应力环境下三维诱导组织工程种植细胞修复关节软骨缺损

目的 :三维立体诱导非软骨来源种植细胞修复关节软骨损伤。方法 :分离培养骨髓间充质干细胞 ,分组诱导 ,进行周期性应力刺激 ,设立对照。 2周后 ,观测大体、组织学形态、生化指标 ,筛选最佳诱导方法修复关节软骨缺损模型 ,分别于 12、 2 4周取材 ,进行组织学观察及评分 ,验证长期修复效果。结果 :与二维培养各组相反 ,立体培养各组出现明显软骨分化 ,并以凝胶微球悬浮细胞进行应力刺激培养组效果最佳。术后动物肢体功能优良 ,12周后软骨缺损被完整修复 ,表面光滑 ,质地坚硬 ,为透明软骨结构 ,与周围软骨结合紧密 ;2 4周后仍然保持透明软骨结构 ,组织学评分无变化。对照各组软骨缺损均未被修复。结论 :立体软骨诱导优于平面诱导 ,应力环境提高诱导质量 ,获得的种植细胞可取得稳定的长期修复效果。

种植人体活性细胞的生物心脏瓣膜

目前 ,种植人体活性细胞的生物心脏瓣膜主要有组织工程心脏瓣膜和种植人体活性细胞的猪主动脉瓣两种。组织工程心脏瓣膜是在人体可吸收的聚二醇酸纤维支架上种植人体同种活性细胞 ,先种植成纤维细胞 ,再种植单层内皮细胞包裹瓣叶。种植人体活性细胞的猪主动脉瓣是在清除原有细胞的组织内重建人体同种活性细胞。清除新鲜猪主动脉瓣组织内原有细胞的方法是将瓣膜先经高、低渗溶液处理 ,然后用酶溶液处理。细胞经培养分离后 ,将成纤维细胞植入经处理的瓣膜组织 ,再植入内皮细胞。种植人体活性细胞的生物心脏瓣膜不会促使受者产生有害的免疫反应 ,并具有再生能力。

在心外科异种膜状移植物组织内种植人体活性细胞的方法

目前临床应用的心外科膜状移植物主要有心脏瓣膜和血管两种移植物。由于现有的各种心外科膜状移植物尚无法令人满意,因此国外正在研究一种先清除异种膜状移植物组织内原有的细胞、再在已清除组织内原有细胞的异种膜状移植物的组织内种植人体活性细胞的方法。将新鲜异种膜状移植物先经高、低渗溶液处理,然后用酶溶液处理,以清除异种膜状移植物组织内原有细胞。人体细胞经培养分离后,将成纤维细胞和平滑肌细胞植入已清除组织内原有细胞的异种膜状移植物组织内,再植入内皮细胞。种植人体活性细胞的异种膜状移植物不会促使受体产生有害的免疫反应,并具有再生能力。

低剂量辐射及BLMA_5对小鼠种植肿瘤细胞的抑制作用

为了探讨低剂量理化因子（Ｄ１）诱导的兴奋效应对种植肿瘤细胞的影响，用低剂量Ｘ线和博莱霉素Ａ５（ＢＬＭＡ５）等理化因子对小鼠种植肿瘤的发生、发展进行了研究。结果表明：小鼠经 ０．０５Ｇｙ Ｘ线照射或及 ＢＬＭＡ５ ０．０８ｍｇ／ｋｇ作用后 ６ｈ接种肿瘤细胞，其成瘤率低，肿瘤生长缓慢，比直接接种肿瘤细胞组明显降低（ｐ＜０．０５）。证明低剂量辐射和化学因子均可诱导兴奋效应，使机体防卫功能上调，对随后种植的肿瘤细胞具有抑制作用。

成纤维细胞在聚羟基丁酸酯表面黏附与种植研究

可降解高分子聚合物广泛应用于组织工程 ,其表面的黏附特性影响细胞的种植与生长。我们研究了成纤维细胞系 NIH3 T3在可降解材料聚羟基丁酸酯 ( PHB)表面的黏附和生长。应用线性变剪切流槽研究 NIH3 T3细胞在材料表面的黏附力学特性 ,结果表明 ,由于在 PHB表面的临界脱离剪应力较低 ,高密度接种时细胞趋于聚集 ;在经多聚赖氨酸衣被的表面临界脱离剪应力提高 ,细胞铺展生长。对三维 PHB多孔支架种植细胞实验表明 ,在PHB材料表面进行多聚赖氨酸衣被 ,可以有效地提高细胞种植效率。

