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利用三代全长转录组测序对禽内源性白血病病毒ALVE3不同插入类型鸡进行血液转录组分析
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作者 王沁园 袁一铭 +5 位作者 郑钢 吴俊锋 陈佳华 杨玉琴 杜玉双 连玲 《中国家禽》 北大核心 2024年第10期21-31,共11页
为进一步探索不同内源性禽白血病病毒3(Avian leukosis virus subgroup E,ALVE3)插入个体间的转录本差异,研究利用PacBio三代测序平台对ALVE3无插入、杂合插入和纯合插入的白来航公鸡血液样本进行全长转录组测序,分别获得27 784、38 460... 为进一步探索不同内源性禽白血病病毒3(Avian leukosis virus subgroup E,ALVE3)插入个体间的转录本差异,研究利用PacBio三代测序平台对ALVE3无插入、杂合插入和纯合插入的白来航公鸡血液样本进行全长转录组测序,分别获得27 784、38 460、44 487条转录本,平均长度分别为2 850 bp、3 078 bp和3 166 bp,辅助二代测序数据对其进行校正和定量,并将所得数据与GRCg6a参考基因组比对,将比对到基因组上的转录本进行差异表达分析及lncRNA预测。结果显示,在有ALVE3插入个体中特异存在的转录本有3 657条,将这些转录本利用BLAST与ALVE3全长序列比对,发现转录本Novelgene1474_novel01与ALVE3互补链对应序列高度同源,长度为5 575 bp,说明ALVE3互补链能够产生转录本,对其翻译潜能进行预测后,推测该转录本为lncRNA。此外对不同ALVE3插入情况个体间的差异表达基因进行富集分析,在GO/KEGG中富集到多条免疫相关通路,说明ALVE3的插入可能对机体内免疫相关基因的表达有影响。研究表明,检测到ALVE3反义链可转录产生一段长为5 575 bp的lncRNA,该转录本在介导先天免疫通路中可能发挥作用。 展开更多
关键词 内源性白血病病毒 全长转录组测序
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禽白血病病毒p27抗原ELISA检测试剂盒的比较与评估 被引量:1
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作者 刘颖昳 胡迪 +4 位作者 刘倩倩 迟盛仁 刘琳 王传彬 顾小雪 《中国家禽》 北大核心 2024年第5期118-124,共7页
为了更好地进行禽白血病监测与净化,研究使用由蛋清、细胞培养物、胎粪等多种样品组成的样品盘对7种禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)p27抗原ELISA检测试剂盒(国产试剂盒DA、DB、DC,进口试剂盒IA、IB、IC、IDEXX)进行比较。结果... 为了更好地进行禽白血病监测与净化,研究使用由蛋清、细胞培养物、胎粪等多种样品组成的样品盘对7种禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)p27抗原ELISA检测试剂盒(国产试剂盒DA、DB、DC,进口试剂盒IA、IB、IC、IDEXX)进行比较。结果显示:从分析特性上看,试剂盒分析特异性均较好,未观察到与其他常见禽源病毒的交叉反应;与IDEXX相比,DA、IA的分析敏感性较高,DB、IC其次,DC、IB较低,对于ALV不同亚群,各种试剂盒分析敏感性差异可达2~3个稀释度;从诊断特性上看,与IDEXX相比,DB、DC和IC的诊断敏感性和诊断特异性均高于90%;DA、IA和IB与IDEXX的诊断敏感性和诊断特异性均高于80%;各试剂盒对于不同类型样品(DF-1细胞培养物、蛋清、胎粪)的诊断敏感性和诊断特异性存在差异;从重复性上看,DA和IA的批内变异系数均在15%以内。综上所述,与IDEXX相比,当前国产p27抗原ELISA检测试剂盒DA和DB、进口p27抗原ELISA检测试剂盒IA和IC的各项性能可满足禽白血病净化各阶段对不同类型样品的检测需求。 展开更多
关键词 白血病病毒 净化 ELISA P27抗原
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A、B、J亚群禽白血病病毒混合感染的鉴定及gp85基因序列分析 被引量:1
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作者 窦俊峰 汪最 +5 位作者 李丽 卢琴 金鑫鑫 凌小淳 罗青平 翟新国 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期302-311,共10页
【目的】了解湖北地区禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)亚群之间混合感染及其gp85基因遗传变异情况,为进一步研究ALV混合感染的流行病学提供参考。【方法】对来自湖北宜昌疑似感染ALV的一只病死鸡进行病理剖检,无菌采集病变组... 【目的】了解湖北地区禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)亚群之间混合感染及其gp85基因遗传变异情况,为进一步研究ALV混合感染的流行病学提供参考。【方法】对来自湖北宜昌疑似感染ALV的一只病死鸡进行病理剖检,无菌采集病变组织接种DF-1细胞进行病毒分离,通过PCR、ELISA及间接免疫荧光试验(IFA)等方法进行亚群鉴定,进一步对分离株gp85基因的相似性和变异情况进行分析。