牛、猪红细胞表面异种抗原改造的比较

把动物红细胞输用给人,即异种输血,可以缓解目前血源紧张的矛盾,但牛和猪的红细胞与人的血浆发生强烈的凝集反应,不能直接输用。本研究首次对牛和猪红细胞表面抗原进行修饰改造,并对改造后的猪、牛红细胞进行比较,从而为开拓丰富来源、安全有效的人血代用品奠定基础。使用基因重组的咖啡豆α半乳糖苷酶清除牛和猪红细胞表面的主要异种抗原αGal抗原,结合使用化学材料甲氧基聚乙二醇(mPEG)修饰遮蔽牛和猪红细胞表面的非主要异种抗原nonαGal抗原,以实现对牛和猪红细胞表面异种抗原的改造。结果:改造后的牛、猪红细胞与人混合血浆的盐水凝集反应消失,具有和人红细胞相似的血清学特征;牛红细胞比猪红细胞脆性低,异种抗原的表达量低,及其他的一些特征说明牛红细胞比猪红细胞更适合作为人红细胞代用品。结论:改造后的牛红细胞与人血浆相匹配,有可能成为人红细胞代用品。

康肠灵对异种抗原诱导的大鼠实验性溃疡性结肠炎的治疗作用及机制探讨

目的:观察康肠灵对异种抗原诱导的大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用。方法:兔结肠粘膜加完全弗氏佐剂经皮下多点注射大鼠造成溃疡性结肠炎模型。给药治疗2周,观察大鼠精神饮食活动、食量、体重的变化;免疫组化法检测CD4、CD8;放免法检测结肠组织TNF-α含量;肉眼观察结肠组织形态学改变,并取结肠粘膜作病理检查。结果:模型组动物可见软便,个别拉稀便,活动、饮食减少,毛发欠光泽。结肠肉眼可见溃疡形成,粘膜纹理粗糙,甚者纹理消失,肠壁变薄,个别大鼠粘膜层坏死脱落。镜下炎性细胞(以淋巴细胞为主)浸润明显,炎症至粘膜下层,杯状细胞重度减少,可见肉芽肿,甚至可见重度纤维化。外周血CD4、CD8显著下降,组织TNF-α显著升高。康肠灵治疗后大鼠稀便渐停,饮食、活动逐渐恢复正常。结肠肉眼未见溃疡,镜下炎性细胞浸润减少,炎症多局限于粘膜层,杯状细胞轻度减少,未见肉芽组织,尚有一定程度纤维化。外周血CD4、CD8显著升高,结肠组织TNF-α显著下降。结论:康肠灵对异种抗原引发的大鼠溃疡性结肠炎模型有治疗作用,其机制可能与影响免疫,抑制炎症反应有关。

中国版纳近交系小型猪心脏异种抗原表位α1,3-Gal的分布

目的 研究中国版纳小型猪心脏的异种抗原α1,3 Gal的分布和半定量分析 ,为小型猪心脏的转基因和异种移植提供资料。方法 通过亲和免疫组织化学法和图像分析对 10头版纳小型猪心脏进行α1,3 Gal的分布和半定量研究。结果 α1,3 Gal主要分布于细胞膜 ,细胞浆也有少量表达 ,胞核无表达。在小型猪心内膜、心肌间质、心外膜、神经束膜等处有α1,3 Gal分布 ,心肌细胞未发现α1,3 Gal分布。半定量分析发现α1,3 Gal表达量心房内膜最多 ,心肌间质最少。结论 异种抗原α1,3 Gal在心脏中的表达存在较大差异 。

版纳微型猪近交系椎间盘异种抗原α-半乳糖基的分布

目的 探讨中国版纳微型猪近交系 (BMI)椎间盘组织中异种抗原的分布 ,为临床猪 -人异种椎间盘移植提供依据。方法 采用 BMI 6头 ,雄性 ,8～ 11月龄的 L1～ 5椎间盘组织 ,常规福尔马林固定 ,石蜡包埋切片。以植物凝集素 (BSI- B4 )作为亲和物质 ,采用免疫组织化学 SABC方法、DAB显色 ,观察猪椎间盘组织中异种抗原 (α-半乳糖基 )的分布情况。结果 椎间盘纤维环软骨细胞及髓核软骨样细胞核膜有阳性染色的黄色颗粒沉着 ,而基质、弹力及胶原纤维无着色。结论 BMI椎间盘组织中有异种抗原存在 ,但抗原表达较弱 。

CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中的机制研究

目的:通过靶向CTLA4 siRNA探讨CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中是否发挥功能及其作用机制。方法:体外扩增培养利用磁珠分选出的T调节细胞,AO/PI染色计算活率并通过细胞计数作出生长曲线,流式细胞仪检测扩增后细胞表型;采用Alex488染料标记siRNA,通过流式细胞仪检测siRNA的转染效率;实时定量PCR检测靶向CTLA4 siRNA的沉默效率;流式细胞术检测CTLA4在蛋白水平的变化;混合淋巴实验检测CTLA4表达下调后,T调节细胞的功能变化。结果:经过4周体外扩增,T调节细胞能够增长约1 200倍,并具有高活率和高纯度;siRNA的转染效率为61.8%±4.5%;Realtime PCR和流式细胞术检测CTLA4在mRNA水平和蛋白水平均有不同程度下降,其结果与对照组相比差异显著(P<0.05);混合淋巴实验结果显示T效应细胞在受到异种抗原刺激时会发生增殖,Treg细胞能够抑制这种增殖,但是CTLA4表达下调后明显减弱了T调节细胞的抑制能力。进一步,在DC细胞参与的混合淋巴实验中发现Treg能够通过DC抑制T效应细胞对异种抗原的应答,而si CTLA4-Treg不能通过DC抑制T效应细胞增殖。结论:CTLA4在Treg介导的异种免疫应答中发挥着重要作用,这种作用方式可能是通过直接作用于T效应细胞或者间接通过DC细胞作用于T效应细胞发挥作用。靶向CTLA4 siRNA能够下调Treg细胞CTLA4的表达,影响Treg细胞抑制异种抗原引起T效应细胞应答的能力。

异种抗原治疗肿瘤对荷瘤小鼠调节性T细胞的影响

目的研究异种抗原免疫续贯瘤内注射的方法对荷瘤小鼠肿瘤局部调节性T细胞数量的影响,及其对肿瘤的治疗作用。方法利用异种抗原免疫续贯瘤内注射的方法处理试验小鼠,测量瘤块大小,计算抑瘤率,使用流式细胞术检测肿瘤主要组织相备性合体Ⅰ类(MHC-Ⅰ)类型表达及调节性T细胞的数量,使用ELISA方法检测瘤内白细胞介素2(IL-2)浓度。结果实验组小鼠的MHC-Ⅰantigen、CD3+CD8+T细胞以及CD3+CD4+CD25+T细胞的表达率分别为42.45%、22.58%和2.91%,IL-2的浓度为100.6pg/ml,与免疫对照组和空白对照组之间存在显著性差异(P<0.01)。结论异种抗原免疫续贯瘤内注射的治疗方法可以上调肿瘤MHC-Ⅰ类抗原,减少肿瘤局部调节性T细胞的数量,有良好的抗肿瘤作用。

异种抗原免疫序贯瘤内注射对肿瘤浸润淋巴细胞的影响

目的研究异种抗原免疫序贯瘤内注射对瘤荷小鼠的治疗作用,以及该方法对肿瘤浸润淋巴细胞的影响。方法使用异种抗原免疫序贯瘤内注射的方法处理小鼠,观察肿瘤的大小,分离肿瘤浸润淋巴细胞,并利用流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡及各细胞亚群的比例。结果各组小鼠肿瘤浸润淋巴细胞的CD3+T细胞数量差异无显著性。免疫后治疗组中的CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞以及CD3+CD4+CD25+T细胞所占比例分别为54%、22%和2.91%,其中CD4+与CD8+的比值为2.49,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论异种抗原序贯瘤内注射方法可以增加肿瘤微环境中效应细胞的数量,减少CD3+CD4+CD25+T调节细胞的表达,具有显著的抗肿瘤效应。

以异种抗原ⅡFA检测间日疟抗体的观察

在以间接免疫荧光抗体试验(IIFA)对间日疟病人进行检测时,因间日疟原虫的培养尚未得到完全成功,只能采用以间日疟原虫人工感染的夜猴或黑猩猩血或病人血来制备抗原片。但是这些来源的代价很高,我国尚难加以采用。为了观察几种来源比较容易的异种抗原的检测效果,我们以猴的食蟹猴疟原虫。

