组蛋白pET-32a-N6,表达产物具有免疫学活性,包涵体经变性、复性处理,重组表达蛋白分别被His抗体和兔源抗N6多克隆抗体所识别。间接ELISA检测其效价高于1∶3 200。以上结果表明,试验成功克隆、表达了H6N6亚型AIV的N6基因,所制备的N6蛋白多克隆抗体具有良好的免疫活性,能被His抗体和兔源抗N6多克隆抗体所识别。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) N6亚型 原核表达 多克隆抗体
下载PDF
H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体制备及鉴定 被引量:2
8
作者 邓显文 谢芝勋 +9 位作者 谢志勤 刘加波 庞耀珊 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 张艳芳 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期679-683,共5页
【目的】制备H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)单克隆抗体,为检测诊断AIV提供技术支持。【方法】以灭活H9亚型AIV广西分离株为免疫原,免疫6~8周BALB/c雌性小鼠,然后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经血凝抑制试验(HI)及间接... 【目的】制备H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)单克隆抗体,为检测诊断AIV提供技术支持。【方法】以灭活H9亚型AIV广西分离株为免疫原,免疫6~8周BALB/c雌性小鼠,然后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经血凝抑制试验(HI)及间接免疫荧光试验(IFA)筛选H9亚型AIV血凝素单克隆抗体的杂交瘤细胞。【结果】经过4次亚克隆,获得3株稳定的H9单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为8A4、1B11和7F1细胞株,其细胞株培养上清液HI效价为2~7~2^(10),腹水HI效价为2^(16)~2^(19);单克隆抗体亚类鉴定结果表明,3株H9单克隆抗体均属于Ig G1亚类,其轻链均为K链。3株H9单克隆抗体只与H9亚型AIV发生特异性HI反应,而与其他HA亚型AIV及新城疫病毒(NDV)、减蛋综合症病毒(EDS)、传染性支气管炎病毒(IBV)无交叉反应。3株H9单克隆抗体细胞株的抗体分泌能力稳定性良好。【结论】用灭活H9亚型AIV为免疫原能成功制备针对H9亚型AIV血凝素的单克隆抗体,且具有良好的亚型广谱性和特异性。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) H9亚型 血凝素 单克隆抗体 HI效价 亚型广谱性
下载PDF
禽肉产品中禽流感与新城疫病毒多重RT-PCR检测方法的建立 被引量:4
9
作者 单松华 汪敏 +4 位作者 金维荣 刘俊平 秦红友 陶琦 吴徐华 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2006年第6期507-512,共6页
根据禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,经优化单项RT-PCR(sRT-PCR)反应体系,建立的多重RT-PCR(mRT-PCR)同时检测禽流感、新城疫的极限分别为10-2.5 EID50/0.1 mL和10-3.75 EID50/0.1 mL,mRT-PCR检测禽流感的敏感性与sRT-... 根据禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,经优化单项RT-PCR(sRT-PCR)反应体系,建立的多重RT-PCR(mRT-PCR)同时检测禽流感、新城疫的极限分别为10-2.5 EID50/0.1 mL和10-3.75 EID50/0.1 mL,mRT-PCR检测禽流感的敏感性与sRT-PCR一致,mRT-PCR检测新城疫的敏感性较sRT-PCR敏感性下降2个数量级。特异性试验表明,mRT-PCR仅检测到不同亚型(H1、H3、H5、H6和H9)禽流感、不同毒力新城疫病毒,对其他9种禽病原体和SPF鸡尿囊液均未扩增出片断。mRT-PCR检测39株禽流感H1、H5和H9亚型病毒、41株不同宿主源新城疫病毒,结果与sRT-PCR、HI试验完全一致;mRT-PCR和病原分离法同时检测人工感染鸡的组织脏器,2种方法检测禽流感的符合率为93.8%(30/32),检测新城疫的符合率为95.2%(20/21);采用mRT-PCR和病原分离法同时对35份进口禽产品、32份鸡粪拭子检测,2种方法检测禽流感的符合率为100%(67/67),对新城疫的符合率为97.1%(65/67)。病原分离法的检出率虽高于mRT-PCR,经统计学分析,两者差异不显著。 展开更多
