牦牛卵母细胞的体外成熟、种间受精与胚胎培养

探讨了卵母细胞体外成熟时间、卵母细胞质量、精子准备和受精卵培养体系对牦牛卵母细胞种间体外受精效果的影响。结果表明:牦牛卵母细胞随体外成熟培养时间延长,第一极体排出率增加,囊胚发育率以成熟培养24 h最高;A级卵母细胞种间受精后囊胚的发育率(48.77±3.76)%显著高于B级(32.05±5.24)%和C级(7.54±7.18)%(P<0.05);BO液洗涤离心处理的精子受精后卵裂率(82.53±6.54)%显著高于Percoll液分离精子受精后的卵裂率(67.39±4.50)%(P<0.05),而两者囊胚率差异不显著((42.32±4.13)%vs(35.59±5.62)%,P>0.05);荷斯坦奶牛精子浓度在1×106～5×106/mL范围与牦牛卵母细胞受精效果差异不显著。卵丘细胞、输卵管上皮细胞共培养和SOF液培养种间受精卵,其卵裂率差异不显著,但共培养组的桑葚胚、囊胚和孵化胚发育率均显著高于SOF液培养组。

利用胞浆内单精子注射技术研究水牛与猪的种间受精:阶段性报告

胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)是一种研究种间受精机制的有效工具。本文旨在采用ICSI方法来构建水牛-猪种间显微授精卵,探讨了水牛-猪种间显微授精卵早期发育并检验了几种提高其发育潜力的方法。研究表明:(1)经ICSI方法制备的水牛-猪种间显微授精卵可以形成双原核,并能够发育到囊胚期;(2)PZM-3相对于SOF而言要更适于水牛-猪种间ICSI胚胎的培养;(3)用甲基化酶抑制剂5-azacytidine(5-Aza C)对水牛精子进行处理可以在一定程度上提高水牛-猪种间ICSI卵的原核形成率,但并不能提高其发育潜力。综上,本研究可为进一步探索水牛-猪种间受精机制及精卵互作奠定基础。

体外受精生产犏牛胚胎与移植试验研究

旨在探讨牦牛和黄牛种间体外受精和胚胎发育效果。通过研究黄牛和牦牛卵母细胞体外成熟时间、卵母细胞质量、精子处理方式、受精卵培养体系及冷冻—解冻后胚胎活力。结果表明:随着体外培养时间的延长,卵母细胞第一极体排出率增加,A级卵母细胞培养24h第一极体的排出率显著高于B级和C级卵母细胞,但相同体外成熟时间和相同分级的黄牛和牦牛卵母细胞第一极体的排出率差异不显著。用Percoll液梯度离心法和BO液洗涤法分别处理牦牛精液和黄牛精液后通过种间体外受精,BO液洗涤法处理的精液受精后的卵裂率显著高于Per-coll液梯度离心法处理精液受精后的卵裂率,而2种方法处理精液受精后其囊胚率差异不显著。2种方法(黄牛♀×牦牛♂vs.牦牛♀×黄牛♂)生产的早期犏牛胚胎用输卵管上皮细胞共培养和卵丘细胞共培养其囊胚率和孵化囊胚率都显著高于SOF液培养,而3种培养方法培养的早期犏牛胚胎的卵裂率差异不显著。2种IVF胚胎冷冻解冻后形态正常胚(90.52%±5.94%vs.91.53%±7.34%)、24h的存活率(61.45%±8.44%vs.64.72%±11.82%)和48h的存活率(44.81%±6.21%vs.48.47%±10.04%)均差异不显著。将黄牛♀×牦牛♂IVF犏牛胚胎移植到自然发情4头受体黄牛和3头受体犏牛,4头牛怀孕并产犊,妊娠率为57.14%,平均妊娠期258d。