【结果】剖检结果可见病死鸡肾脏、脾脏肿大,肺脏出血,表面可见灰白色肿瘤结节;组织匀浆接种DF-1细胞后,ELISA检测发现细胞上清P27抗原呈阳性;IFA检测发现,感染细胞里有特异性绿色荧光;PCR鉴定能同时扩增出A(692 bp)、B(847 bp)和J(545 bp)亚群的特异性条带。鉴定结果表明,从该病死鸡中分离到A、B和J亚群ALV毒株,分别命名为HBYC2022-A、HBYC2022-B和HBYC2022-J。分离株gp85基因核苷酸相似性分析显示,HBYC2022-A与江苏株JS-A1201相似性最高,为99.6%;HBYC2022-B与江苏株JS-B1204相似性最高,为99.7%;而HBYC2022-J与黑龙江株PK19FA01、广西株GX20YL12 J及安徽株AHaq02相似性均为100%。此外,分离株gp85基因高突变区域(hr1、hr2)氨基酸序列并未出现特殊点突变。【结论】鸡群存在A、B和J不同亚群ALV的混合感染情况,提示国内养禽场需提高警惕并加强针对ALV各亚群的流行病学调查。 展开更多
关键词 白血病病毒(alv) 分离鉴定 混合感染 GP85基因 序列分析
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不同ELISA检测方法在检测出壳雏鸡禽白血病病毒感染中的应用
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作者 崔慧珍 张亚文 +2 位作者 王一新 常爽 赵鹏 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期27-34,共8页
通过雏鸡胎粪中群特异性衣壳蛋白27(p27)抗原检测以判定禽白血病病毒(ALV)垂直传播是实施禽白血病净化的关键步骤,为对比不同ALV-p27抗原ELISA试剂盒对我国四类广泛流行的亚群ALV垂直传播的检测效果,本试验设置ALV-A、ALV-B、ALV-J和AL... 通过雏鸡胎粪中群特异性衣壳蛋白27(p27)抗原检测以判定禽白血病病毒(ALV)垂直传播是实施禽白血病净化的关键步骤,为对比不同ALV-p27抗原ELISA试剂盒对我国四类广泛流行的亚群ALV垂直传播的检测效果,本试验设置ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K感染组,以无菌生理盐水作为对照组,在8胚龄时以卵黄囊接种的方式感染SPF鸡胚,建立鸡胚携带ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K的垂直感染模型。采集各组雏鸡胎粪样品和血浆样品,死亡鸡胚肝脏样品,死亡雏鸡胎粪样品、血浆样品和肝脏样品,其中血浆和肝脏样品需接种鸡胚成纤维细胞系(DF-1细胞)进行病毒分离,各样品以4家公司提供的ALV-p27抗原ELISA试剂盒进行检测,并以实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行平行检测,比较阳性检出率和灵敏度。结果显示,4家公司的ALV-p27抗原ELISA试剂盒对于同一样品的阴阳性判定结果基本一致,但灵敏度存在差异;胎粪样品直接ELISA检测不能将ALV阳性鸡只全部检出,相对于胎粪样品,血浆和肝脏病毒分离样品ELISA检测更具有灵敏度优势。本试验所建立的对比方法不仅有助于评估4家公司ELISA试剂盒的灵敏度,还进一步评估了胎粪样品直接ELISA检测与血浆和肝脏病毒分离样品ELISA检测2种评估方法的灵敏度,为科学选择灵敏特异的ALV检测方法提供了良好评价模型。 展开更多
关键词 白血病病毒 胎粪 P27抗原 ELISA 病毒分离
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J、K亚群禽白血病病毒的分离和囊膜蛋白(gp85)基因序列分析
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作者 周钊灿 游广炬 +4 位作者 杨金易 苏晓娜 高丽 王永强 郑世军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期1-10,共10页
为了解现阶段我国禽白血病病毒(ALV)的流行特征和演化趋势,本试验于2021—2022年从国内某鸡场采集蛋清ALV衣壳蛋白(p27)抗原阳性的鸡血浆,接种鸡胚成纤维细胞(DF-1)分离病毒并进行亚群鉴定;采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增分离株的囊... 为了解现阶段我国禽白血病病毒(ALV)的流行特征和演化趋势,本试验于2021—2022年从国内某鸡场采集蛋清ALV衣壳蛋白(p27)抗原阳性的鸡血浆,接种鸡胚成纤维细胞(DF-1)分离病毒并进行亚群鉴定;采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增分离株的囊膜蛋白(gp85)基因片段,并对其进行测序,将基因序列与ALV不同亚群毒株进行比对和遗传进化分析;选取氨基酸变化差异较大的分离毒株进行间接免疫荧光鉴定。结果显示,共分离到7株ALV毒株(3株J亚群,4株K亚群),ALV-J分离毒株CAU4932、CAU4860和CAU2259的gp 85基因片段长度为918 bp,编码306个氨基酸,分离毒株之间gp 85基因核苷酸同源性为90.5%~95.2%,gp85蛋白氨基酸同源性为95.1%~99.3%;ALV-K分离毒株CAU7049、CAU5006、CAU7176和CAU7168的gp 85基因片段长度为1008 bp,编码336个氨基酸,分离毒株之间gp 85基因核苷酸同源性为89.4%~92.3%,gp85蛋白氨基酸同源性为94.0%~99.7%。gp85蛋白氨基酸序列同源性比对发现,分离株gp85蛋白氨基酸序列均会发生突变,但高变区hr1和hr2所占比例较多,证实了gp85的高变性。在gp85蛋白B细胞抗原表位中存在部分位点的氨基酸突变,可能导致gp85蛋白抗原性发生变化。间接免疫荧光鉴定结果显示,5株分离毒株均可在DF-1细胞内复制并存在可被抗体识别的p27抗原表位。结果表明,本试验分离的7株ALV毒株是国内ALV-J和ALV-K流行毒株的突变株,不仅丰富了ALV基因组库资源,且为后续研究ALV的遗传变异特征和流行趋势等提供参考依据。 展开更多