双细胞种植改善人工血管内皮细胞的保留率

背景:前期研究表明,在人工血管内壁种植内皮细胞,使其早期快速内皮化,可以改善移植血管的通畅性,但种植的单层内皮细胞往往黏附力差,在血流的冲击下容易脱落。目的:采用血管内皮细胞和平滑肌细胞双层种植方法,提高人工血管腔面内皮细胞的保存率。方法:采用标准酶分离技术和细胞培养技术分离培养兔内皮细胞。采用组织贴块法分离培养兔平滑肌细胞。并分别以lacZ和GFP基因转染内皮细胞及平滑肌细胞。双层细胞种植组在聚四氟乙烯人工血管管腔面先后种植平滑肌细胞和内皮细胞,以单纯种植血管内皮细胞为对照。在体外将受试的人工血管接入作者设计的灌流模型下灌注2h,计算比较灌注前后受试标本内皮细胞密度。体内实验,将人工血管植入兔子体内7d,分别测定内皮细胞保留率。结果与结论:灌注2h后,单纯内皮细胞种植组细胞保留率为0.39±0.04,而双层细胞种植组内皮细胞保留率为0.73±0.07,双层细胞种植组细胞保存率明显高于单纯内皮细胞种植组(P<0.01)。人工血管植入兔体内7d,单纯内皮细胞种植组内皮细胞保留率为0.63±0.10,双层细胞种植组内皮细胞保留率为0.95±0.06,两组间差异有显著性意义(P<0.05)。结果证实在内皮细胞和人工血管壁之间种植平滑肌细胞在体外和体内均可提高内皮细胞的保存率。

去细胞猪主动脉瓣叶的获取和内皮细胞的种植

目的 探讨猪主动脉瓣叶去细胞后作为组织工程心脏瓣膜支架的可行性。 方法 经胰酶 - EDTA、表面活性剂和核酸酶处理 ,去除猪主动脉瓣叶的细胞成分 ,测定瓣叶去细胞前、后的生物力学特性 ,并在其表面种植新生牛主动脉内皮细胞 (BAECs) ;分别行大鼠皮下包埋实验。 结果 猪主动脉瓣叶中的细胞成分能完全去除 ,获得完整无细胞的纤维网状支架 ,断裂强度和断裂伸长率无明显变化 ;种植的 BAECs在去细胞瓣叶表面可形成一层连续的细胞层 ,其分泌前列环素 (PGI2 )的能力同直接种植在 2 4孔板中的比较 ,差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。 结论 猪主动脉瓣去细胞后获得的纤维支架可以用来构建组织工程瓣膜 ,适宜于血管内皮细胞的生长。

生物瓣材料人工种植内皮细胞的研究

生物瓣材料表面人工形成单层内皮细胞可望成为生物瓣防钙化并延长其使用寿命的最有前途的方法之一,解除戊二醛的毒性作用是种植细胞在生物瓣表面存活的前提.用L-谷氨酸处理戊二醛固定保存6个月以上的牛心包材料,成功地接种了培养的血管内皮细胞,使生物瓣内皮细胞种植的进一步研究成为可能.

猪脱细胞主动脉瓣叶不同方法预处理后种植内皮细胞的比较研究

目的:猪脱细胞主动脉瓣叶经不同的方法预处理后,种植新生牛主动脉内皮细胞(BAECs),观察细胞的增殖状态.方法:猪脱细胞主动脉瓣叶分别经纤维连接蛋白(Fn,50μg/m1)预铺、胎牛血清(FCS)浸泡、无血清DMEM浸泡预处理12 h,采用间隔24 h、3次种植的方法种植BAECs,于种植后第4天、第7天进行细胞计数,并行MTT法和3H-TdR掺入量检测比较细胞的增殖状态.同时于第7天取瓣叶进行组织学检测,观察瓣叶表面内皮细胞覆盖情况.结果:种植后第4天和第7天,采用Fn预铺、FCS浸泡预处理的脱细胞瓣叶,其细胞计数、MTT的光密度和3H-TdR掺入值明显高于无血清DMEM预处理组(P＜0.01).瓣叶经H-E染色,可见Fn预铺、FCS浸泡预处理组内皮细胞的覆盖情况优于无血清DMEM浸泡组.结论:Fn或FCS预处理能明显增加内皮细胞在脱细胞瓣叶表面的黏附和增殖,有利于组织工程心脏瓣膜的体外构建.