异种抗原免疫序贯瘤内注射对瘤荷小鼠的免疫治疗作用

目的研究异种抗原免疫序贯瘤内注射对瘤荷小鼠免疫功能的影响及其对肿瘤的抑制作用。方法使用异种抗原免疫序贯瘤内注射的方法处理小鼠,观察肿瘤大小,利用流式细胞术检测各细胞亚群的比例。用ELISA方法检测肿瘤组织内细胞因子的浓度。结果各组小鼠肿瘤浸润淋巴细胞的CD3+T细胞数量没有统计学差异。免疫后治疗组中的CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞以及CD3+CD4+CD25+T细胞所占比例分别为54%、22%和2.91%,其中CD4+与CD8+的比值为2.49,与对照组比较有显著差异(P<0.05)。治疗组IL-2浓度为100.61pg/ml,TNF-α浓度是54.11pg/ml,与各对照组之间均存在显著性差异(P<0.05)。结论异种抗原序贯瘤内注射方法可以增加肿瘤微环境中效应细胞的数量及细胞因子的浓度,减少CD3+CD4+CD25+T调节细胞的表达,具有显著的抗肿瘤作用。

以异种抗原IFA试验检测抗间日疟原虫抗体的评价

用Pc抗原对间日疟和恶性疟混合流行区的间日疟患者血样进行间接荧光抗体(IFA)试验,以评价其替代Pv抗原检测抗间日疟原虫抗体的效用。以Pc、Pf及Pv抗原分别检测采自海南及云南两省的60份确诊为间日疟的患者血样,阳性符合率依次为97.0％,86.4％及97.0％,无显著差异;GMRT依次为85.9,50.8及316.0,两两相比差异均非常显著。用Pc和Pf抗原进行血清学调查,约有半数不易确诊间日疟或恶性疟,其中又有45.5％可能将间日疟误诊为恶性疟。在目前间日疟原虫尚不能体外培养的情况下,宜尽快建立间日疟动物模型或开发基因工程Pv抗原。

异种抗原瘤内注射对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用

背景:异种抗原的免疫原性比较强,容易引起较强的免疫应答。如果将异种抗原直接引入肿瘤内部,在肿瘤内部引发一系列免疫反应,有可能逆转肿瘤微环境的免疫抑制状态,达到抗肿瘤的目的。目的:评价人红细胞膜抗原瘤内注射对荷S180肉瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法:复制昆明小鼠S180肉瘤皮下瘤模型,瘤内注射质量浓度为5g/L的人红细胞膜抗原或生理盐水,连续注射5d,记录注射前及注射第3,7,14天肿瘤体积变化。同时设肿瘤细胞与人红细胞膜抗原同时接种组、免疫后瘤内注射人红细胞膜抗原组、免疫后瘤内注射生理盐水组。另取60只小鼠复制S180肉瘤皮下瘤模型,免疫及瘤内注射人红细胞膜抗原或生理盐水同前。注射第14天每组处死6只小鼠,肿瘤称质量,行病理学分析,每组剩余小鼠继续观察生存情况。结果与结论:各组小鼠肿瘤体积逐渐增大,第14天人红细胞膜抗原与肿瘤细胞同时接种组、免疫后人红细胞膜抗原瘤内注射组、人红细胞膜抗原瘤内注射组肿瘤体积均小于瘤内注射生理盐水组。瘤内注射人红细胞膜抗原可显著降低肿瘤质量。瘤内注射人红细胞膜抗原后镜下可见肿瘤细胞坏死、淋巴细胞等炎症细胞浸润。未观察到各组小鼠生存期有明显差别。结果表明异种红细胞膜抗原瘤内注射可以抑制小鼠S180肉瘤肿瘤生长。

异种移植领域中异种抗原的研究现状

异种移植目前需要解决的主要问题仍是超急排斥反应。异种移植物血管内皮细胞上的异种抗原是导致超急排斥反应发生的关键。本文从异种抗原的性质、遗传学特征、分布和作用等方面介绍了近年来在异种移植领域中的研究现状及有可能消除异种抗原的分子生物学技术。