关键词 白血病病毒 J亚群 K亚群 gp 85基因 序列比较
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E3泛素连接酶FBXL8对A亚群禽白血病病毒复制的影响
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作者 郑诗龄 陈雪阳 +3 位作者 刘晶 方春 梁雄燕 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1696-1705,共10页
【目的】制备鸡E3泛素连接酶FBXL8多克隆抗体,探究鸡源FBXL8对A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以DF-1细胞cDNA为模板,通过PCR扩增FBXL 8基因,构建鸡源FBXL8原... 【目的】制备鸡E3泛素连接酶FBXL8多克隆抗体,探究鸡源FBXL8对A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)在鸡胚成纤维细胞(DF-1)内复制的影响。【方法】以DF-1细胞cDNA为模板,通过PCR扩增FBXL 8基因,构建鸡源FBXL8原核表达重组质粒pET-28a-FBXL8,将其转化大肠杆菌表达菌株RIL进行诱导表达及纯化,将表达产物His-FBXL8免疫10月龄新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用Western blotting和间接ELISA分别检测抗体特异性及效价;针对已公布的FBXL 8基因序列设计过表达引物及靶向FBXL 8基因的干扰序列,构建过表达质粒psi-flag-FBXL8及干扰质粒pLKO.1-FBXL8-shRNA,使用Western blotting检测其表达效果。将构建成功的过表达质粒和干扰质粒转染DF-1细胞,24 h后感染ALV-A,通过半定量PCR、Western blotting分别检测ALV-A的结构蛋白P27、GP85表达水平。【结果】PCR成功扩增出大小为1182 bp的FBXL 8基因片段,并成功构建FBXL8原核表达重组质粒pET-28a-FBXL8,诱导表达的融合蛋白His-FBXL8大小为43 ku。Western blotting和间接ELISA结果显示,制备的FBXL8兔多克隆抗体可特异性识别外源蛋白,且抗体效价为1∶64000。成功构建了FBXL8过表达质粒和干扰质粒,其在DF-1细胞中能够实现对FBXL8的过表达和敲低。半定量PCR和Western blotting检测结果显示,过表达FBXL8可抑制ALV-A复制,而敲低FBXL8则促进其复制。【结论】本研究制备的FBXL8多克隆抗体具有良好特异性及反应性;在DF-1细胞中,FBXL8负向调控ALV-A复制,研究结果为进一步深入探究FBXL8生物学特性提供了重要参考,并为揭示FBXL8抗ALV-A感染分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 FBXL8 A亚群白血病病毒(alv-A) 多克隆抗体 病毒复制
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禽白血病病毒J亚群感染鸡组织中细胞受体chNHE 1的表达分析
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作者 张莉 于蒙蒙 +7 位作者 王颖 王素艳 许壮壮 刘鹏 陈运通 祁小乐 李留安 高玉龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3631-3639,共9页
旨在研究鸡钠氢交换蛋白1(chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1,chNHE1)在不同类型鸡组织内的表达情况,J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)的组织嗜性及ALV-J感染后组织chNHE1的mRNA变化情况。本研究... 旨在研究鸡钠氢交换蛋白1(chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1,chNHE1)在不同类型鸡组织内的表达情况,J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)的组织嗜性及ALV-J感染后组织chNHE1的mRNA变化情况。本研究利用qPCR技术,检测了商品肉鸡、商品蛋鸡和SPF鸡脏器内的chNHE1转录量,ALV-J感染鸡后各组织的病毒载量及组织chNHE1的转录量的变化。结果显示,chNHE1在3种类型鸡的心、肝、脾、肺、肾、盲肠扁桃体、胸腺和法氏囊中均能检测到,但转录量高低存在较大差异,其中,免疫器官内的chNHE1转录量相对较高;SPF鸡接种ALV-J后,心、脾、肾和盲肠扁桃体中的病毒载量相对较高,而肝、肺、胸腺和法氏囊中的病毒载量相对较低;ALV-J感染后,脾、肾和盲肠扁桃体中的chNHE1转录量明显上调,但心中的转录量与空白对照相比无明显变化。本研究分析了3种类型鸡chNHE1的组织转录特点及ALV-J感染对组织内chNHE1转录的影响,该研究结果为探究受体chNHE1的转录与ALV-J的组织嗜性的关系提供重要的理论依据。 展开更多