关键词 禽流感(aiv) 新城疫病毒(NDV) 多重RT-PCR 禽产品 检测
下载PDF
广西鸡源H9N2亚型禽流感病毒分离鉴定及遗传进化分析 被引量:6
10
作者 张艳雯 何永权 +3 位作者 吴云月 于冬玲 曾文榜 宁志鹏 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期780-786,共7页
【目的】明确广西鸡源H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的分子遗传变异规律及其对公共卫生安全的影响,为H9亚型禽流感(AI)的防控提供参考依据。【方法】从广西某肉鸡养殖场采集病料,经SPF鸡胚接种进行病毒分离,对初步鉴定为H9亚型AIV分离株的HA... 【目的】明确广西鸡源H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的分子遗传变异规律及其对公共卫生安全的影响,为H9亚型禽流感(AI)的防控提供参考依据。【方法】从广西某肉鸡养殖场采集病料,经SPF鸡胚接种进行病毒分离,对初步鉴定为H9亚型AIV分离株的HA、NA、PB2、PB1、PA、NP、M和NS等8个基因片段进行克隆测定及遗传进化分析,同时对分离毒株的生物学特性进行测定。【结果】从广西发病鸡群中分离获得一株H9N2亚型AIV,命名为A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2)。分离毒株A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2)HA基因的裂解位点为PSRSSR↓GLF,具有典型的低致病性AIV(LPAIV)分子特征,在遗传进化关系上属于4.2.5分支,与国内常用H9N2亚型AIV疫苗株所属的4.2.3分支存在一定差异;其他7个基因也分别来源于不同的AIV亚型。分离毒株A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2)同时具备与α-2,3唾液酸和α-2,6唾液酸受体结合的特性,且具有感染人类的潜在风险;其感染鸡群后病毒分布主要集中在气管、肺脏和脾脏,可通过呼吸道和消化道同时排毒,且在攻毒后第1 d即开始排毒,第5 d为排毒高峰。【结论】从广西发病鸡群中分离获得的A/chicken/Guangxi/BT1/2016(H9N2)属于LPAIV,是由不同亚型AIV重组产生的H9N2亚型新毒株,可导致鸡群疫苗免疫失败,且具有感染人类的潜在风险。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) H9N2亚型 分离鉴定 遗传进化 裂解位点 受体结合特性 广西
下载PDF
3株广西麻雀源H9N2亚型禽流感病毒对SPF鸡的致病性 被引量:2
11
作者 李孟 李丹 +7 位作者 谢芝勋 罗思思 谢丽基 张民秀 黄娇玲 邓显文 曾婷婷 阮志华 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期3257-3265,共9页
【目的】明确麻雀源H9N2亚型禽流感病毒(AIV)对鸡群的致病性,既有利于了解麻雀在H9N2亚型AIV传播生态链中的作用,对科学防控H9N2亚型AIV的暴发流行也具有重要意义。【方法】选取3株HA基因处于不同进化分支的广西麻雀源H9N2亚型AIV进行SP... 【目的】明确麻雀源H9N2亚型禽流感病毒(AIV)对鸡群的致病性,既有利于了解麻雀在H9N2亚型AIV传播生态链中的作用,对科学防控H9N2亚型AIV的暴发流行也具有重要意义。【方法】选取3株HA基因处于不同进化分支的广西麻雀源H9N2亚型AIV进行SPF鸡致病性试验,将84羽4周龄SPF鸡随机均分为4组(空白对照组和3个感染组)。