A型禽流感病毒不同拷贝数基质蛋白胞外区基因的原核表达及免疫保护力研究

为研究含禽流感病毒(AIV)不同拷贝数基质蛋白胞外功能区(M2e)亚单位疫苗在SPF鸡体中的免疫保护效力差异,根据已发表的高致病性AIV M2基因序列设计合成两对引物,利用PCR技术扩增单个M2e基因片段,以此为基础顺次串联得到不同拷贝数的M2e基因片段,并将其克隆到pMAL-C2x载体中,构建不同拷贝数的A型AIV M2e基因的重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定。表达产物经纯化后免疫家兔、SPF鸡,制备抗M2e融合蛋白的多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光试验检测纯化的融合蛋白免疫原性,间接ELISA测定鸡血清抗体水平,表明MBP-3M2e融合蛋白的抗体水平较高,且MBP-3M2e亚单位疫苗产生最好的免疫保护力。

鸡A型禽流感病毒的分离与血清学初步鉴定

从发病率颇高的产蛋鸡群和死亡率达３０％以上的肉鸡群病例中，先后分离到６株Ａ型禽流感病毒。这些分离株可在鸡胚中传代。可以凝集鸡红细胞而不被新城疫阳性血清所抑制。用这些分离毒株制成的ＡＧＰ抗原与禽流感阳性血清在ＡＧＰ试验中出现白色的沉淀线。用ＡＩＤ９３～１分离株与１５个标准ＨＡ亚型和９个标准ＮＡ亚型的标准血清进行ＨＩ试验，结果鉴定出ＡＩＤ９３～１毒株的血清亚型为Ｈ９Ｎ３。其余５个分离株均可被ＡＩＤ９３－１株的高免血清所抑制。人工复制病例出现明显的临诊症状，可缓慢康复，不引起死亡。用日龄较小的ＡＡ鸡与攻毒鸡同居能感染发病，并引起１／５死亡。健康产蛋母鸡与发病鸡群同场饲养也可感染发病，并引起产蛋下降。这些分离株具有良好的免疫原性。通过电镜观察符合流感病毒的形态特征，病毒粒子的直径为８０～１２０ｎｍ。

两株A型禽流感病毒NP基因的PCR扩增及序列分析

研究选择 AIV NP基因为目的基因 ,设计了一对特异性引物 ,筛选出最佳的 RT-PCR扩增条件 ,特异性地扩增出了两株 A型禽流感病毒的部分 NP基因片段 ,并对其进行了序列分析 ,结果表明 ,两株来源于不同禽类的 AIV的NP基因同源率高达 92 %。AIV

DG01株H5N1亚型禽流感病毒全基因组序列分析

根据国内外已公布的AIV H5N1亚型全基因组序列设计了8对引物,对H5N1亚型高致病力禽流感病毒毒株A/Duck/Guangdong/DG01/05(简称DG01)毒株进行了全基因组RT-PCR、测序及序列分析。DG01株基因组由PB22 341bp,PB1 2 341bp,PA2 233bp,HA1 779bp,NP 1 565bp,NA1 398 bp,M1 027bp,NS 875 bp 8个节段组成,与往年及同年一些流行株比较分析结果显示,DG01株具有高致病性禽流感病毒基因特征,NA基因及NS1基因均有部分缺失,从基因特点分析属于2005年流行代表株。

A型禽流感病毒核蛋白研究进展

A型禽流感是禽类的重要疾病之一。近年来,随着分子生物学的研究深入,对A型禽流感病毒核蛋白的研究也取得了显著的进展,本文概要综述了A型禽流感病毒核蛋白在诊断A型禽流感方面的研究进展。

A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区（M2e）基因的原核表达和免疫原性分析

为研究A型禽流感病毒M2蛋白胞外功能区（M2e）蛋白亚单位疫苗在鸡体的免疫保护力，利用笔者所在实验室已构建的含M2e基因的质粒pGEM—T-1459，获得顺次串联的基因片段3M2e，将其克隆到原核表达载体pMAL—C2x中，经酶切和DNAN序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达，SDS—PAGE和Western—blot分析，结果显示，

A型禽流感（H5N1）病毒人-人传播的证据

2004年8个亚洲国家发生高致病性A型禽流感病毒(H5N1)引起禽类死亡事件，并导致至少44个人感染，其中32人死亡。A型流感病毒(H5N1)是否会导致人-人间传播一直是人们关注的焦点，但目前尚缺乏人-人之间传播的证据。研究者为此在泰国调查了一个染病家族内H5N1人-人之间传播的可能件。这个家庭中的其中一位感染者居住在较远的城市，但又对染病的初始病人提供了直接的医院内的护理，这种情况是比较罕见的，高度提示了人-人之间传播的可能性。