应用SRY原位杂交技术检测肝脏干细胞移植肝内种植情况

背景:以往干细胞种植后的定植示踪技术有磁探针标记、荧光示踪标记法、慢病毒感染荧光标记法及性别交叉Y染色体原位杂交检测法,各有优缺点。目的:应用SRY原位杂交技术观察受体来源肝脏干细胞(肝卵圆细胞)在移植肝内的定植情况。方法:二袖套法建立大鼠原位肝移植模型。供体为雌性DA大鼠,受体为雌性Lewis大鼠,设受体大鼠60只,肝卵圆细胞为Lewis大鼠来源的雄性细胞,移植中供肝种植肝卵圆细胞悬液。应用SRY原位杂交染色技术观察受体来源的雄性肝卵圆细胞在雌性移植肝内的定植情况。结果与结论:经门静脉和肝动脉注射种植的肝卵圆细胞及其分化细胞主要定植在移植肝内中央静脉及汇管区周围,应用SRY原位杂交染色技术可以有效观察到受体来源肝脏干细胞在移植肝内的定植情况。

CO_2气腹对肿瘤细胞种植与生长的影响

目的 探讨腹腔镜手术中常用的气腹介质CO2 对径路口及腹腔内肿瘤细胞种植及转移的影响。方法 手术前 1h于 30只Wistar大鼠腹腔内注入R15肝癌细胞株 ,并按随机抽样法将大鼠均分为免气腹组、He气腹组和CO2 气腹组 3组 ,实验维持 2h、2 8d后宰杀动物 ,比较各组径路口及腹腔内肿瘤的种植及转移情况。结果 在径路口、肠浆膜层、肠系膜、大网膜和膈肌部位种植的肿瘤重量 :CO2 气腹组分别为 (32 6 .7± 2 30 .3)mg、(6 2 6 .2± 2 15 .9)mg、(476 .2± 2 0 4 .8)mg、(2 5 36 .5± 90 6 .7)mg及 (384 .5± 14 9.9)mg ;He气腹组分别为(2 35 .6± 10 7.3)mg、(414 .2± 14 8.4 )mg、(2 6 1.8± 92 .6 )mg、(16 33.4± 2 4 7.3)mg及 (2 2 0 .0± 5 7.9)mg ;免气腹组分别为 (14 5 .0± 4 2 .4 )mg、(2 2 1.5± 10 8.2 )mg、(2 12 .5± 10 9.6 )mg、(797.5± 335 .9)mg和 113.0mg。在各部位种植的肿瘤重量 ,CO2 气腹组均明显高于He气腹组和免气腹组 ,差异有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ;He气腹组均高于免气腹组 ,但差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。结论 CO2 气腹与He气腹及免气腹相比 ,可促进腹腔内肿瘤细胞的种植与生长。

心肌细胞种植的研究进展

各种原因引起的心肌梗死是临床上重要的死亡原因。利用细胞种植可以增加有功能的心肌细胞数量和质量 ,但是供体细胞来源受限。干细胞是一类具有无限增殖和多向分化潜能的细胞 ,进行合适的诱导可使其向心肌细胞方向分化 。

内皮细胞种植预防支架内再狭窄的研究进展

内皮细胞在再狭窄形成过程中的作用越来越受到重视 ,内皮细胞完整性的破坏及功能紊乱与内膜增殖及血管重塑有密切的关系。内皮细胞移植能替代、修复受损内皮的功能并抑制内膜过度增生。本文就内皮细胞种植预防支架内再狭窄的相关研究作一综述。

转染组织纤溶酶原激活物及内皮型一氧化氮合酶基因的内皮细胞和平滑肌细胞共同种植于人工血管对内膜增生的影响

背景:前期研究表明,双层细胞种植能有效提高内皮细胞保留率,将组织纤溶酶原激活物基因转染到内皮细胞中能提高其细胞溶解纤维蛋白的能力。目的:采用双细胞种植及修饰内皮的组织纤溶酶原激活物基因提高内皮细胞保留率和抗栓能力,通过内皮型一氧化氮合酶基因调控平滑肌细胞的增殖,观察对小口径人工血管通畅率的影响。方法:以4种不同组合细胞(内皮细胞+平滑肌细胞SMC,内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞,内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶,内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶)种植在PTFE管腔面。将新西兰大白兔随机分成4组,4种人工血管经旁路分别移植在4组兔的腹主动脉上。结果与结论:移植后60d,种植内皮细胞+平滑肌细胞组和内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶组内膜厚度无明显差异(P>0.05)。与内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶组相比,未转染内皮型一氧化氮合酶组(内皮细胞/组织纤溶酶原激活物+平滑肌细胞)内膜明显增厚(P<0.05);未转染组织纤溶酶原激活物组(内皮细胞+平滑肌细胞/内皮型一氧化氮合酶)内膜较薄(P<0.05)。提示组织纤溶酶原激活物基因转染可以促进血管内膜增生导致血管狭窄,但同时转入内皮型一氧化氮合酶基因可以抑制组织纤溶酶原激活物的促进平滑肌细胞增殖及内膜增生的作用。