感染组每组以100μL稀释至106EID_(50)/100μL的病毒液经鼻腔感染16羽SPF鸡,于病毒感染24 h后分别在各感染组放入剩余的5羽SPF鸡作为空白接触组,感染后观察鸡群的临床症状及剖检病理变化,在不同时间点采集器官组织制作病理切片并检测不同器官中的病毒滴度及分布情况。【结果】3株麻雀源H9N2亚型AIV在HA蛋白裂解位点处不存在多个碱性氨基酸插入现象,表现为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV(LPAIV)的典型分子特征;对鸡胚的半数感染量(EID_(50))在10^(-6.0)/0.2 m L~10^(-6.8)/0.2 m L,半数致死量(ELD50)在10^(-6.8)/0.2 mL~10^(-7.2)/0.2 mL。3株H9N2亚型AIV均可直接感染SPF鸡,且病毒在不同器官中的滴度及分布存在一定差异;感染SPF鸡后均未表现出明显的临床症状和死亡现象,但在上呼吸道的气管及肺脏出现一定程度的充血和出血、气管纤毛脱落及炎性淋巴细胞浸润等病变。3株麻雀源H9N2亚型AIV感染SPF鸡后的排毒期主要介于第1~7 d,且能不经体内适应而直接感染鸡群并排毒;3株麻雀源H9N2亚型AIV在SPF鸡各器官中的复制能力存在一定差异,可在气管和肺脏中进行有效复制,而在肝脏、脑、胰腺、胸腺、心脏、盲肠扁桃体及法氏囊中均未检测到对应的病毒。【结论】麻雀源H9N2亚型AIV可直接感染鸡群且具有在鸡群间水平传播的潜在风险,提示在家禽饲养、运输及销售等环节要做好相关的防护措施,切断AIV在野鸟与家禽间的传播途径,减少禽流感暴发造成的经济损失。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) 麻雀源 H9N2亚型 HA基因 致病性
下载PDF
一株鸭源H1N6亚型禽流感病毒的分离鉴定及HA和NA基因序列分析 被引量:2
12
作者 熊文婕 谢芝勋 +3 位作者 李孟 曹国敏 覃海 严小东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第2期310-319,共10页
为了解禽流感病毒(AIV)在广西中越边境地区的流行情况,本研究在该地区活禽市场开展禽流感病原监测。监测过程中分离鉴定出1株H1N6亚型禽流感病毒,命名为A/Duck/Guangxi/F01/2016(H1N6),对其HA和NA基因进行序列测定,并与GenBank中下载的... 为了解禽流感病毒(AIV)在广西中越边境地区的流行情况,本研究在该地区活禽市场开展禽流感病原监测。监测过程中分离鉴定出1株H1N6亚型禽流感病毒,命名为A/Duck/Guangxi/F01/2016(H1N6),对其HA和NA基因进行序列测定,并与GenBank中下载的相关参考序列进行比对和遗传进化分析。结果显示,分离株HA基因与A/sparrow/Guangxi/GXs-1/2012(H1N2)的核苷酸同源性最高(96.9%),NA基因与A/Pavo cristatus/Jiangxi/JA1/2016(H5N6)的核苷酸同源性最高(98.2%)。HA基因裂解位点氨基酸序列为PSIQSR↓GLF,符合低致病性禽流感病毒分子特征;与部分N6亚型禽流感病毒一样,分离株NA基因有11个氨基酸缺失。此外,本研究还对分离毒株的受体亲和性进行了测定,结果显示该病毒优先结合唾液酸α-2,3-Gal受体。本研究结果表明A/Duck/Guangxi/F01/2016(H1N6)是一株重组低致病性禽流感病毒。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) H1N6亚型 序列分析
下载PDF
禽流感病毒NS1蛋白与鸡LY6E蛋白间的相互作用 被引量:1
13
作者 张万坡 田文霞 +2 位作者 李建丽 程国富 毕丁仁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期627-630,645,共5页
