高致病性H5亚型禽流行性感冒病毒血凝素单克隆抗体的制备与初步应用

以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FC1、7C6、10HD4和13G4。经血凝抑制试验法分析,结果发现这6株单抗具有特异性高、反应性强、识别谱宽且互补等特点。基于单抗2F2,初步建立了三种H5N1病毒诊断方法,经评估证实均具有很好的特异性。由此说明,研究制备的抗H5亚型禽流感病毒血凝素单抗可适用于H5N1病毒的诊断。

在疫苗免疫选择压力下H_9N_2亚型禽流行性感冒病毒HA基因的遗传变异

为了解H9N2 亚型禽流行性感冒 (流感 )病毒在同亚型灭活疫苗的选择压力下的遗传变异情况 ,对某鸡场的感染鸡群进行连续 4年的跟踪监测 ,对使用疫苗前和持续使用疫苗后不同时段分离到的H9N2 亚型禽流感病毒的HA基因进行全序列分析。结果表明 ,在使用第一次分离的病毒株制备的疫苗后 8个月分离到的病毒株 ,其HA基因仅发生一个氨基酸的差异 ;但在继续使用该疫苗的第二个和第三个年头分离的病毒株 ,它们的HA基因则一直在发生较大的变化。这一发现对进一步研究禽流感病毒在不断使用疫苗的选择压力下发生变异的规律 。

H_3N_2亚型人流行性感冒病毒HA_1的蛋白序列同源性比较、变异规律及结构与功能的分析

应用生物信息学数据库和工具,结合自身的实验结果,对现有的H3N2亚型人流行性感冒(流感)病毒全球分离株的HA1氨基酸序列和蛋白分子结构进行了分析研究。初步的进化分析结果表明,历史上的分离株大致分为以年代划分为特征的两大谱系,即1968～1984/1985年的谱系,时间跨度为18年;1984/1985～1997/2000年的谱系,时间跨度为13～17年。它们分别起源于两类毒株,并在各自的谱系内发展演化,基本上不存在大规模相互交叉渗透的现象。在1984/1985年,两大谱系发生交替转换和过渡,说明流感病毒的起源、发展和演化是有一定规律性的,这可能对流感的监测预报有一定的指导意义。绝大多数毒株的二硫键组成位点和糖基化位点是极其保守的。受体结合位点(RBS)的一部分构成成份保守;其他构成成份发生变异甚至高变,并与某些抗原决定簇位点重合,可能参与了抗原抗体相互作用。5个抗原决定簇位点的变异各有其特点。A和B位点的变异表现最活跃,抗原性最强,但B位点稍弱于A位点。C和D位点的抗原性一般,且D位点的变异性低于C位点。E位点抗原性一般。在各位置的变异中,大多常是相同相近性质或相同种类的氨基酸相互替换。HA1蛋白全序列的熵(entropy)峰值作图的分析表明,HA1蛋白上121～126位等区域或位点可能独立,或参与构成了某些已知或未知?

两株H_9N_2亚型禽流行性感冒病毒HA基因序列分析

The complete cDNA sequences of HA genes of two AIV isolates were presented in this paper The result of comparative sequence analysis seemed to suggest that these two isolates may be identical to three other AIV strains(H 9N 2) isolated from HongKong recently and these five strains may have the same origin in that the identity of the HA protein sequences of these AIV isolates is higher than 95%

危重症甲型H1N1流行性感冒病毒肺炎的临床特征——附17例报告

目的:探讨危重症甲型H1N1流行性感冒病毒(甲流)肺炎患者的主要临床特点,分析各临床检验指标与病情严重程度的关系。方法:收集入住呼吸重症监护病房(RICU)的17例危重症甲流肺炎患者的临床资料,归纳分析其临床特征。结果:17例患者以发热、咽痛、咳嗽、肌肉酸痛为主要症状。双肺多发实变影12例(71%)。入院后白细胞为(3.4～25.1)×109/L,中性粒细胞(2.72～21.84)×109/L,中性粒细胞比例58.6%～96.4%,淋巴细胞5.1%～21.6%。CRP 34.6～381.9 mg/L,乳酸脱氢酶(LDH)310～820 U/L,白蛋白<30 g/L10例(59%),ALT升高6例(35%),血清肌酐升高5例(29%),脑钠肽升高4例(24%)。氧合指数<300 mm Hg 13例(76%)。均予奥司他韦治疗,气管插管机械通气支持治疗3例(18%)。死亡2例(12%),均为男性,均为气管插管机械通气者。结论:LDH、CRP升高、炎性细胞增多提示危重症甲流肺炎患者肺部损害加重;机械通气支持治疗对于部分肺内广泛实变者效果不理想,且相关的并发症是部分患者病情加重或死亡的促发因素。

