扎西会议会址古建筑木构件种属鉴定及降解评价

为配合扎西会议旧址的修缮与保护,了解川南先民的用材习惯及木构件降解情况,对原建于清道光十五年的扎西会议旧址木构件应用木材解剖学方法进行种属鉴定,采用荧光偏光技术结合物理性质进行降解程度评价。结果表明:其窗框用材为柏科(Cupressaceae)柏木(Cupressus spp.),地脚枋和封檐板为松科(Pinaceae)硬木松(Pinus spp.)、楼板为松科(Pinaceae)云杉(Picea spp.),欠枋和柱子为杉科(Taxodiaceae)杉木(Cunninghamia spp.),其中柏木、硬木松、杉木在威信县均有分布,表明当地民居建筑主要以“就地取材”为主。窗框降解程度最严重,其次是欠枋,其余的古木构件降解程度与现代材差异不大。木构件的降解程度与树种及其所处位置有关,其中白蚁、阳光和雨水是木构件降解的主要原因。

基于线粒体DNA和核DNA遗传标记的中华鲟种属鉴定

目的 构建一种基于线粒体DNA和核DNA遗传标记的中华鲟及其潜在杂交种的鉴定方法。方法 根据美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)已公布的中华鲟cytb基因序列设计引物,并选用鲟鱼单拷贝核基因fam43a扩增引物对中华鲟DNA进行扩增与测序,其中对fam43a基因扩增产物进行TA克隆测序。通过BLAST序列相似性检索确定样本来源,并基于邻接法构建鲟形目系统进化树。结果 中华鲟样本测序所得cytb和fam43a基因序列长度分别为728 bp和730 bp,且10个克隆群所测fam43a基因序列完全一致。基本局部比对搜索工具(basic local alignment search tool, BLAST)序列相似分析显示,所测cytb与fam43a基因序列均与GenBank数据库中的中华鲟相似性最高,相似性分别为99.86%和100%。系统进化分析显示,中华鲟样本所测得序列均与GenBank数据库中的中华鲟DNA序列聚类在一起,且与鲟形目其他物种位于不同分支。结论 联合使用线粒体DNA和核DNA遗传标记能够快速准确地鉴定中华鲟及其潜在杂交种,该方法能够满足法医日常检案的鉴定需求,为中华鲟的拯救和保护提供科学技术支持。

家畜血液储存条件及预处理方式对种属鉴定的影响

目的:考察血液储存时间、储存温度和预处理方式对种属鉴定的影响。方法:以猪、牛、羊血液为样本,考察储存时间、储存温度和预处理方式对种属鉴定的影响。储存时间考察1周和3周,储存温度考察4℃和−20℃,预处理方式考察是否去除红细胞。样本经DNA提取,PCR-RFLP检测后进行结果判定。结果与结论:储存1周时,两种储存温度及预处理方式均能正常进行种属鉴定。储存3周时,两种储存温度,预处理时不去除红细胞会产生假阴性判定,假阴性是由于提取的DNA中存在PCR抑制物;预处理时去除红细胞可正常检测。该结论对于猪、牛、羊血液具有普适性。

微滴式数字PCR技术用于生物样品种属鉴定和绝对定量

目的运用微滴式数字PCR技术进行生物样品的种属鉴定和绝对定量。方法选择人mtDNA两个编码基因ND4和16S rRNA,设计特异性引物与探针,用人来源及常见动物样本验证种属特异性,再用重组质粒和2组共16份人来源生物检材,倍比稀释。使用微滴式数字PCR技术进行种属检验和绝对定量,验证其灵敏度和稳定性。结果人重组质粒FAM(ND4)可进行人来源样品的检测,其检测结果与各级稀释梯度基本吻合,微滴式数字PCR技术可以检测出反应体系中低至单拷贝的DNA。结论微滴式数字PCR技术可以进行生物样品的种属鉴定和绝对定量,并具有很高的灵敏度和特异性,可应用于日常法医物证检验。

DNA分析与种属鉴定

种属鉴定在法医学实践中占有重要地位。现行用于法医学种属鉴定的方法主要有形态学、血清学和DNA分析技术。本文就种属鉴定的技术发展以及各种技术的优缺点做一比较,重点讨论了DNA分析技术在种属鉴定中的应用价值。

线粒体16srRNA和ND4基因在种属鉴定中的应用研究

目的 构建一种用于种属鉴定的线粒体DNA（mtDNA）16srRNA和ND4基因荧光标记复合扩增检测体系。方法 利用引物设计软件（Primer 5）对两个mtDNA序列ND4基因和16srRNA基因设计两对引物，每对引物中的一条在5’端标记荧光素（6-FAM）。按传统复合扩增技术建立复合扩增体系，用ABIPRISM 310基因分析仪对产物进行分析。结果 人类DNA扩增产物出现两个峰，片段大小分别为110bp的人类特异片段和149bp的人与动物共有片段，而动物DNA扩增产物出现一个峰，片段大小为149bp。对30个实验室存放5～15年的陈旧人血痕也能明确判断其种属来源。结论 该体系可以明确区分人源性生物检材与其它常见动物样本，对实验室长期存放的陈旧检材也具有较好的检测能力。