关键词 J亚群白血病病毒 鸡钠氢交换蛋白1 组织表达 转录量变化
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与鸡内皮血管瘤病例相关的禽白血病病毒K亚群分离及其gp85基因演化分析
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作者 梁灿新 郑小雪 +3 位作者 舒雪利 周婉怡 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1127-1136,共10页
本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡... 本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡群为父母代花鸡,发病率约为2%,剖检无其他肉眼表观病变,病理组织学诊断为内皮血管瘤。RT-PCR检测肿瘤组织表明为K亚群禽白血病病毒(ALV-K)感染,无其他禽肿瘤性病毒感染。对患病鸡的血浆样品(32份)、肿瘤组织匀浆(6份)及脑组织匀浆(6份)进行病毒的分离鉴定,成功从脑组织样品中分离到4个ALV-K毒株(GXJL01~GXJL04)。使用特异性引物扩增GXJL01~GXJL04的env基因并测序,在与华南地区其他5个规模化种禽场中分离获得的7个ALV-K流行株的gp85基因的遗传演化分析中表明,GXJL01~GXJL04与日本的Km5844、Sp53等神经胶质瘤毒株(fowl glioma-inducing virus, FGV)及具有神经组织嗜性的ALV-K毒株JS15SG01同一进化分支上,与本研究其他7个ALV-K分离株的遗传进化关系较远。同时在针对ALV-K的gp85蛋白氨基酸位点突变分析中发现,GXJL01~GXJL04存在多个与FGV和JS15SG01参考株相似的氨基酸位点突变。本研究首次把地方黄羽鸡品种花鸡头部的肿块诊断为内皮血管瘤,且ALV-K为内皮血管瘤的主要相关病原,分离株GXJL01~GXJL04区别于现行华南地区ALV-K流行株且与FGV、JS15SG01等神经组织嗜性的毒株高度同源。 展开更多
关键词 黄羽肉鸡 鸡内皮血管瘤 K亚群白血病病毒 遗传进化分析
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J亚群禽白血病病毒血液核酸筛查技术的建立
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作者 董欣怡 李锦群 +2 位作者 陈钦玺 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1115-1126,共12页
为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood ... 为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood quantitative polymerase chain reaction, ALV-J-B-qPCR)。根据GenBank中ALV-J pol及env基因序列,设计ALV-J的特异性引物,并优化反应条件,建立了ALV-J SYBR GreenⅠqPCR检测方法。以ALV-J病毒分离为阳性的鸡抗凝血为实验材料,分别制备抗凝血DNA、血细胞DNA、外周血淋巴细胞DNA、外周血淋巴细胞cDNA和血浆cDNA 5类血液检测模板进行ALV-J的PCR检测,筛选最佳检测模板;进一步比较蒸馏水破裂红细胞法提取混合血液DNA的混样方法,血液混样总体积为200μL的混样方法,血液混样总体积为10μL的混样方法共3种混样方法的检测准确性,筛选最佳混样方法。综合上述qPCR方法、检测模板与混样方法,成功建立了ALV-J-B-qPCR。运用ALV-J-B-qPCR分别进行预期流行率为1%~2%、4%~5%场景下的模拟筛查试验,并与病毒分离法比较。qPCR方法的特异性、灵敏性和重复性试验显示,该方法仅特异性扩增ALV-J,对标准质粒的最低检测限度为1×10^(2)copies·μL^(-1),批内与批间变异系数均<1%。对90份临床送检血液样品的检测结果显示,该qPCR方法对ALV-J的检出率(15.6%)高于p27抗原ELISA和普通PCR的检出率(12.2%)。检测模板筛选试验中,抗凝血DNA最符合检测准确度高、操作复杂度和成本低的要求,为最佳检测模板。混样方法摸索试验中,混样总体积为10μL(混样规模<12份)的混样方法检测准确性最高,为最佳混样方法。在样本数为400份,预期流行率为4%~5%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为6.25%,比病毒分离法高2.00%;在样本数为400份,预期流行率为1%~2%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为2.25%,比病毒分离法高0.75%。本研究建立的ALV-J-B-qPCR技术具有灵敏性高、检测快速和节约成本的优势,为种禽场加快ALV净化进程提供了新的思路和方法。 展开更多
关键词 J亚群白血病病毒 实时荧光定量PCR 混样检测 筛查技术
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邢台地区蛋鸡养殖场中禽白血病病毒的检测与分析
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作者 韩红艳 《中国动物保健》 2024年第10期164-165,共2页