上海2009甲型H1N1流行性感冒病毒全基因组分析

2009年全球暴发2009甲型H1N1流行性感冒(简称流感)疫情,上海于2009年5月出现第1例输入型病例。为了解上海地区输入型2009甲型H1N1流感病毒的生物学特征,以上海较早发现的2例输入型甲型H1N1流感患者作为研究对象,分离出A/Shanghai/37T/2009和A/Shanghai/71T/2009病毒,利用实时定量荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定病毒,通过扫描透射电子显微镜观察、免疫荧光检测、全基因组测序和生物信息软件分析,对这2株流感病毒形态、结构、耐药性、基因特点和病毒型别等进行研究。结果显示,病毒呈现正黏病毒颗粒形态特征;犬肾(MDCK)细胞内的病毒能与患者恢复期血清反应。此2株病毒的全基因核酸序列和氨基酸序列与美国参考株A/California/04/2009(H1N1)有较高同源性,其中第31位氨基酸残基发生改变。对金刚烷胺耐药,而对奥司他韦敏感。基于全基因组的系统发育分析,确认此2株病毒属2009甲型H1N1流感病毒。

一株2011年出现的季节性甲型H1N1流行性感冒病毒血凝素基因特性的研究

本文通过比较2011年分离培养的1株季节性甲型H1N1流行性感冒(简称流感)病毒(A/Shanghai/1167/2011(H1N1))与历年季节性甲型H1N1流感病毒的血凝素(HA)基因,追溯该病毒的基因变异与来源,探讨该毒株的出现对流感防控工作的意义。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增病毒的HA和神经氨酸酶(NA)片段,并进行测序;应用分子生物学软件对获得的序列进行分析,绘制基因进化树;同时,通过血凝抑制试验检测2011年下半年健康人群中该流感病毒的抗体水平。结果显示,A/Shanghai/1167/2011(H1N1)的HA基因序列与世界卫生组织(WHO)2007～2008年季节性甲型H1N1流感病毒疫苗株A/Brisbane/59/2007(H1N1)最接近,同源性达99.2%,与新型甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009疫苗株同源性仅为72.4%。其HA基因裂解位点为PSIQSR↓GLF,尚未出现高致病性的分子特征。HA片段共编码557个氨基酸,有9个潜在的糖基化位点,序列与2009年前WHO疫苗株A/NewCaledonia/20/1999(H1N1)、A/SolomonIslands/3/2006(H1N1)和/Brisbane/59/2007(H1N1)相比,分别有15、12和4处不同,这些差异分布在Sa、Sb、Ca1、Ca2、Cb5个抗原决定簇的氨基酸差异分别有5、5和2处。该毒株在健康人群血清的抗体阳性率为34.33%,几何平均效价(GMT)为10.38。A/Shanghai/1167/2011(H1N1)是2011年出现在上海地区的一个季节性甲型H1N1流感病毒毒株,其抗原变异与既往季节性甲型H1N1流感病毒相比不大,但在以A(H1N1)pdm09为主要流行株的年份检测到散在发生的既往季节性甲型H1N1流感病毒毒株应当引起重视,其在人群中的抗体水平较低,易引起流行,需要提高对类流感人群中此种毒株的持续监测。

2009A/H_1N_1流行性感冒病毒疫苗研究近况

2009年全球范围内暴发的流行性感冒（流感）是由一种新型甲型流感病毒2009A／H1N1引起，2009年4月首次将其命名为“猪流感”。目前，2009A／H1N1流感疫情仍在全球范围内进一步扩大，并无显著下降趋势。据世界卫生组织（WHO）报道，全球各大洲均已报道发现2009A／H1N1流感患者目，至2009年12月13日全世界已超过208个周家或地区报道了实验室明确诊断的2009A／H1N1流感，其中死亡病例超过10582例。

