液相色谱-质谱联用技术分析秦巴硒菇提取物活性成分及其治疗慢性粒细胞白血病的网络药理学研究

目的 利用液相色谱质谱联用和网络药理学、分子对接技术探讨秦巴硒菇提取物治疗慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)的潜在活性靶点及相关信号通路,并通过体外实验进一步验证。方法 应用液相色谱质谱分析秦巴硒菇提取物的活性成分,通过Swiss Target Prediction数据库预测药物靶点;从GeneCards、DisGeNET数据库获取CML的疾病靶点。筛选出药物和CML的共同靶点,通过STRING数据库进行蛋白质互作分析,利用Cytoscape软件构建蛋白互作网络图,并通过DAVID数据库进行GO和KEGG通路富集分析。分别应用DockThor和Pymol进行分子对接及可视化处理。利用CCK-8法测定秦巴硒菇提取物对K562细胞的增殖抑制作用,Western blot验证其对相关蛋白及磷酸化水平的影响。结果 秦巴硒菇提取物活性成分共126种,药物和疾病共同靶点172个;KEGG通路分析结果显示PI3K/Akt/mTOR信号通路可能在治疗CML疾病中起到关键作用。秦巴硒菇提取物在K562细胞中24、48 h的IC50分别为1.86、1.48 g·L^(-1),秦巴硒菇提取物可抑制PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平。结论 秦巴硒菇提取物可通过多成分、多通路、多靶点、多种方式协同作用治疗CML,其作用机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对白血病细胞K562/ADR多药耐药性的逆转作用

【目的】探讨中药秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对慢性髓系白血病耐药细胞K562/ADR耐药性的逆转作用。【方法】采用CCK-8法检测细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率、周期及细胞内药物蓄积情况,rt-PCR和Western blot法检测耐药及凋亡相关基因/蛋白表达,免疫荧光法观察K562/ADR细胞膜蛋白P-gp表达。【结果】不同浓度的FA-2-b-β对K562/ADR耐药细胞具有增殖抑制作用,其半数抑制浓度为(3.42±0.395)mg/mL,并可将K562细胞周期阻滞在G_(0)/G_(1)期,K562/ADR细胞阻滞于G_(2)/M期,且胞内荧光显示药物蓄积量增多。Western-blot及rt-PCR示FA-2-b-β能够明显下调耐药基因p65、MDR1的表达,上调基因p53、IκB-α、Bax的表达。【结论】秦巴硒菇提取物FA-2-b-β抑制K562/ADR细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过调控NF-κB信号通路实现的。

秦巴硒菇提取物FA-2-b-β介导Wnt信号通路逆转急性T淋巴细胞白血病细胞多药耐药性的机制研究

目的:探讨秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对急性T淋巴细胞白血病细胞的逆转耐药作用机制。方法:采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡、线粒体膜电位、细胞周期以及胞内罗丹明蓄积情况;qPCR和Western blot检测凋亡相关基因与蛋白表达;免疫荧光观察膜表面蛋白MDR1表达。结果:不同浓度秦巴硒菇提取物FA-2-b-β能够显著抑制CCRF-CEM及CEM/C1细胞增殖(P<0.05),促进其凋亡,并调控CCRF-CEM细胞阻滞于S期、CEM/C1细胞阻滞于G_(0)/G_(1)期。Western blot及qPCR检测结果显示,FA-2-b-β可抑制ABCB1、ABCG_(2)、CTNNB、MYC、BCL-2表达,并上调BAX表达。另外,FA-2-b-β可逆转CEM/C1耐药株的耐药特性,使得其线粒体膜电位下降,细胞内罗丹明蓄积明显增多,膜表面蛋白MDR1表达减弱。加入ICG_(0)01后,该过程进一步加强。结论:秦巴硒菇提取物FA-2-b-β通过抑制细胞增殖促进凋亡、调控细胞周期、减少线粒体供能及下调MDR1蛋白表达等方式逆转CEM/C1细胞的耐药性,其机制可能通过调控Wnt信号通路实现。

秦巴硒菇提取物FA-2-b-β诱导CD34^+CD38^--KG1a白血病干细胞凋亡及其相关机制

目的:探讨秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对CD34^+CD38^--KG1a白血病干细胞凋亡的诱导及其相关机制。方法:用免疫磁珠分选法从KG1a细胞株中分选出CD34^+CD38^--KG1a干细胞;不同浓度的FA-2-b-β(1.2-2.4mg/ml)体外干预KG1a干细胞24、48 h,应用CCK-8检测其增殖能力变化;流式细胞术检测FA-2-b-β干预KG1a干细胞后各组细胞凋亡比例;采用Western blot检测BAX、BCL-2、Casepase-3及Cyclin D1蛋白表达。结果:经过免疫磁珠分选后KG1a干细胞比例为(95.35±2.63)%。FA-2-b-β对KG1a干细胞的增殖具有明显抑制作用,呈时间和剂量依赖性(24 h,r=0.943;48 h,r=0.976)。流式细胞术检测显示,不同浓度FA-2-b-β作用KG1a干细胞24 h时,随药物浓度增加凋亡率也随之增高。Western blot检测显示,凋亡相关蛋白BAX和Casepase-3表达上调,BCL-2和Cyclin D1的表达下调。结论:秦巴硒菇提取物FA-2-b-β能够调控KG1a干细胞的增殖和凋亡,其抗肿瘤效应可能通过调控线粒体介导的凋亡途径实现。