市售豆芽携带细菌种属鉴定及酸性电解水的杀菌效果

为了探究市售豆芽携带细菌种类,寻求有效的杀菌方法,采用16S r RNA基因序列分析对分离的细菌进行种属鉴定,并考察了不同p H值的酸性电解水对豆芽的杀菌效果。结果表明,分离出的5株细菌分别为Kosakonia、Staphylococcus、Klebsiella、Enterobacter和Enterobacter属成员。p H值为3.02、4.47和5.58,有效氯质量浓度为46.00 mg/L左右的酸性电解水处理市售新鲜豆芽,可以显著降低其微生物数量。p H 4.47、有效氯质量浓度为46.09 mg/L的酸性电解水处理黄豆芽,使其细菌总数、酵母菌和霉菌菌落总数、大肠菌群菌落数分别降低了1.14、2.48、1.29(lg(CFU/g)),该指标的酸性电解水处理绿豆芽,使其细菌菌落总数、酵母菌和霉菌菌落总数、大肠菌群菌落数分别降低1.23、1.42、1.25(lg(CFU/g))。因而酸性电解水对于提高市售豆芽的食用安全性可以发挥积极的作用。

细胞色素b基因序列测定进行种属鉴定应用研究

目的建立细胞色素b基因序列测定进行种属鉴定的方法。方法应用特异性引物扩增人与14种常见动物细胞色素b基因14817～15174区间长度为358bp的片段,用荧光标记自动测序技术对此片段进行序列测定,比较这些动物与人之间片段的序列差异。结果所有血痕样本均可以得到良好的测序结果,所测14种动物细胞色素b基因358bp的片段序列与人之间均存在明显的差异,最小为20.1%,最大差异为28.5%。结论测定细胞色素b基因序列进行种属鉴定特异性强、适用检材广,具有良好的应用价值。

基于Cytb基因的动物检材种属鉴定在非传统领域的部分运用

传统意义上的种属鉴定主要用于法医学研究方面,然而随着科技的进步及社会发展的需要,种属鉴定在其他领域也有广泛的应用。主要以线粒体Cytb基因为切入点,简要介绍了线粒体DNA及Cytb基因的结构和特点,总结和归纳了基于Cytb基因进行种属鉴定的相关技术方法在打击动物走私、濒危物种保护、食品及动物产品或制品等的检验检疫方面的运用情况,并对存在的问题及发展趋势做一阐述。

扩增TP53内含子8用于生物检材的种属鉴定

目的扩增常见动物TP53内含子8片段,确定其在法医学生物检材种属鉴定中的应用价值。方法收集标本为包括人在内的15种常见动物的血痕或肌肉组织,提取DNA后定量,应用PCR扩增TP53内含子8,PAGE电泳,银染后观察结果。结果人和猕猴都扩增出一条长度为460bp的片段,鳝鱼、鲢鱼、青蛙、鸭、兔、猫、小白鼠、豚鼠、猪、牛、羊虽有扩增产物,但不在分型区内,鸡、狗未见扩增产物。结论扩增TP53内含子8进行种属鉴定,方法简单,灵敏度较高。

COⅠ基因微条形码技术在毛发种属鉴定中的应用

目的利用COⅠ基因微条形码技术对哺乳动物毛发进行种属鉴定。方法设计一对哺乳动物COⅠ基因微条形码通用引物,利用共同区PCR技术对来自于哺乳纲5个目11个种属的实验动物毛发DNA进行扩增,并对扩增产物进行双向引物测序,将测序结果进行拼接后所得的基因序列输入BOLD数据库进行同源性比对。结果本研究设计的微条形码通用引物能够对所有种属实验动物毛发DNA进行扩增,扩增片段长度147 bp。数据库同源比对结果显示最匹配物种与实验动物种属相符,除狮同源匹配度为98.99%外,其他实验动物同源匹配度均为100%,且狮种内遗传距离1%,种间遗传距离大于种内遗传距离十倍,可以进行种属判定。结论建立的COⅠ基因微条形码技术能够快速准确地对哺乳动物毛发检材进行种属鉴定。

复合扩增mtDNA-HVⅠ、HVⅡ和cytb片段在法医学种属鉴定中的价值

目的探讨复合扩增mtDNAD-环HV、HV和细胞色素b片段进行种属鉴定的方法,以及在法医学生物检材种属鉴定中的应用价值。方法收集包括人在内的17种动物的血痕或肌肉组织样本,提取DNA后定量,用三对引物复合扩增mtDNAD-环HV、HV片段和细胞色素b(cytb)片段,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染显色后分析结果。结果人类DNA扩增产物为278bp、358bp、425bp三条带,动物DNA扩增产物为一条带,在电泳谱中位置与人358bp的条带存在差异。结论复合扩增mtDNAD-环HV、HV和细胞色素b片段进行种属鉴定,方法简单,灵敏度较高,可应用于法医学实践。

烧骨残片种属鉴定的研究

为了找出常见动物骨骼焚烧残片的种属鉴定方法,笔者对猪、羊,股骨及肱骨的断端,猪、羊、牛颅骨的残片(额顶部),焚烧后进行了观察及测量,并与人类股骨、肱骨及焚烧的颅骨残片进行了比较.结果发现,长骨滋养孔的位置,骨干骨壁厚度,以及颅骨厚度,颅缝形态及内板表面特征等方面,是鉴定骨骼残片种属的有价值的特征.根据对常见动物长骨及颅骨残片的现察及研究,提出了骨骼残片种属鉴定的方法.

