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禽类多瘤病毒APV-1的cDNA病毒突变体构建
被引量:
3
1
作者
李劲
高奎
+2 位作者
李可可
刘浏
刘学群
《中南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
2013年第3期22-25,共4页
为进一步研究禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译调控的分子机制,设计和构建了与野生型病毒APV-1相同的在AUG位点有agno-1a突变区和7个插入氨基酸的新型重组病毒.用碱裂解法提取了APV-1 cDNA克隆pHL1003,全长线性目的片段由Acc I部分酶...
为进一步研究禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译调控的分子机制,设计和构建了与野生型病毒APV-1相同的在AUG位点有agno-1a突变区和7个插入氨基酸的新型重组病毒.用碱裂解法提取了APV-1 cDNA克隆pHL1003,全长线性目的片段由Acc I部分酶切后回收,再用T4连接酶将合成的agno插入片段磷酸化后与目的片段连接得到了重组质粒,最后转化至E.coli DH10b感受态细胞中筛选阳性克隆.经PCR,PAGE和DNA测序验证获得了APV-1突变cDNA克隆.
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关键词
禽类多瘤病毒
CDNA克隆
重组质粒
PCR
DNA测序
下载PDF
职称材料
禽类多瘤病毒APV-1晚期基因多顺反子的EGFP标记载体构建和表达
2
作者
李劲
刘琳
《中南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2016年第1期39-43,共5页
为研究禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译起始调控的机制,设计和构建了以增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因替代病毒APV-1野生型的晚期结构蛋白VPs基因的真核双顺反子表达载体,并观察其在转染进入禽类原代成纤维细胞中的表达翻译状态.以AP...
为研究禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译起始调控的机制,设计和构建了以增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因替代病毒APV-1野生型的晚期结构蛋白VPs基因的真核双顺反子表达载体,并观察其在转染进入禽类原代成纤维细胞中的表达翻译状态.以APV-1的c DNA克隆(p HL1003)为模板,运用PCR技术扩增出与野生型病毒APV-1相同的Ori区、早期编码区和晚期Agno-1a区序列作为载体片段;从质粒p EGFP-N1中扩增出编码绿色荧光的EGFP DNA片段;经连接构成重组质粒p HL1003-GFP,通过脂质体细胞转染方法将质粒DNA转染到鸡胚胎和鹌鹑胚胎成纤维细胞中,通过细胞培养观察荧光表达状况.DNA序列分析证实了重组克隆中的EGFP序列与已知的质粒p EGFP-N1中EGFP序列一致.转染72 h后观察鸡和鹌鹑胚胎成纤维细胞,转染成功胚胎细胞明显表达较强的荧光,说明GFP可以在构建的双顺反子重组质粒的下游中正常表达并产生荧光.p HL1003-GFP重组质粒的构建及其在禽类原代成纤维细胞中的高效表达,为我们研究多顺反子翻译起始调控中Agno-1a基因的表达对下游病毒结构蛋白基因的翻译调控机制提供了简洁易用的系统和模型.
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关键词
禽类多瘤病毒
增强绿色荧光蛋白
重组质粒
转染
表达
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职称材料
题名
禽类多瘤病毒APV-1的cDNA病毒突变体构建
被引量:
3
1
作者
李劲
高奎
李可可
刘浏
刘学群
机构
中南民族大学生命科学学院
出处
《中南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
2013年第3期22-25,共4页
基金
教育部留学回国人员科研启动基金[教外司留(2007)1108号]
文摘
为进一步研究禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译调控的分子机制,设计和构建了与野生型病毒APV-1相同的在AUG位点有agno-1a突变区和7个插入氨基酸的新型重组病毒.用碱裂解法提取了APV-1 cDNA克隆pHL1003,全长线性目的片段由Acc I部分酶切后回收,再用T4连接酶将合成的agno插入片段磷酸化后与目的片段连接得到了重组质粒,最后转化至E.coli DH10b感受态细胞中筛选阳性克隆.经PCR,PAGE和DNA测序验证获得了APV-1突变cDNA克隆.
关键词
禽类多瘤病毒
CDNA克隆
重组质粒
PCR
DNA测序
Keywords
avian polvomavirus
eDNA clone
recombinant virus
PCR
DNA sequencing
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
下载PDF
职称材料
题名
禽类多瘤病毒APV-1晚期基因多顺反子的EGFP标记载体构建和表达
2
作者
李劲
刘琳
机构
中南民族大学生命科学学院
出处
《中南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2016年第1期39-43,共5页
基金
教育部留学回国人员科研启动基金[教外司留(2007)1108号]
文摘
为研究禽类多瘤病毒晚期基因多顺反子翻译起始调控的机制,设计和构建了以增强绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因替代病毒APV-1野生型的晚期结构蛋白VPs基因的真核双顺反子表达载体,并观察其在转染进入禽类原代成纤维细胞中的表达翻译状态.以APV-1的c DNA克隆(p HL1003)为模板,运用PCR技术扩增出与野生型病毒APV-1相同的Ori区、早期编码区和晚期Agno-1a区序列作为载体片段;从质粒p EGFP-N1中扩增出编码绿色荧光的EGFP DNA片段;经连接构成重组质粒p HL1003-GFP,通过脂质体细胞转染方法将质粒DNA转染到鸡胚胎和鹌鹑胚胎成纤维细胞中,通过细胞培养观察荧光表达状况.DNA序列分析证实了重组克隆中的EGFP序列与已知的质粒p EGFP-N1中EGFP序列一致.转染72 h后观察鸡和鹌鹑胚胎成纤维细胞,转染成功胚胎细胞明显表达较强的荧光,说明GFP可以在构建的双顺反子重组质粒的下游中正常表达并产生荧光.p HL1003-GFP重组质粒的构建及其在禽类原代成纤维细胞中的高效表达,为我们研究多顺反子翻译起始调控中Agno-1a基因的表达对下游病毒结构蛋白基因的翻译调控机制提供了简洁易用的系统和模型.
关键词
禽类多瘤病毒
增强绿色荧光蛋白
重组质粒
转染
表达
Keywords
avian polyomavirus
EGFP
recombinant plasmid
transfection
expression
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
禽类多瘤病毒APV-1的cDNA病毒突变体构建
李劲
高奎
李可可
刘浏
刘学群
《中南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
2013
3
下载PDF
职称材料
2
禽类多瘤病毒APV-1晚期基因多顺反子的EGFP标记载体构建和表达
李劲
刘琳
《中南民族大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2016
0
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职称材料
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