禽流感病毒江西株的分离与初步鉴定

从临床主要表现为呼吸道症状和产蛋严重下降蛋鸡群的病例中,分离到1株病毒(GN9901)。该病毒株可在鸡胚中传代,可以凝集鸡、鸭和人的红细胞,不被新城疫阳性血清所抑制。经血清学鉴定为A型禽流感病毒(HA、NA亚型未测定),该病毒株具有良好的免疫原性。

鸡CD_4^+和CD_8^+T淋巴细胞对禽流感病毒的应答

禽流感是由A型禽流感病毒引起的多种家禽和野生鸟类的一种急性、高度致死性传染病，给养禽业造成巨大损失，我国农业部和国际兽医局都将其定为A类传染病。但1997年首次发现禽流感病毒感染人类并致人死亡，使得禽流感的公共卫生意义发生了根本性变化。禽流感已经不再只是动物之间的烈性传染病，而是一种也能引起人类感染的新传染病。

多黏菌素治疗人禽流感继发铜绿假单胞菌感染一例

目的探讨人感染高致病性禽流感继发多耐药铜绿假单胞菌(MDRP)肺部感染的治疗方法。方法2006年6月,对1例高致病性H5N1亚型禽流感并急性呼吸窘迫综合征(ARDS)青年男性患者进行机械通气治疗,随后出现MDRP的肺部感染;病原学药敏结果显示,该株MDRP仅对多黏菌素B和E等少量抗菌药物敏感;遂予以多黏菌素B每日40～100mg分2次肌肉或静脉注射,并多黏菌素E每日30～50万u分3～4次雾化吸入,使用剂量根据痰菌半定量检测结果进行调整。结果多黏菌素B全身用药累积疗程33d,累积剂量1760mg;多黏菌素E雾化吸入累积疗程36d,累积剂量1485万u;患者肺部感染得到有效控制;多黏菌素治疗MDRP有效且不良反应较轻,其治疗终点的判断需根据临床和实验室资料进行全面评估。结论多黏菌素能有效治疗禽流感患者继发MDRP的感染。

H5N1亚型禽流感(Re-+Re-7)疫苗在鸡群的免疫抗体消长规律

高致病性禽流感(Highly pathogenic avianinfluenza，HPAI)是由正粘病毒科流感病毒属A型禽流感病毒(AIV)引起的禽类高度接触性、急性传染病。OIE将其列为应报告动物传染病。AIV分为若干亚型，其中H5、H7亚型多为高致病性强毒株，最近的研究表明，H5型禽流感病毒与以前相比已经更容易使哺乳动物致病，并更广泛的在鸟类中传染,到目前为止，已经发现了感染禽流感病毒的猫、老虎和雪豹，禽流感的宿主范围变得越来越广。HPAI不仅对家禽业造成重大经济损失，并可直接感染人，具有重要的公共卫生意义。

禽流感的类型及其症状表现

禽流感（AIV）是由A型禽流感病毒引起家禽和野禽感染的疾病综合征。自1878年该病首次在意大利流行以来，不断蔓延，目前世界上许多国家和地区均有本病的暴发和流行。最近，2003年末至2004年初又在亚洲地区发生大规模流行。打破了自然条件下仅有H2、H2、H2亚型禽流感可以感染人的常规，赋予了AIV全新的公共卫生意义。

禽流感病毒抗体检测芯片制备成功

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所赵玉辉等建立了一种检测A型禽流感病毒（AIV）抗体的蛋白芯片，研究以AIV总RNA为模板，RT—PCR方法扩增NP基因，与真核表达载体pFastBacHTa连接，并在昆虫细胞中表达。重组蛋白经纯化及Westernblot鉴定，点样于醛基包被的载玻片上，制备检测AIV抗体的蛋白芯片。确定芯片反应最佳条件为：点样浓度2mg／mL，固定24h，1％BSA进行封闭，一抗稀释度1：100，二抗稀释度1：2000。利用蛋白芯片分别对15个亚型流感病毒免疫血清、SPF鸡血清、抗新城疫病毒血清、抗传染性法氏囊病病毒血清和现地血清样品进行检测，通过与血凝抑制试验比较，表明建立的蛋白芯片方法具有良好的灵敏性和特异性，为AIV抗体检测及制备检测AIV不同亚型或多种病原抗体的蛋白芯片提供方法。

对非典型禽流感的一点认识

禽流感是禽流性感冒的简称，又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟，是由A型禽流感病毒引起的一种主要侵害禽类的传染病。由于受禽流感病毒毒株的毒力、禽类的敏感性、并发症及饲养管理等诸多因素的影响，其临床症状、病理变化、发病率和死亡率存在很大差异。根据禽流感病毒致病性和毒力的不同，

H_9亚型禽流感病的防控

禽流感又称真性鸡瘟或欧洲鸡瘟,是由禽流感病毒引起的家禽和野禽的一种从呼吸系统到严重影响全身性败血症等多种症状的综合性病症。H9亚型禽流感病毒属于HA型禽流感病毒中的一种,HA型禽流感病毒目前已发现15种，分别以H1-H15命名（NA型禽流感病毒已发现9种，分别以N1-N9命名）。