中国历年H_3N_2亚型人流行性感冒病毒血凝素基因的序列测定及分析

测定了 2 7株中国 196 8～ 2 0 0 0年的人H3 N2 亚型流行性感冒 (流感 )病毒分离株HA1基因的核苷酸全序列 ,其中包括 7株流行代表株 :A3/Beijing/ 1/ 6 8、A3/Guangdong/ 2 4 3/ 72、A3/Beijing/ 39/ 75、A3/Guangdong/ 38/ 77、A3/Beijing/ 2 6 6 / 85、A3/Beijing/ 30 / 95、A3/Shanghai/ 1/ 98。阐明了这些流感病毒分离株的基因结构、变异本质、进化发展过程以及这些毒株与其它分离株之间的遗传进化亲缘关系 ,为应用生物信息学研究流感病毒基因组变异规律等打下了基础。初步的进化分析表明 ,历年来的人流感病毒H3 N2 亚型的起源和进化分为两个分支谱系 ,并在 1984 /1985年进行了交替转换 ;且有一部分人的H3 N2

鸡源H_9N_2亚型流行性感冒病毒神经氨酸酶基因序列分析

对1996～2001年间自中国部分养鸡场发病鸡或死亡鸡分离鉴定的8株H9N2亚型禽流感病毒的神经氨酸酶基因(NA),进行了扩增和序列测定,并分析和比较了其核苷酸和氨基酸的同源性。结果表明,NA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为97 1%～99 8%和95 7%～99 7%,说明NA基因稳定遗传,高度保守。与A/chicken/HongKong/G9/97相比较,发现中国大陆鸡源H9N2分离株的神经氨酸酶蛋白在其茎部的第63、64、65位点上都有3个氨基酸的丢失,而与中国邻近的韩国、巴基斯坦鸡源H9N2分离株的神经氨酸酶没有氨基酸的丢失,因此这些部位的氨基酸丢失可初步认为是中国大陆H9N2流感病毒分离株的一个标记。系统进化树分析表明,该8株病毒的NA基因属于相同的进化分支,即A/duck/HongKong/Y280/97-like分支,尚未发现NA基因属于A/quail/HongKong/G1/97-like分支的分离株。中国的H9N2分离株与韩国、巴基斯坦等地的H9N2分离株隶属于不同的进化亚分支,说明H9N2亚型禽流感的发生与流行和地域有一定的相关性。

2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA及NS基因进化分析

目的分析2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)及非结构蛋白(Non-structural,NS)基因进化特征。方法从2014年长沙市活禽市场采集501份环境标本,利用Real-time PCR方法进行A型、H5、H7和H9亚型流感病毒核酸检测,并对单一H5阳性标本进行核苷酸测序,病毒HA、NA和NS基因测序结果进行在线BLAST分析,利用Mega5和Bioedit软件构建核苷酸进化树和氨基酸(Amino acids,aa)比对。结果从501份环境标本中检出A型H5亚型病毒阳性标本177份(检出率35.33%),其中8份标本经核苷酸测序鉴定为H5N1亚型病毒,进化分析表明大部分H5N1病毒HA基因位于2.3.2分支内,聚集形成一个新亚分支,NA及NS基因位于2.3.2.1b亚分支。HA蛋白受体结合位点aa为QSG,表现为禽流感病毒受体特征;NA蛋白未出现H275Y及N295Saa替换,对神经氨酸酶抑制剂敏感;HA、NA及NS蛋白关键分子位点表现为高致病性的分子特征。结论 2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA和NS基因表现为高致病性的分子特征,但不具有对人易感的受体特征,需要进一步监测。

反向遗传操作技术产生全禽源致弱的H5N1亚型禽流感病毒的免疫保护性试验

利用反向遗传操作技术产生致弱的8基因全禽源的H5N1亚型禽流感病毒rgF-H5△N1,经甲醛灭活制成油苗免疫SPF鸡和有母源抗体的商品鸡。比较拯救的重配病毒rgF-H5△N1和野毒H5N1亚型禽流感病毒油苗免疫后的抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标,评价其免疫和交叉免疫保护作用。结果表明:反向遗传操作技术为构建新型的流感疫苗株提供了更好的方法。

一起甲型H1N1流行性感冒家庭聚集性发病事件分析

目的:探讨新型甲型H1N1流行性感冒(流感)家庭聚集性发病的流行病学情况、临床特点。方法:对一起家庭聚集性发病事件进行流行病学和临床分析。结果:该家庭4名成员全部发病,均发热,体温均高于38.0℃,全身酸痛症状明显,而上呼吸道症状略轻,均无肺部实变体征,仅有咽红充血,X线胸部摄片无肺炎征象,4例外周血白细胞数在正常范围,淋巴细胞降低,淋巴细胞绝对值均低于0.8×109/L。结论:新型甲型H1N1流感病毒传染性较强,临床表现较轻,外周血血白细胞未升高,淋巴细胞计数百分比降低,淋巴细胞计数绝对值均低于1.0×109/L,可考虑把以上表现作为病原学检测结果出来之前的诊断参考指标。

