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小麦种子过氧化物酶基因wp1的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:4
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作者 单丽伟 罗海霞 +1 位作者 范三红 郭蔼光 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第3期213-218,共6页
【目的】克隆小麦种子过氧化物酶基因wp1,并利用原核系统表达纯化。【方法】通过RT-PCR从小麦未成熟种子中扩增wp1基因cDNA,构建His-tag和MBP融合表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。使用直链淀粉亲和层析获得MBP-WP1融合蛋白,并以ABTS... 【目的】克隆小麦种子过氧化物酶基因wp1,并利用原核系统表达纯化。【方法】通过RT-PCR从小麦未成熟种子中扩增wp1基因cDNA,构建His-tag和MBP融合表达载体,并在大肠杆菌中进行表达。使用直链淀粉亲和层析获得MBP-WP1融合蛋白,并以ABTS为底物检测酶活性。【结果】获得的wp1基因cDNA编码一种358个氨基酸残基的蛋白产物,其序列与大麦BP1相似性高达89%;空间结构预测结果表明,小麦WP1属于第三类过氧化物酶,具有该家族成员典型的血红素和钙离子结合位点;His-Tag融合的WP1主要以包涵体形式存在,而MBP融合的WP1主要以可溶形式存在,表达量分别达到总蛋白的18.2%和34.6%;纯化获得的MBP-WP1融合蛋白可检测到过氧化物酶活性。【结论】使用原核系统可高效表达出可溶性的、具有部分活性的WP1蛋白。 展开更多
关键词 小麦 种子过氧化物酶 高GC含量 基因克隆 基因表达
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小麦种子过氧化物酶WP1基因的原核表达、纯化及多克隆抗体制备 被引量:18
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作者 单丽伟 唐如春 +2 位作者 刘三阳 范三红 郭蔼光 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期26-30,共5页
WP1是小麦种子中最主要的阳离子过氧化物酶,该酶不仅参与种子的发育过程,而且影响面粉的加工品质。首先构建了WP1基因原核表达载体pET28a-WP1,并将其转化到T7 Expression大肠杆菌菌株中诱导表达。His-tag融合的WP1主要以包涵体形式存在... WP1是小麦种子中最主要的阳离子过氧化物酶,该酶不仅参与种子的发育过程,而且影响面粉的加工品质。首先构建了WP1基因原核表达载体pET28a-WP1,并将其转化到T7 Expression大肠杆菌菌株中诱导表达。His-tag融合的WP1主要以包涵体形式存在,使用Ni-NTA亲和层析柱在变性条件下进行纯化,获得纯度大于98%的重组蛋白。重组WP1经尿素梯度透析复性溶解后免疫新西兰大白兔,最终获得WP1多克隆抗体。ELISA分析结果显示制备的WP1兔抗血清的效价大于1∶625 000;Western blotting结果证明制备的多克隆抗体对WP1具有很好的专一性。 展开更多
关键词 小麦 种子过氧化物酶 WP1 表达纯化 抗体制备
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Analysis of Amylase and Superoxide Dismutase Isozymes During the Germination Process of Emmenopterys henryi Oliv Seeds 被引量:17
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作者 刘国勇 彭丽娟 陈发菊 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2009年第2期6-8,19,共4页
[ Objective] The study was to understand the changes of amylase(AMY) and superoxide dismutase(SOD) isozymes during the ger- mination process of Emmenopterys henryi Oliv seeds. [ Metbod] By employing polyacrylamide... [ Objective] The study was to understand the changes of amylase(AMY) and superoxide dismutase(SOD) isozymes during the ger- mination process of Emmenopterys henryi Oliv seeds. [ Metbod] By employing polyacrylamide gel electrophoresis method, the expressions of AMY and SOD isozymes during seed germination process were analyzed. ~ Result] The main AMY bands remained strong during the whole peri- od and a new band A2 appeared in the middle and late period of seed germination. Some new SOD bands occurred at the early stage, then be- came weak or disappeared in the middle period, and band S6 became intense in the late peried. [ Conclusion.] The expression of AMY and SOD isozyme gene has temporal difference during germination of E. henryi Oliv seeds. 展开更多
关键词 Emmenopterys henryi Oliv Amylase isozymes Superoxide dismutase isozyme Seed germination
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