骨骼种属鉴定的组织学研究

目的 探求骨骼残渣的种属鉴定的组织学方法。方法 对人体不同部位骨骼，及常见动物骨骼的 77张骨组织学切片，在光镜下进行了骨组织学形态学研究。结果 不同动物骨组织学的形态学特征存在明显差异，其主要差别有：内、外环骨板的形态和相对厚度；哈氏系统之间的骨板的形态和哈氏系统的大小；哈氏环层骨板的数量及骨陷窝的数量等。结论 骨组织学的特征，不仅可以区分人与动物骨骼的残渣，也可以对不同动物的骨骼残渣进行区分。

线粒体DNA cytb和HVI的分析用于种属鉴定

目的以线粒体DNA为目标序列,探讨生物检材的种属来源问题。方法复合扩增线粒体DNA细胞色素b基因(Cb)片段和D-环HVI上人源特异性DNA片段,2%琼脂糖凝胶电泳检测复合扩增产物谱带;用常规测序技术获得种属来源不明的检材Cytb基因序列,登陆美国国家生物信息中心网站主页(http://www.ncbi.nlm.nih.gov),将Cytb序列的测序结果用BLAST2.2.9[2004.5.1]进行匹配查询,查询数据库中存在的与其相匹配的物种条目。结果检材经复合扩增后电泳检测可区分人源性检材和非人源性检材;用生物信息法可确定检材种属来源结论检测线粒体DNA细胞色素b基因和D-环HVI的有关序列可在DNA分子水平上鉴别人源性检材和非人源性检材,结合测序的分子生物信息学方法,可对检材进行种属鉴定。

扩增Amelogenin基因用于生物检材种属鉴定

目的扩增Amelogenin基因测定血痕或组织的种属,以确定在法医学检验中的应用价值。方法收集猪、羊、马等10几种常见动物的血痕或肌肉组织,应用PCR扩增Amelogenin基因,PAGE电泳,银染后观察结果。结果哺乳动物猪、牛、狗、羊、马、驴动物血痕扩增产物为1条带,片段长度102bp。猕猴检见106bp和112bp两条带,与人血痕没有区别。兔、猫、鼠血痕未检出特异性片段。其它常见物种鳝鱼、青蛙、鸭、鹅、鸽、鹌鹑、麻雀等均未见扩增产物。结论扩增Amelogenin基因进行种属鉴定,方法简单,灵敏度高,可应用于法医检案。

线粒体基因种属鉴定复合扩增体系

针对cyt b基因和ND6基因序列,设计两对引物,以14种常见动物(包括人)生物性检材为对象进行PCR扩增,产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、硝酸银染色进行分析。结果证明,两条电泳条带者为人样本,分别是cyt b基因片段(358 bp)和ND6基因片段(181 bp);一条电泳条带者为动物来源,是358 bp cyt b基因片段。在37.5μL PCR反应体系中最小检出模板量为0.25 pg基因组DNA。检材在4℃、室温和37℃温度下,经过4个月后均可获得正确的种属区分。高度潮湿环境中放置50 d的检材、形成于水泥地面、墙面、泥土等基质上的血痕,本方法可得到正确区分。由此建立的种属鉴定的线粒体基因复合扩增体系,其检测片段短、灵敏度高、操作简易,适合法医学上微量、降解、陈旧检材的种属判定。

利用唾液斑DNA上12S rRNA基因片段进行动物种属鉴定

目的通过检测唾液斑DNA确定案件所涉及动物的种属。方法通过提取动物唾液斑DNA,扩增其线粒体DNA上的12S rRNA基因片段,并进行DNA测序,测序结果在GenBank上进行BLAST搜索,再利用DNA MAN软件进行同源性分析。结果从唾液斑中成功地提取到了基因组总DNA,并成功扩增出了用于动物种属鉴定的12SrRNA基因片段。结论所报道的方法能用于动物种属鉴定。

应用线粒体12srRNA和COX-1基因进行种属鉴定

目的以线粒体DNA为目标序列,探讨生物检材的种属来源问题。方法收集人和7种动物的血液或肌肉组织样本,提取DNA定量后,复合扩增线粒体12srRNA和COX-1基因片段,2%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物谱带。结果人类DNA扩增产物分别为436 bp、277 bp两条谱带,而鼠、鸡、猪、兔、猫、狗、羊的扩增产物仅有一条谱带,430～450 bp,即动物基于COX-1基因片段无扩增产物。结论复合扩增线粒体12srRNA和COX-1两基因片段进行种属鉴定,方法简单,灵敏度较高,可应用于法医学实践。