为了了解邢台地区不同蛋鸡养殖场中禽白血病病毒(ALV)感染情况及禽白血病病亚群的流行情况。本试验于2022年1月—2024年3月采集邢台地区不同蛋鸡养殖场中海兰褐蛋鸡和罗曼粉蛋鸡的血液、蛋清、胎粪(雏鸡)及肛拭子病料组织检测样本共计1 ... 为了了解邢台地区不同蛋鸡养殖场中禽白血病病毒(ALV)感染情况及禽白血病病亚群的流行情况。本试验于2022年1月—2024年3月采集邢台地区不同蛋鸡养殖场中海兰褐蛋鸡和罗曼粉蛋鸡的血液、蛋清、胎粪(雏鸡)及肛拭子病料组织检测样本共计1 244份,采用酶联免疫吸附试验(EILSA)检测样品中禽白血病病毒感染情况及亚群的流行情况。结果显示,不同蛋鸡养殖场中的ALVp27抗原总阳性率分别为20.8%、14.6%、14.2%,其中肛拭子、蛋清样品中的ALV p27抗原阳性率均高于血清和胎粪,且呈现逐年下降的趋势,ALV p27抗原阳性样本中分别检出A/B亚群、J亚群、E亚群3种亚群,以ALV-J亚群流行为主,ALV-E亚群检测率呈现逐年升高的趋势。为进一步研究蛋鸡养殖场中ALV流行病调查与净化提供参考依据。 展开更多
关键词 蛋鸡 白血病病毒 P27抗原 酶联免疫吸附试验(EILSA)
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长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1与禽白血病病毒抗性和易感品系鸡相关性分析 被引量:2
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作者 柴文娴 骆欢 +4 位作者 陈绪靖 陈世豪 耿拓宇 崔恒宓 胡序明 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第4期26-32,共7页
内源性反转录病毒是长非编码RNA的重要来源,在抗病毒先天性免疫中发挥重要作用。鸡内源性反转录病毒衍生的长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1能够激活细胞免疫功能并抑制禽白血病病毒增殖。为进一步探讨lnc-ALVE1-AS1在ALV抗性和易感品系鸡中... 内源性反转录病毒是长非编码RNA的重要来源,在抗病毒先天性免疫中发挥重要作用。鸡内源性反转录病毒衍生的长非编码RNA lnc-ALVE1-AS1能够激活细胞免疫功能并抑制禽白血病病毒增殖。为进一步探讨lnc-ALVE1-AS1在ALV抗性和易感品系鸡中的表达规律及其与禽白血病病毒抗性的相关性,本研究通过荧光定量PCR发现,lnc-ALVE1-AS1在ALV抗性(G1)品系鸡免疫器官(胸腺、脾脏和法氏囊)和CEF细胞中的表达水平显著高于ALV易感(G3)品系鸡。病毒感染实验表明lnc-ALVE1-AS1在ALVJ感染CEF(G1和G3来源)细胞24h和96h后均显著下调;但是,lnc-ALVE1-AS1在G3来源CEF细胞中的表达水平下降更为明显,且ALVJ病毒复制水平显著高于G1鸡来源的CEF细胞。进一步通过lnc-ALVE1-AS1过表达实验证实,lnc-ALVE1-AS1不仅可以显著上调G3来源CEF细胞dsRNA识别受体(TLR3和IFIH1)和抗病毒天然免疫基因(IFI27-L2、IFIT5、IFITM3、IFN-β、ISG12-2和RASD2)表达,还显著抑制ALVJ复制。本研究揭示了lnc-ALVE1-AS1在禽白血病病毒抗性和易感品系鸡细胞和免疫组织器官中的表达规律和抗病毒功能,为抗病育种研究提供了新的遗传基础。 展开更多
关键词 内源性反转录病毒 lnc-alvE1-AS1 白血病病毒 鸡胚成纤维细胞
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禽白血病的病理及分子生物学诊断
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作者 肖静 万金隆 +2 位作者 杨江宇 杨梦娇 焦海宏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2671-2679,共9页
【目的】了解新疆某市鸡群E型禽白血病(E-avian leukosis)的感染情况及基因分子特征,为禽白血病的诊断和防控提供参考。【方法】本研究通过病理剖检、病理组织学观察、PCR检测、克隆载体连接等对疑似禽白血病病例进行实验室诊断,并通过D... 【目的】了解新疆某市鸡群E型禽白血病(E-avian leukosis)的感染情况及基因分子特征,为禽白血病的诊断和防控提供参考。【方法】本研究通过病理剖检、病理组织学观察、PCR检测、克隆载体连接等对疑似禽白血病病例进行实验室诊断,并通过DNAStar软件将分离株与参考毒株进行env基因核苷酸序列相似性比对、系统进化树构建和变异位点分析。【结果】发病鸡肝脏、心脏、脾脏、肾脏、肺脏等器官肿大,有大小不一的白色结节状病灶。病理组织学观察病灶为大小一致的成淋巴细胞,呈局灶性、弥漫性分布。禽白血病病毒(Avian leukaemia virus, ALV)基因组PCR扩增结果显示,获得大小为302 bp的目的条带,为ALV阳性;对阳性样品进行分型鉴定,阳性样品出现大小为1 074 bp的ALV-E特异性条带,分别命名为AKS2101和AKS2102。序列分析结果显示,分离株与E亚群毒株序列相似性为91.6%~98.6%。系统进化树显示,所得序列与ALV-E亚群参考株处于同一分支,与A、B、C、D、J、K亚群参考株处于不同进化分支,进一步说明该鸡群存在ALV-E感染。基因变异分析显示,分离株存在24处核苷酸变异和17处氨基酸位点变异,且可变位点位于序列高变区。【结论】新疆某市鸡群存在ALV-E感染,本试验为明确该地禽白血病流行情况提供基础数据。 展开更多