利用细菌双杂交系统,研究了禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)非结构蛋白(Nonstructurol1protein,NS1)和鸡淋巴细胞抗原复合体(LY6E)蛋白之间的相互作用。用RT-PCR方法克隆了AIV NS1基因和鸡LY6E基因的全长开放阅读框,将其克隆于... 利用细菌双杂交系统,研究了禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)非结构蛋白(Nonstructurol1protein,NS1)和鸡淋巴细胞抗原复合体(LY6E)蛋白之间的相互作用。用RT-PCR方法克隆了AIV NS1基因和鸡LY6E基因的全长开放阅读框,将其克隆于细菌双杂交系统中的2个质粒中,成功构建了重组诱饵质粒pBT/NS1和重组目标质粒pTRG/LY6E。SDS-PAGE电泳表明,IPTG诱导后它们均得到正确表达。将重组质粒pBT/NS1和pTRG/LY6E共转化报告菌株,获得的阳性共转化子在含有3-AT和链霉素的组氨酸缺失的M9+筛选培养基上生长,表明AIV NS1蛋白和鸡LY6E蛋白之间存在相互作用,为AIV致病机制的研究提供了新的资料。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) NS1蛋白 LY6E蛋白 细菌双杂交 蛋白相互作用
下载PDF
禽流感病毒与鸡细小病毒二重PCR检测方法的建立 被引量:8
14
作者 何莹 谢芝勋 +7 位作者 罗思思 李孟 谢丽基 邓显文 谢志勤 奉彬 黄娇玲 张艳芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期2126-2131,共6页
为建立一种能同时鉴别诊断禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的检测方法,本研究根据GenBank中AIV的M基因和ChPV的NS基因保守序列,分别设计并筛选出两对特异性引物,用于AIV和ChPV的检测。通... 为建立一种能同时鉴别诊断禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和鸡细小病毒(chicken parvovirus,ChPV)的检测方法,本研究根据GenBank中AIV的M基因和ChPV的NS基因保守序列,分别设计并筛选出两对特异性引物,用于AIV和ChPV的检测。通过优化反应条件,建立了AIV和ChPV二重PCR检测方法。试验结果表明,该方法特异好,能同时检测AIV和ChPV,对其他常见的禽病病原体均未反应;该法对AIV和ChPV的检测下限均为100fg;对159份临床样品检测结果与PCR阳性产物测序结果一致。本研究建立的AIV和ChPV二重PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高的特点,对AIV和ChPV的防制具有重要意义。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) 鸡细小病毒(ChPV) 二重PCR 检测
下载PDF
一株H_5亚型禽流感病毒血凝素基因的克隆与序列分析
15
作者 高志杰 梁秋婵 +1 位作者 刘铀 陈绍红 《广东海洋大学学报》 CAS 2007年第3期107-111,共5页
根据GenBank中发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列设计2对引物,用RT-PCR方法从禽流感病毒广东分离病毒株(A/Chicken/Guangdong/1997)中扩增HA基因cDNA片段,并将其克隆至pMD-18T载体进行核苷酸序列测定。结果表明:用2对引物所扩增的片... 根据GenBank中发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列设计2对引物,用RT-PCR方法从禽流感病毒广东分离病毒株(A/Chicken/Guangdong/1997)中扩增HA基因cDNA片段,并将其克隆至pMD-18T载体进行核苷酸序列测定。结果表明:用2对引物所扩增的片段大小分别约为1300 bp和800 bp,经序列拼接获得的HA基因cDNA长度约为1601 bp,编码533个氨基酸,与国内己发表的11个代表株的核苷酸和氨基酸序列同源性为分别为96.9%~99.9%和86.5%~93.0%;HA基因编码的氨基酸序列的系统进化树也表明A/Chicken/Guang-dong/1997、A/Goose/Huadong/01/2000、A/Ck/Hk/37.4/2002、A/Chicken/Zhoukou/2/02、A/Duck/Guangxi/53/2002、A/Duck/Fujian/01/2002等毒株处于同一进化枝,亲缘关系较近;而与A/Silly/Chicken/Hongkong/SF189/01株处于不同进化枝,亲缘关系较远。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) H5 亚型 HA基因 克隆 序列分析
下载PDF
一株H_5N_1亚型禽流感病毒株NA基因的克隆与序列分析
