PCR-DGGE结合种特异性PCR技术检测市售酸奶中乳酸菌

应用多聚酶链式反应结合变性梯度凝胶电泳技术(PCR-DGGE),并结合种特异性PCR技术检测酸奶中的乳酸菌组成。优化DGGE检测相关条件,结果表明最佳DGGE条件为:凝胶变性梯度范围30%～60%,电泳时间300min。利用上述条件能有效区分植物乳杆菌、乳双歧杆菌,但是无法区分保加利亚乳杆菌与嗜酸乳杆菌,嗜热链球菌、鼠李糖乳杆菌与干酪乳杆菌;在此结果基础上,再采用种特异性PCR技术,能够有效区分上述存在共迁移现象的菌株。采用上述技术检测6种市售酸奶中乳酸菌,发现6种产品中均包含保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌;3种产品含有干酪乳杆菌;1种产品标识有双歧杆菌,但未检测到。通过选择性培养基分离计数酸奶样品中乳酸菌,两种方法所得的检测结果相同,验证检测上述方法的可靠性。研究表明,PCR-DGGE与种特异性PCR技术结合可有效检测酸奶中乳酸菌组成。

分子生物学方法鉴定新资源食品中乳杆菌

采用16S rDNA扩增同源性分析、16S rDNA PCR-RFLP技术、种特异性序列扩增技术,对新资源食品中的副干酪乳杆菌Lactobacillus paracasei、鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus、嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus、植物乳杆菌Lactobacillus plantarum进行鉴定分析。结果表明,16S rDNA扩增同源性分析能够有效鉴定嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌,无法区分副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌;16S rDNA PCR-RFLP技术可以有效鉴定嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌;种特异性序列扩增能够有效鉴定副干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌。结合检验工作需要,运用以上方法可以对食品安全国家标准中生化鉴定法难以确认的乳杆菌进行有效鉴别。