关键词 白血病病毒(alv) E亚型 病理 分子生物学 基因序列 诊断
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E亚群禽白血病病毒分离株的全基因组序列分析 被引量:4
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作者 吴植 吴双 +3 位作者 袁慧莎 张聪 朱善元 范红结 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期134-141,共8页
为了弄清江苏省某一地方品种种鸡场病死鸡的死亡原因,采集病死鸡组织,检测显示仅为ALV阳性;通过CEF和DF-1细胞培养、p27抗原检测和间接免疫荧光(IFA)对病毒进行鉴定;对病毒分离株前病毒DNA序列进行全基因组序列测定与分析。结果显示:分... 为了弄清江苏省某一地方品种种鸡场病死鸡的死亡原因,采集病死鸡组织,检测显示仅为ALV阳性;通过CEF和DF-1细胞培养、p27抗原检测和间接免疫荧光(IFA)对病毒进行鉴定;对病毒分离株前病毒DNA序列进行全基因组序列测定与分析。结果显示:分离株能够在CEF上生长,上清液中可检测到p27抗原,CEF出现特异性绿色荧光,DF-1细胞培养物以上检测均为阴性,初步表明分离株为ALV-E,命名为JY202106;其基因组大小为7529 bp,符合复制完整型C型反转录病毒特征,缺乏肿瘤基因;序列分析显示,分离株与参考株同源性为84.3%~98.7%,gp85进化分析分离株与ALV-E同属一个进化分支,与ev-1株同源性高达99.2%。研究表明地方品种鸡中存在内源性ALV,为该病的防控提供了参考和依据,也丰富了ALV基因组数据资料。 展开更多
关键词 白血病病毒 E亚群 分离鉴定 基因组分析
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6株K亚群禽白血病病毒分离株的全基因组测序及遗传进化分析 被引量:3
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作者 游广炬 阿热阿依·海依拉提 +5 位作者 李炜 李晓齐 高丽 曹红 王永强 郑世军 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第6期116-126,共11页
为研究目前中国临床流行的ALV毒株特征,我们采集临床上ALV P27阳性的鸡的血浆,接种DF-1细胞进行病毒分离,分离出6株外源性ALV毒株,并进一步对分离毒株进行前病毒全基因组测序。结果表明,6个ALV分离株的基因组结构均为典型的复制完整型C... 为研究目前中国临床流行的ALV毒株特征,我们采集临床上ALV P27阳性的鸡的血浆,接种DF-1细胞进行病毒分离,分离出6株外源性ALV毒株,并进一步对分离毒株进行前病毒全基因组测序。结果表明,6个ALV分离株的基因组结构均为典型的复制完整型C型逆转录病毒,缺乏病毒致癌基因,分离株DT190901基因组全长为7473 bp;DT190902和DT190905为7467 bp;DT190903和DT190906为7481 bp;DT190904为7493 bp,分离株间基因组序列同源性较高(98.6%~99.9%)。对6个ALV分离株与其他ALV毒株进行序列比较和遗传进化分析,结果表明,分离株的LTR、gag、pol及gp37基因与内源性ALV相比具有较高同源性(>93.8%),gp85基因与ALV-K一致性较高(>95.4%),属于新型ALV亚群(K亚群)遗传分支。分离株的LTR序列与内源性ALV相似,比其他外源性ALV亚群缺少一个CAAT Box、PRE Box、Y Box及CArG Box等转录调控元件。结果表明这6个分离株属于ALV-K亚群,为ALV-K与内源性ALV的重组毒株,其LTR序列与内源性ALV接近可能导致其复制能力及致病性降低。遗传进化分析表明,ALV-K已经在我国局部流行,并出现基因重组和突变毒株,应该引起重视并改进净化防控措施控制ALV-K流行。 展开更多
关键词 白血病病毒 K亚群 重组毒株 全基因组测序 遗传进化分析
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E3泛素连接酶RNF165在A亚群禽白血病病毒复制中的作用 被引量:1
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作者 王兴明 王后坤 +3 位作者 陈雪阳 方春 梁雄燕 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3781-3789,共9页
【目的】探明鸡源环指蛋白165(ring finger protein 165,RNF165)在A亚群禽白血病病毒(ALV-A)复制中的作用,为进一步研究鸡源RNF165对ALV-A致病性的影响提供参考。【方法】将ALV-A接种于DF-1细胞和1日龄雏鸡,通过Western blotting和实时... 【目的】探明鸡源环指蛋白165(ring finger protein 165,RNF165)在A亚群禽白血病病毒(ALV-A)复制中的作用,为进一步研究鸡源RNF165对ALV-A致病性的影响提供参考。【方法】将ALV-A接种于DF-1细胞和1日龄雏鸡,通过Western blotting和实时荧光定量PCR方法分别从体外和体内两个方面验证ALV-A对宿主RNF165表达的影响;参考已公布的RNF165基因序列设计过表达引物,通过PCR扩增RNF165基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1;将验证表达的重组质粒转染DF-1细胞,1 d后接种ALV-A,使用Western blotting检测过表达RNF165对病毒复制的影响;最后设计突变引物,构建RNF165功能结构域突变质粒,将过表达质粒和突变质粒分别转染DF-1细胞,1 d后接种ALV-A,Western blotting测定gp85蛋白表达差异。