1株对小鼠呈高致病性H5N1亚型禽流感病毒的遴选

目的观察从死禽体内分离的禽流感H5N1病毒株对小鼠的致病情况,筛选一株可用于小鼠攻毒实验的H5N1毒株。方法将17株禽源H5N1病毒分别滴鼻感染6～8周龄Balb/c小鼠,观察其对小鼠的致病和致死情况。通过测定其中毒力较强一株的EID_(50)、TCID_(50)、小鼠LD_(50)及濒死小鼠不同组织中病毒载量,判定其致病力;采用遗传进化分析绘制HA基因进化树,了解其进化特征。结果动物实验表明,17株高致病性禽源H5N1毒株中,仅有一株对小鼠为高致病性。该毒株TCID_(50)/100μl=7.2,EID_(50)/100μl=8.325,小鼠1 LD_(50)/100μl=6.318≈10~2EID_(50)。鼻粘膜感染4～6 d小鼠发病,表现为精神萎靡、食欲减退、竖毛、弓背等临床症状,体重明显减轻。小鼠死亡集中在发病后的2～5 d,耐过死亡者12 d完全恢复正常。从濒死感染小鼠脾、肺、鼻及脑组织中皆可检出流感病毒NS片段,病毒数载量以脑组织中最多,达3.56×10^(10)拷贝/5μl。结论筛选到一株对小鼠呈强致病性H5N1亚型禽流感毒株,可以用于禽流感疫苗交叉保护效果评价的小鼠攻击实验,也可以作为感染模型用于H5N1禽流感病毒致病机制的研究。

H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白研究进展

禽流感（avian influenza ,AI） 为A型流感病毒（avian influenza virus ,AIV）引起的禽类流行性感冒.根据是否引起流感及症状的不同,通常将禽流感分为高致病性（highly pathogenic avian influenza,HPAI）、低致病性（low pathogenic avian influenza,LPAI） 和非致病性禽流感（no pathogenic avian influenza,NPAI）.

我国本土52例新型甲型H1N1流行性感冒临床特点及治疗

目的:了解我国本土发生的甲型H1N1流行性感冒患者的临床及流行病学特点以及抗病毒治疗效果。方法:自2009-11～12,我院共收治住院治疗观察患者52例,对所有患者临床表现特点、化验室检查及流行病学特点、抗病毒治疗后H1N1-RNA转阴时间均进行了详细的观察记录。结果:52例患者临床症状以发热,咳嗽所占比例为高。结论:H1N1-RNA的转阴时间与白细胞计数存在一定的关系。

深圳市龙华区甲型H1N1流行性感冒流行病学调查及特征研究

目的了解深圳市龙华区甲型H1N1流行性感冒流行病学及临床特征,提高临床医师对该病的认识。方法对深圳市龙华区2016年5月～2017年3月确诊的甲型H1N1流行性感冒患者进行回顾性分析。结果本组患者156例,男95例,女61例,年龄16～72岁,平均年龄(49.8±1.5)岁,发病高峰期为2016年11～12月。临床上主要表现为流感症状,包括咳嗽、发热、鼻塞、头痛及全身酸痛等,咽部充血50例,咳嗽30例,发热89例,扁桃体肿大59例,咳痰15例等。91.45%患者外周血白细胞总数偏低或正常,63.78%患者中性粒细胞总数大于正常值,45.13%患者CD4^+T淋巴细胞低于正常下限水平。甲型H1N1流行性感冒患者的咽拭子标本在发热时检测为阳性,经胸部CT检查,患者表现为胸膜炎、肺炎、肺纹理增粗等;全部患者均痊愈出院。结论甲型H1N1流行性感冒传染性较强,其流行病学及临床特征与普通季节性流感相似,深圳市龙华区甲型H1N1流行性感冒患者以中年群体为主,病情较轻,轻型患者可无需奥司他韦抗病毒治疗,使用三九感冒灵、双黄连等中药制剂抗病毒治疗可以治愈。

流行性感冒、人禽流感10年回顾

流行性感冒（流感）是一种古老的疾病，也是常见病、多发病，几乎每年在世界范围内都会出现疫情，或是暴发，或是局部散发。我国是流感多发国，自1957年以来的3次世界性大流行都起源于我国。自我国香港1997年发生第一次H5N1型人禽流感暴发后，禽流感开始在全球蔓延，全球各地都不断出现动物和人禽流感疫情，给人类健康带来严重威胁。本文对近10年流感、人禽流感的研究进展进行回顾。