实时荧光定量TaqManPCR检测禽腺病毒C4型方法的建立及初步应用

研究旨在建立一种检测禽腺病毒C4型的实时荧光定量TaqManPCR技术。以禽腺病毒C4型(Fowl aviadenovirus 4 isolate SD1601/FAdV-4株)DNA为模板,建立检测禽腺病毒C4型的实时荧光定量PCR方法。制备含有上述FAdV-C4目的片段的DNA作为标准品,以10倍比稀释的FAdV-C4标准品建立标准曲线,测定敏感性。同时采用5个稀释度的标准品验证该方法的批内和批间重复性,并与本实验室所保存的多种病毒进行特异性检测。结果:建立的实时荧光定量TaqManPCR方法仅在FAdV-C4DNA样本中检出荧光信号。最低检出量为4.738×10^(2)copies/μL,敏感性良好,是常规PCR的100倍;线性范围达9个数量级。该方法重复性良好,批内和批间的变异系数均在0.9%以下。以上结果表明,建立的FAdV-C4实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强和重复性好,有用于临床样品中禽腺病毒C4型的快速检测潜力,为诊断FAdV-C4提供分子生物学依据,以降低FAdV-C4对我国养禽业的影响。

基于Fiber1基因分型的安卡拉病毒感染病例实验室检测

为确诊贵州省某养鸡场发生疑似安卡拉病毒感染的病例,实验基于安卡拉病毒Fiber1基因设计合成引物,对病料样本进行病原核酸检测和核酸测序与序列分析。结果:(1)从病例的肝脏样本中扩增出大小约1 296 bp的Fiber1基因目的片段,与预期结果相符。(2)序列测定与分析显示,扩增的Fiber1基因序列与国内分离株序列同源性高,亲缘关系近。(3)系统进化分析显示,感染病例中的安卡拉病毒流行株(命名为:GZ-LPS)与K31、MX-SHP9、ON1和河北、江苏等地的FAdV-4分离株处于同一进化分支,而与其他血清型禽腺病毒株处于不同进化分支。结论:此次疫情经实验室诊断,确定为禽腺病毒Ⅰ群C种血清4型的安卡拉病毒感染所致。

鸡心包积水综合征疫苗研究进展

心包积水综合征是由I亚群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)引起的一种新型鸡传染病。本病发病急,传播速度快,造成雏鸡的高死亡率,给养鸡业造成严重的经济损失。该病于1987年在巴基斯坦靠近卡拉奇的安卡拉首先被报道,我国最早于2013年有发病报道,2014年后在河南、山东、江苏等地流行。针对本病目前无特效疗法,疫苗免疫是防控本病的较好方法。在巴基斯坦等心包积水综合征早先流行比较严重的国家和地区,研制的自家疫苗对预防本病有一定效果,但是也存在保护效果不稳定、继发感染等风险;全病毒灭活疫苗安全性高,稳定性好,但成本较高。此外,活疫苗也展现出较好的防控效果,但存在毒力返强等问题,重组亚单位疫苗则因其安全、高效在未来具有良好的开发和应用前景。论文就鸡心包积水综合征疫苗的研究进展加以总结,以期为更好的防控本病提供参考。