【结果】ALV-A感染DF-1细胞后未能检测到内源性的RNF165蛋白,但基因转录水平较对照组明显下调(P<0.01)。在体内试验中,与对照组相比,感染病毒雏鸡肝脏中RNF165基因和蛋白表达水平均有所下调(P<0.01);通过PCR成功扩增到大小为1068 bp的目的片段并成功克隆至pcDNA3.1,Western blotting结果显示,在39 ku处出现目的条带,RNF165过表达后促进了病毒复制;测序结果显示,成功构建出功能结构域突变质粒,与过表达质粒组相比,RNF165突变质粒组病毒的复制水平受到显著抑制。【结论】ALV-A感染抑制DF-1细胞和雏鸡肝脏RNF165的表达,在体外试验中,过表达RNF165会促进ALV-A的复制,且这种影响与其保守结构域有关。 展开更多
关键词 环指蛋白165 A亚群白血病病毒(alv-A) 病毒复制 功能结构域突变
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禽白血病病毒与多种病原协同致病机理研究进展 被引量:2
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作者 曾熙雯 温贵兰 田兴舟 《中国家禽》 北大核心 2023年第9期74-81,共8页
禽白血病(Avian leukosis,AL)是一类由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的禽类肿瘤性传染病。近年来,除ALV不同亚群的感染被报道以外,ALV也常被发现与其他病原共同感染,发病机制尚不明确,每年给家禽养殖行业造成严重的经济... 禽白血病(Avian leukosis,AL)是一类由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的禽类肿瘤性传染病。近年来,除ALV不同亚群的感染被报道以外,ALV也常被发现与其他病原共同感染,发病机制尚不明确,每年给家禽养殖行业造成严重的经济损失。文章对ALV的基因组特征、复制特点、基本致病机理、与其他禽类免疫抑制性病毒、细菌和寄生虫等病原的协同致病机理等进行了综述,为AL的防控提供更具有针对性的指导意见。 展开更多
关键词 白血病病毒 致病机制 协同致病
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J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立 被引量:30
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作者 叶建强 秦爱建 +2 位作者 邵红霞 金文杰 刘岳龙 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期235-237,共3页
利用抗J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白特异性单克隆抗体JE9,建立了检测ALV-Jenv抗原抗体免疫复合物的ELISA方法。应用该方法检测SPF鸡血清、鸡抗禽流感H9亚型阳性血清、鸡沙门氏菌阳性血清、鸡腺病毒阳性血清、鸡新城疫阳性血清,结... 利用抗J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白特异性单克隆抗体JE9,建立了检测ALV-Jenv抗原抗体免疫复合物的ELISA方法。应用该方法检测SPF鸡血清、鸡抗禽流感H9亚型阳性血清、鸡沙门氏菌阳性血清、鸡腺病毒阳性血清、鸡新城疫阳性血清,结果均为阴性,无交叉反应;抗ALV-J阳性血清与ALV-J特异性单克隆抗体JE9能相互阻断;ALV-J阳性血清经酸处理后,ELISA检测的D490差值明显下降。对部分攻毒鸡血清样本及田间ALV-J阳性血清样本进行电镜观察,可见ALV-J样病毒粒子及ALV-J样免疫复合物。经与间接免疫荧光(IFA)检测ALV-Jenv抗体结果比较表明,建立的ELISA方法与IFA方法两者具有较好的群体符合率,群体符合率为8/9。这些结果表明,本研究建立的ELISA方法在ALV-J的诊断中具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 白血病病毒 亚群 抗原/抗体免疫复合物 ELISA
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禽白血病诊断方法及净化研究进展
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作者 武琥琮 郭宇 +5 位作者 高登军 沈冬梅 苏胜杰 萨茹拉 郭文 云涛 《兽医导刊》 2024年第1期54-57,共4页
禽白血病(Avian leukosis,AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引发的一种种源性传染性疾病。目前,我国防治此病的基本策略为种鸡分阶段检测及根除净化。自我国实施净化方案以来已在部分品种鸡中获得可观成效,但部分地方品... 禽白血病(Avian leukosis,AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引发的一种种源性传染性疾病。目前,我国防治此病的基本策略为种鸡分阶段检测及根除净化。自我国实施净化方案以来已在部分品种鸡中获得可观成效,但部分地方品种鸡感染发病率仍较高。本综述主要概述了AL主要病原特性、诊断方法和净化防控现状的研究进展,旨在为ALV检测净化提供有价值的参考。 展开更多
