科博肽注射液异常毒性及过敏反应方法学研究

目的:重新建立科博肽注射液“异常毒性”和“过敏试验”检查项限值,为其安全用药提供参考。方法:通过试验计算本品LD50,LD1及其可信限,确定其异常毒性检查法的限值。测定本品豚鼠腹腔和静脉给药的无毒反应剂量,采用豚鼠过敏试验的方法设定腹腔致敏和静脉过敏激发的剂量限值。结果:原有质量标准中,异常毒性检查项的限值修改为“取本品,加氯化钠注射液制成每1 mL中含科博肽2μg的溶液”,过敏反应检查项的限值修改为2μg/mL,致敏每只用0.5 mL,激发每只用1 m L。结论:为减少临床不良反应和确保质量标准的可行性,科博肽注射液的异常毒性和过敏试验检查限值设定为2μg/mL和2μg/mL。

首批科博肽国家对照品的研制

目的:建立科博肽含量测定用首批国家对照品。方法:以眼镜蛇毒抗血清试验及紫外分光光度法进行鉴别,TOF-MS测定相对分子质量,反相高效液相 C_8柱、C_(18)柱及毛细管电泳分别测定纯度,凯氏定氮及 Lowry 法测定蛋白含量。结果:用建立的方法对科博肽的原料进行测定,符合国家药品标准的要求。结论:建立的质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于科博肽产品的常规检定。

复方科博肽镇痛作用的实验研究

目的研究复方科博肽的镇痛作用。方法用小白鼠醋酸扭体和热水浴甩尾模型及大白鼠热水浴甩尾模型对复方科博肽的镇痛作用进行评价。结果复方科博肽在给药后1h对三种动物模型均有很好的镇痛作用,强度高于科博肽、盐酸曲马多及酮络芬,作用较曲马多持久;连续用药15天,复方科博肽的镇痛作用没有下降,给予纳络酮,复方组小鼠无异常反应。结论复方科博肽镇痛作用强,起效快,作用持久,连续使用不会产生耐受和依赖;其各组分间具有协同作用。

科博肽含量测定方法研究

目的：建立高效液相色谱法测定科博肽含量的方法。方法：采用高效液相色谱法（HPLC），色谱条件为色谱柱Platisil ODS5μm，150mm×4．6mm，以0．1％三氟醋酸溶液为流动相A，三氟醋酸-50％乙腈（1：1000）为流动相B；柱温36℃；流速为1．0mL：min^-1；检测波长为214nm。洗脱初始状态流动相B为8％，保持4min，在12min内，流动相B增至100％，保持6min，再在6min内回到初始状态，保持10min，进样量为20μL。结果：科博肽检测浓度的线性范围为0．0775～0．62mg·mL^-1，（r=0．9999），平均回收率为99．62％，RSD=1．63％。结论：本方法操作简便、灵敏、准确、专属性强，可作为科博肽的含量测定方法。

科博肽与三种药物配伍使用的实验研究

目的评价科博肽与盐酸曲马多(TMD)、双氯芬酸钠(SD)及盐酸奈福泮(NFP)在药效、急性毒性方面的相互作用。方法测定科博肽与三种药物单用或配伍时对小鼠扭体的抑制作用;测定单用和配伍时对小鼠的急性毒性。结果科博肽与TMD,SD及NFP配伍后,对小鼠扭体的抑制作用增强(Q均>1.15);与TMD配伍后毒性增强(Q=3.57>1.15),与SD或NFP配伍后毒性降低(Q<0.85)。结论科博肽与TMD、SD、NFP具有药效协同作用;与TMD有毒性增强作用,与SD、NFP有毒性拮抗作用。

科博肽肠溶胶囊治疗晚期中、重度癌症疼痛疗效观察

目的 探讨科博肽肠溶胶囊对晚期癌症患者的止痛效果。 方法 每 6h口服科博肽肠溶胶囊2 80 μg/次 ,常规剂量每天 560 μg,在用药过程中根据疼痛缓解程度调整剂量由 2 80 μg～ 4 2 0 μg～ 560 μg递增。 结果 68例中、重度癌痛患者 ,显效 4 1例 ,有效 2 1例 ,无效 6例 ,总有效率 91 .2 % ,药物最小日剂量 2 80μg,最大日剂量为 84 0μg,所有患者均可耐受 ,未见有药物依赖性出现。 结论 科博肽肠溶胶囊作为控制中、重度癌痛的药物 ,其镇痛效果满意 ,副反应少 ,服用方便 ,安全 。

基于质谱分析技术的科博肽中脱酰胺杂质测定方法研究

脱酰胺是蛋白多肽类药物中最为常见的降解杂质来源之一。蛋白序列中谷氨酰胺和天冬酰胺经脱酰胺降解后会导致蛋白化学与生物学性质的改变。质谱分析技术可用于定量蛋白及多肽中的脱酰胺杂质,然而传统的基于胰蛋白酶的bottom-up策略,酶切过程中易人为引入脱酰胺,往往导致脱酰胺杂质的测定结果偏高。本研究通过对Glu-C酶酶解条件的优化,获得了在酸性条件下的最佳酶解条件,显著降低了酶切过程造成的人为引入脱酰胺的现象,鉴定了科博肽样品中的脱酰胺位点(N48)。并进一步通过方法学考察与不同方法的测定结果对比,验证了方法的专属性、重复性与准确性。本研究所建方法为科博肽及其相似蛋白多肽类生化药品中脱酰胺杂质的精准测定奠定了坚实的基础。

HPLC测定聚乙二醇修饰科博肽含量

目的测定聚乙二醇修饰科博肽含量。方法采用高效液相色谱法（HPLC），色谱条件为C8色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），0．1％三氟醋酸溶液为流动相A，三氟醋酸．80％乙腈（1：1000）为流动相B，流速为1mL·min^-1，检测波长为221nm。结果该法的线性范围为51．6～258μg·mL^-1，r=0．9994，回收率为99．9％，RSD=0．50％（n=9）。结论本法简便、准确、重复性好，可作为聚乙二醇修饰科博肽的含量测定方法。

HPCE与HPLC测定科博肽注射液含量的方法比较

目的系统地比较高效毛细管电泳法（HPCE）和高效液相色谱法（HPLC）在测定科博肽注射液含量方面的差异。方法HPCE分离条件为：未涂层毛细管柱（50μm×40 cm,有效长度30 cm）,运行缓冲液为0.1 mol·L^-1磷酸盐缓冲液（p H 2.5）,分离电压20 k V,柱温25℃,检测波长200 nm;HPLC分离条件为：Aeris PEPTIDE XB-C18柱（4.6 mm×150 mm,3.6μm）,柱温30℃,流速0.9 m L·min^-1,检测波长200 nm,流动相A：0.1%三氟乙酸-水、流动相B：0.1%三氟乙酸-乙腈,梯度洗脱。结果科博肽在HPLC和HPCE各自的分离条件下进样浓度分别在17.33-138.60μg·m L^-1、1.08-138.60μg·m L^-1内表现出良好的线性关系（r均为0.999 7）,平均加样加收率分别为100.3%和99.3%,RSD分别为0.7%和1.2%。结论 HPCE与HPLC均可用于科博肽注射液的含量测定,但HPCE在使用成本、分离时间、检出限等方面更具有优势。