16
作者 陈绍红 刘艳芬 +1 位作者 张静 刘铀 《广东海洋大学学报》 CAS 2007年第4期85-88,共4页
用RT-PCR方法从1个H5N1亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Guangdong/DH/1997扩增NA基因cDNA片段,将其克隆至pMD18-T载体,获得重组质粒pMD-NA,并对其核苷酸序列进行测定和分析。结果表明,该毒株的NA基因长度为1350bp,编码449个氨基酸,与其... 用RT-PCR方法从1个H5N1亚型禽流感病毒分离株A/Chicken/Guangdong/DH/1997扩增NA基因cDNA片段,将其克隆至pMD18-T载体,获得重组质粒pMD-NA,并对其核苷酸序列进行测定和分析。结果表明,该毒株的NA基因长度为1350bp,编码449个氨基酸,与其它H5N1亚型AIV分离株的核苷酸序列同源性为97.0%~99.4%,氨基酸序列同源性为97.7%~99.1%,提示禽流感病毒NA基因保守性较高。NA基因氨基酸序列的聚类分析表明该毒株与来自香港的A/Pheasant/HK/FY155/01和A/Ch/HK/FY150/01两个分离株处于同一进化枝,亲缘关系较近。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) H5N1亚型 NA基因 克隆 序列分析
下载PDF
2016—2017年湖北省部分湿地野鸟携带禽流感情况调查
17
作者 陈婧 张晓霜 +5 位作者 杨国祥 朱功良 李勇 陈光 张俊 何武 《湖北农业科学》 2021年第S01期298-300,共3页
野生鸟类是禽流感病毒的天然宿主,对禽流感的传播起到重要作用。为了解湖北省湿地野鸟携带禽流感的情况,于2016—2017年对湿地野鸟进行了监测,对采集的野鸟粪便进行了病毒分离和鉴定。结果表明,野鸟禽流感阳性率呈上升趋势,主要亚型为H... 野生鸟类是禽流感病毒的天然宿主,对禽流感的传播起到重要作用。为了解湖北省湿地野鸟携带禽流感的情况,于2016—2017年对湿地野鸟进行了监测,对采集的野鸟粪便进行了病毒分离和鉴定。结果表明,野鸟禽流感阳性率呈上升趋势,主要亚型为H9N2、H6N1、H6N2等,提示应该加强监测力度,采取相应的预防措施。 展开更多
关键词 禽流感(aiv) 野鸟 湿地 湖北
下载PDF
RNA干扰禽流感(AI)治疗的新策略
18
作者 陈日升 俞伏松 林天龙 《福建畜牧兽医》 2005年第5期57-58,共2页
近年来,禽流感病毒(AIV)在亚洲多个国家的爆发引起了WHO的广泛关注,因此寻求高效低毒病毒治疗药物成为目前研究的重点,许多研究工作表明RNA干扰(RNAi)可以靶向敲降AIV的基因,抑制病毒的复制与增殖,RNAi显示出抗病毒的治疗潜力与良好的... 近年来,禽流感病毒(AIV)在亚洲多个国家的爆发引起了WHO的广泛关注,因此寻求高效低毒病毒治疗药物成为目前研究的重点,许多研究工作表明RNA干扰(RNAi)可以靶向敲降AIV的基因,抑制病毒的复制与增殖,RNAi显示出抗病毒的治疗潜力与良好的应用前景。 展开更多
关键词 禽流感病毒(aiv) RNA干扰(RNAI) 靶向治疗
下载PDF
海藻硫酸多糖和中药复方对鸡胚接种H9N2亚型禽流感病毒的作用 被引量:7
19
作者 程邓芳 王红均 +3 位作者 黄庆洲 张莉 刘娟 先宏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第12期3594-3600,共7页
为探讨海藻硫酸多糖(sulfated polysaccharide from algae,SPA)及中药复方提取液(compound extracts of Chinese medicine,CECM)对H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的作用,将SPA及CECM以3种不同加药方式作用于接种了H9N2... 为探讨海藻硫酸多糖(sulfated polysaccharide from algae,SPA)及中药复方提取液(compound extracts of Chinese medicine,CECM)对H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的作用,将SPA及CECM以3种不同加药方式作用于接种了H9N2亚型AIV的10日龄SPF鸡胚中,无菌收集鸡胚尿囊液,测定血凝效价,检测2种药液对H9N2亚型AIV的预防、治疗及直接灭活作用。