骨组织工程中细胞种植基质材料的发展

目前研究和实验中的骨组织工程支架材料种类繁多,来源不同,性能各异,但尚无一种材料能够满足支架材料的全部要求,应充分考虑到各种材料的优缺点,发挥各自优势,取长补短,形成复合材料,并含有最佳组合的生长因子释放系统,发挥最佳成骨能力。

细胞种植——骨修复研究所揭示的新概念

细胞的成活被认为是自体骨移植的基础。对骨修复的研究提示有另外一种骨形成方式。这种方式不依赖于原有细胞的存在。骨形成蛋白(BMP)能够通过诱导干细胞向骨细胞分化来形成骨组织。这种蛋白质诱导的细胞分化和组织再生过程称为细胞种植或组织种植。本文分析了骨修复的细胞学过程,以期探讨BMP成骨的生物学意义。血管内皮细胞在骨修复的启动阶段发挥重要作用,但不具备特异性。破骨细胞通过分泌BMP启动骨特异性修复。BMP成骨演示了蛋白质通过诱导干细胞分化导致特异性组织修复,这一过程也可能在其他组织中重复。

骨髓间充质干细胞-聚乙醇酸支架复合体种植动物皮下构建组织工程化小口径血管(英文)

背景:课题组的前期工作已证实骨髓间充质干细胞可以诱导分化为血管内皮细胞和血管平滑肌细胞,并证实所诱导的细胞和胶原包埋的聚乙醇酸支架具有良好的组织相容性。目的:探讨利用动物皮下作为生物反应器构建小口径组织工程化血管的可行性。方法:骨髓间充质干细胞诱导分化为血管平滑肌样细胞和血管内皮样细胞,分层种植于胶原包埋聚乙醇酸支架表面,然后将细胞-支架复合体种植于动物皮下,构建小口径组织工程化血管。结果与结论:人工血管组织学观察见管壁结构清晰,其大体结构和天然血管相似,可承受26.6kPa的血管腔内压力不破裂。皮下培养8周免疫荧光观察Brdu标记的部分细胞核呈现明亮的黄绿色荧光。结果说明利用动物的皮下作为生物反应器,采用静态培养的方式构建小口径组织工程化血管是可行的。

组织工程心脏瓣膜构建中细胞种植的实验研究

目的 观察不同细胞种植在脱细胞猪主动脉瓣叶支架上的生长特点。方法 将猪主动脉瓣叶行脱细胞处理 ,并在其上分别种植新生牛主动脉内皮细胞 (BAECs)、平滑肌细胞 (SMCs)、SMCs和 BAECs。结果 猪主动脉瓣叶中的细胞成分能完全去除 ,种植的 BAECs在脱细胞瓣叶表面形成一连续的细胞层 ,SMCs形成多层连续的细胞层 ,复合种植细胞则形成多层连续的细胞层 ;BAECs表面形成一连续的细胞层 ,其间为多层分布的SMCs,同时内皮细胞分泌前列环素 (PGI2 )的能力明显增强。结论 不同种类的细胞在脱细胞瓣叶表面均生长良好 ,并呈现不同的生长方式 ,SMCs和 BAECs复合种植有可能为今后组织工程瓣膜构建中有关细胞种植提供参考。

静态与动态下脱细胞猪主动脉瓣种植人成纤维细胞初步研究

目的 探索在脱细胞猪主动脉瓣膜材料上种植人成纤维细胞的方法与效果 ;材料和方法 采用在脱细胞猪主动脉瓣膜材料上静态与动态种植人成纤维细胞 ,并对其结果进行比较研究 ;结果 静态种植不能在猪主动脉瓣叶的两侧形成完整的单层人成纤维细胞融合层 ;而经过动态种植 ,在一定条件下可以在猪主动脉瓣叶两侧形成完整的单层人成纤维细胞融合层 ;

骨和软骨组织工程中细胞种植基质材料的研究进展

组织工程学是近年发展起来的一门新学科。其中,骨和软骨组织工程的研究进展较快,已成功修复了骨和软骨缺损及预制了预先设计形态的软骨。本文就近年来骨和软骨组织工程中采用的各种细胞种植基质材料的特性、优缺点和应用前景等方面作一综述。