以异种抗原间接荧光抗体试验检测间日疟原虫抗体的评价

使用Pc及Pf抗原对单纯间日疟流行区的疟疾病人血清进行IFA试验,以评价其替代PV抗原检测间日疟原虫抗体的效应程度。用Pc,Pc及Pf抗原分别检测155例确诊的间日疟病人血清,其GMRT依次为175.8,37.4及12.7,两两相比均有非常显著差异;其阳性符合率依次为97.4％,81.9％及63.9％,差异亦非常显著。3种抗原测得的抗体滴度进行直线回归分析,获得表示Pv和Pc抗原检测间日疟原虫抗体时抗体滴度关系的回归方程Y=1.22+0.65X。假此方程,通过Pc抗原检测时的抗体滴度,可能推算用Pv抗原检测时的抗体滴度。

雏鸡感染IBDV后对异种抗原的免疫应答反应

本实验研究了雏鸡感染传染性法氏囊病毒(IBDV)后对异种抗原——小鼠红细胞(MRBC)和新城疫(ND)疫苗在外周血液的免疫应答反应。检测指标有IgG,IgM 和γ—球蛋白含量;血凝抗体滴度以及 T 细胞、B 细胞和淋巴细胞数量。实验结果表明,1日龄感染 IBDV 雏鸡接种 ND 疫苗后,血清 IgG,IgM 及γ—球蛋白含量和血液 B 细胞、T 细胞及淋巴细胞数量均明显低于对照雏鸡。1日龄和4周龄感染 IBDV 雏鸡接种 MRBC 后血凝抗体滴度,血清 IgG,IgM 及γ—球蛋白含量和血液 T 细胞及淋巴细胞数量也均低于未感染雏鸡。说明感染 IBDV 雏鸡对 ND 疫苗和 MRBC 的体液免疫和细胞免疫应答功能均明显降低。

大鼠睾丸异种抗原的血清学筛选

目的 通过重组 c DNA表达文库的血清学分析 (SEREX)技术获得来自大鼠睾丸文库有潜在治疗价值的异种同源抗原的 c DNA序列。方法 将人卵巢癌细胞株免疫兔后收集的抗血清作为筛选血清 ,采用 SEREX技术筛选大鼠睾丸 c DNA文库。结果 通过两轮筛选获得 10个阳性克隆。通过生物信息学分析认为这 10个阳性单克隆 c DNA序列编码 7种不同的蛋白 ,其中 OV- 2、OV- 4为肿瘤相关序列 ,OV- 6、OV- 7为编码未知蛋白的序列。结论 用异种免疫血清筛选异种同源肿瘤抗原拓宽了 SEREX技术的应用范围 ,是一种行之有效的方法。

从健康人外周血中建立异种抗原特异性的T细胞系初探

目的 :为了探讨异种器官移植中T细胞参与的免疫排斥机理 ,从健康人外周血中试行建立识别猪淋巴细胞抗原特异性的T细胞系方法研究。方法 :通过照光致弱的猪外周血单个核细胞反复刺激人的T淋巴细胞 ,3H TdR掺入法筛选特异性增殖的T细胞。结果 :获得 2株为TCRαβ+CD3+CD8+细胞 ,另 1株为TCRαβ+CD3+CD4+细胞。结论 :健康人外周血中有识别异种抗原特异性的T细胞系 。

中国内江猪胰腺组织异种抗原的研究

为获取临床猪→人异种胰腺移植的基础资料 ,分别采用植物凝集素 BSIB4、健康人血清、人类血型抗原 A、B、H物质单克隆抗体免疫组化法检测 1 0头内江猪胰腺组织中异种移植抗原的表达。结果显示 :内江猪胰腺组织中血管内皮、导管上皮细胞表达α- Gal;部分胰岛细胞、胰腺外分泌细胞和所有导管上皮细胞均表达人类血型 A抗原。结论 :人体内存在抗内江猪胰腺组织部分细胞的天然抗体 ;

两种抗原联合检测对诊断侵袭性肺曲霉病的诊断价值

真菌血清抗原检测在侵袭性肺曲霉病（invasive pulmonary asmrgillosis，IPA）中的诊断价值越来越受到重视。目前开展较为广泛的血清学检查方法包括1，3-B-D葡聚糖抗原检测（G试验）和曲霉半乳甘露聚糖检测（GM试验）。已有学者”剖对G试验和GM试验在特定人群真菌感染的诊断价值进行了探讨，但二者联合对曲霉感染早期诊断的价值尚不清楚。为此，我们对G试验和GM试验联合检测对IPA的早期诊断价值进行研究，现将结果报道如下。