秋石斛‘三亚阳光’Actin的克隆与表达模式分析

本研究克隆了秋石斛‘三亚阳光’(Dendrobium ‘Sonia Hiasakul’)肌动蛋白基因(DenActin)cDNA全长序列,并进行了DenActin进化地位和表达模式的分析。通过克隆获得的DenActin cDNA序列的全长为1 596 bp,其中开放阅读框为1 134 bp,编码377个氨基酸,同时通过gDNA克隆获得了DenActin 3′端的一段包含一个内含子的403 bp的片段。序列同源性分析发现该基因序列与GenBank中注册的其他植物Actin核苷酸序列的同源性均在85%以上,氨基酸序列的同源性高达97%以上。通过最大似然法构建其系统进化树,分析发现DenActin与黄石斛Actin的亲缘关系最为密切,并与其他兰科植物归为一大类。半定量PCR分析表明,DenActin在幼苗叶片和中苗茎尖、根、叶片以及成熟植株的茎、根、叶片、花柄、1 mm花苞、3 mm花苞、5 mm花苞、9 mm花苞中均稳定表达。秋石斛DenActin的克隆和表达模式分析为秋石斛功能基因的表达分析提供了候选的内参基因,而3′端包含内含子的gDNA片段的克隆为避免实时定量分析中的gDNA污染提供了引物设计的便利。