结果显示,SPA及CECM的最大安全浓度分别为50和200mg/mL;3种不同加药方式下,不同浓度SPA及CECM均能极显著降低鸡胚尿囊液中H9N2亚型AIV的血凝效价(P<0.01),以直接灭活作用组的血凝效价降低幅度最大,预防作用组和治疗作用组次之。预防作用组,CECM高剂量组(200mg/mL)的抗病毒效果显著优于SPA各剂量组(12.5、25和50mg/mL)及CECM低、中剂量组(50和100 mg/mL)(P<0.05);治疗作用组,SPA高剂量组(50 mg/mL)及CECM中、高剂量组(100和200mg/mL)抗病毒效果显著优于SPA低剂量组(12.5mg/mL)(P<0.05);直接灭活作用组,SPA及CECM的抗病毒效果均佳,CECM各剂量组的抗病毒效果与SPA各剂量组差异极显著(P<0.01)。结果表明,SPA和CECM对10日龄鸡胚几乎无毒副作用;SPA及CECM均能显著抑制H9N2亚型AIV在鸡胚尿囊液中的增殖,以直接灭活作用组的抗病毒效果最佳,其抗H9N2亚型AIV作用的强弱与药物浓度、用药和病毒的感染时间顺序密切相关。 展开更多
关键词 海藻硫酸多糖(SPA) 中药复方提取液(CECM) H9N2亚型禽流感病毒(aiv) 鸡胚
下载PDF
H9N2亚型禽流感病毒NP蛋白原核表达及多克隆抗体制备 被引量:4
20
作者 杨景 张新宇 +7 位作者 梁志鹏 程晴 王聪颖 池仕红 袁生 郭锦玥 黄淑坚 温峰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第10期3963-3971,共9页
【目的】对华南地区分离到的1株H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)流行株NP蛋白进行原核表达,制备H9N2亚型AIV NP蛋白多克隆抗体。【方法】将1株H9N2亚型AIV的NP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建NP蛋白原核表达质粒... 【目的】对华南地区分离到的1株H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)流行株NP蛋白进行原核表达,制备H9N2亚型AIV NP蛋白多克隆抗体。【方法】将1株H9N2亚型AIV的NP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建NP蛋白原核表达质粒。将重组质粒同时转化大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白。通过考马斯亮蓝染色和Western blotting分析并比较NP蛋白在两种表达菌中的表达量,进一步优化诱导剂浓度、诱导时间及诱导温度等条件,提高蛋白的表达效率。采用镍柱亲和层析法对NP蛋白进行纯化,用BCA法测定蛋白浓度。以纯化的NP蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体,通过Western blotting和间接免疫荧光对所制备的多克隆抗体进行鉴定,通过间接ELISA测定抗体效价。【结果】试验成功构建pET-32a-H9N2-NP原核表达质粒并表达重组NP蛋白。考马斯亮蓝染色和Western blotting结果均表明,重组NP蛋白在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中表达水平远高于大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,其大小约73 ku。诱导条件优化结果显示,重组NP蛋白在37℃、IPTG终浓度为1 mmol/L诱导7 h时的表达量最大,且通过镍柱纯化后得到纯度较高的重组蛋白。Western blotting和间接免疫荧光结果均表明,所制备的多克隆抗体能高效地与H9N2亚型AIV发生特异性结合。间接ELISA测得多克隆抗体的效价为1∶409600。【结论】本研究制备的兔抗NP蛋白多克隆抗体效价较高,表明NP蛋白具有良好的免疫原性,为今后NP蛋白单克隆抗体的制备和ELISA检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 H9N2亚型 禽流感病毒(aiv) NP蛋白 原核表达 多克隆抗体
下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部