转基因水稻“科丰6号”实时荧光PCR定性定量检测方法研究

旨在建立转基因水稻"科丰6号"外源基因和边界序列的实时荧光PCR检测方法,为科丰6号定性定量检测提供技术支持。根据外源基因和边界序列信息,设计实时荧光PCR探针引物,优化体系,对不同转基因产品和不同转基因含量的"科丰6号"水稻进行检测。结果显示,所设计的引物探针具有很好的特异性,与其他转基因水稻品系、转基因玉米、转基因棉花、转基因番茄和非转基因水稻均无非特异性反应,对转基因水稻"科丰6号"的检测灵敏度达到0.01%。建立的科丰6号实时荧光PCR检测方法重复性好、灵敏度高,能够达到目前国际上转基因产品定量检测的标准,为该水稻品系的定性定量检测提供技术支持。

转基因大米中科丰6号和克螟稻的检测研究

本研究采用实时荧光定量PCR技术，建立了转科丰6号和克螟稻基因大米成分的快速检测方法。根据国内外文献查阅的科丰6号和克螟稻引物信息，确立了转科丰6号和克螟稻基因大米快速检测方法，并对其特异性、灵敏度和PCR扩增效率进行了验证。结果表明本研究建立的方法具有良好的特异性和PCR扩增效率，灵敏度可达到0．01％。

荧光RPA技术检测转基因水稻科丰6号

目前转基因作物检测通常使用PCR检测方法,PCR检测耗时较长且需要精密控制温度循环的仪器,不适于现场检测。本研究应用重组酶聚合酶等温扩增技术（recombinase ploymerase amplification,RPA）,根据转基因抗虫水稻科丰6号插入连接区整合序列设计筛选了一套可用于RPA检测的引物及探针组合,建立了转基因抗虫水稻科丰6号及其衍生品种转化体特异性荧光RPA检测方法。研究结果表明本方法可稳定特异检出样品中500个拷贝的靶标分子,利用实时荧光检测简化了检测程序,使检测可在10~20 min内完成,与常规PCR检测需要数小时相比极大地缩短了检测时间。使用锂电池驱动的便携式扩增检测仪,对于野外转基因现场检测具有极大的应用价值。