关键词 白血病病毒 alv-J亚型白血病 地方品种鸡 疫病净化
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禽白血病病毒J亚群(ALV-J)的血清学调查及PCR诊断 被引量:22
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作者 成子强 赵振华 +2 位作者 郝永清 赵心力 哈斯阿古拉 《中国病毒学》 CAS CSCD 2002年第4期371-373,共3页
We investigated the infection of \%Avian leukosis virus\% subgroup J myelocytomatosis using ELISA method in Inner Mongolia Region. The result indicated that the meat type flocks of three different farms infection rate... We investigated the infection of \%Avian leukosis virus\% subgroup J myelocytomatosis using ELISA method in Inner Mongolia Region. The result indicated that the meat type flocks of three different farms infection rate of ALV J were 28.12%(9/32)?9.38%(3/32)and 8.33%(10/12),respectively,and all laying chickens infection rate were 0%(0/35,0/10).We chose 6 chickens of ALV J antibody positive and 13 chickens of ALV J antibody negative to do PCR test. The result indicated that 6 chickens of ALV J antibody positive were all PCR positive,and 4 chickens were PCR positive among 13 chickens of ALV J antibody negative. The result indicated that there were ALV J virus not only in ALV J antibody positive chickens but also in some ALV J antibody negative chickens. 展开更多
关键词 白血病病毒J亚群 alv-J 血清学调查 PCR诊断 骨髓细胞瘤病
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tva受体基因起始密码子突变对鸡感染A亚群禽白血病病毒的影响 被引量:1
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作者 陈伟国 邝智祥 +4 位作者 张翔宇 李文雪 徐慧娟 朱学凤 谢青梅 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期367-373,共7页
[目的]探索tva受体基因起始密码子突变(tva c.3G>A)对鸡感染A亚群禽白血病病毒(Avian leukemia virus subgroup A, ALV-A)的影响。[方法]利用Sanger测序和RT-PCR验证我国黄羽肉鸡存在tva c.3G>A突变。利用流式细胞术检测tva c.3G&... [目的]探索tva受体基因起始密码子突变(tva c.3G>A)对鸡感染A亚群禽白血病病毒(Avian leukemia virus subgroup A, ALV-A)的影响。[方法]利用Sanger测序和RT-PCR验证我国黄羽肉鸡存在tva c.3G>A突变。利用流式细胞术检测tva c.3G>A突变对鸡体外感染RCASBP(A)-GFP荧光报告病毒的影响。通过ALV-A体内攻毒试验,探究tva c.3G>A突变对鸡体内感染ALV-A的影响。利用直接测序方法对我国黄羽肉鸡品系tva c.3G>A突变位点进行基因分型。[结果]Sanger测序和RT-PCR结果鉴定我国黄羽肉鸡品系tva基因编码区第3位碱基由G突变为A,该突变引起tva基因起始密码子序列由ATG突变为ATA。流式细胞术检测结果显示野生型tva c.3G/G鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast, CEF)对RCASBP(A)-GFP易感,纯合突变型tva c.3A/A CEF抗RCASBP(A)-GFP感染,表明tva c.3G>A突变导致鸡体外抗RCASBP(A)-GFP的感染。ALVA体内攻毒试验的结果表明,tva c.3G>A突变导致鸡体内抗ALV-A的感染。tva c.3G>A突变位点基因分型发现,CB01、CB08、CB10和CB15品系存在纯合抗性基因型tva c.3A/A,频率分别为0.10、0.15、0.23和0.08。[结论]tva c.3G>A突变引起鸡在体外、体内抗ALV-A感染,tva c.3G>A突变位点可作为ALV-A的遗传抗性位点。 展开更多
关键词 A亚群白血病病毒 tva受体基因 起始密码子 突变 遗传抗性 黄羽肉鸡
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