硒化秦巴硒菇多糖对A549细胞增殖的抑制作用

【目的】初步探讨硒化秦巴硒菇多糖(Se-ABM)对人非小细胞肺癌细胞(A549)DNA损伤及细胞周期阻滞的分子机制。【方法】体外培养人结肠癌细胞(HT29)、人肝癌细胞(HepG2)、人宫颈癌细胞(HeLa)和非小细胞肺癌细胞(A549),用Se-ABM和拓扑替康处理(Topotecan)A549细胞,分别用CCK-8试验,流式细胞分析和免疫印迹试验(Western-blot,WB)检测Se-ABM对A549细胞的抗肿瘤作用。【结果】Se-ABM能够抑制HT29、HepG2、HeLa和A549细胞的增殖,其中对A549细胞的增殖抑制最为明显。细胞流式试验表明,Se-ABM在G2/M期阻滞A549细胞,并呈浓度依赖性。Western-blot试验结果显示,Se-ABM能够使A549细胞中DNA损伤相关因子毛细血管扩张性共济失调突变基因(ataxia telangiectasia mutated gene,ATM)、毛细血管扩张性共济失调相关基因(ataxia-telangiectasia related gene,ATR)、抑癌基因(p53)、磷酸化组蛋白(γ-H2AX)的表达量明显升高,同时诱导细胞周期阻滞在G2/M期。此外,在A549细胞中,Se-ABM能够调控凋亡相关蛋白的表达,促使促凋亡因子(BAX)、乳腺癌1号基因(BRCA1)、抗凋亡因子(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3,Cas 3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase 9,Cas 9)的表达发生明显变化。【结论】Se-ABM在体外能够明显诱导DNA损伤,从而导致细胞凋亡,Se-ABM具有潜在的抑制A549细胞增殖的效果。

秦巴硒菇提取物硒蛋白多糖荷瘤药物血清促慢性红白血病细胞株K562凋亡的实验研究

目的:探讨秦巴硒菇提取物硒蛋白多糖制备的含药血清对慢性红白血病细胞株(K 562)凋亡的影响。方法:建立荷瘤小鼠模型,采用血清药理学方法制备硒蛋白多糖含药血清,常规培养K 562细胞。通过甲基噻唑基四唑(M TT)比色法检测硒蛋白多糖含药血清对肿瘤生长的抑制率;用形态学和DNA电泳技术观察细胞凋亡的发生;用比色法检测凋亡相关基因caspase 3的表达。结果:秦巴硒菇提取物硒蛋白多糖含药血清可显著抑制K 562细胞生长,且呈时间剂量依赖性。形态学、DNA电泳结果均证实有凋亡发生,与空白血清组比较,caspase 3基因上调明显。结论:秦巴硒菇提取物硒蛋白多糖含药血清可促进K 562细胞凋亡,其机制可能与上调caspase 3基因有关。

秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对人多发性骨髓瘤细胞凋亡的影响

目的探讨秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对人骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡的作用。方法利用MTT比色法检测不同药物浓度(0.6、1.2、1.8、2.4mg/mL)对RPMI8226细胞的抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blotting检测BCL-2和BAX蛋白的表达。结果 FA-2-b-β对RPMI8226细胞的增殖具有明显抑制作用,呈时间和剂量依赖性。流式细胞术检测显示,不同浓度FA-2-b-β作用于RPMI8226细胞48 h时,随药物浓度增加凋亡率也增高。Western blotting检测显示,凋亡相关蛋白BAX表达上调,BCL-2表达下调。结论 FA-2-b-β能够抑制多发性骨髓瘤细胞增殖及诱导其凋亡,其机制可能与BCL-2/BAX表达调控有关。

秦巴硒菇提取物对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖与凋亡的调节作用的实验研究

目的探究秦巴硒菇提取物对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及机制。方法用不同浓度秦巴硒菇提取物处理细胞,MTT检测细胞活性,流式检测细胞凋亡,用PCR和Westernblot检测P53/Caspase通路蛋白表达情况。结果根据预实验结果,选择秦巴硒菇提取物(0,0.5,1.0,2.0,4.0μg/mL)作用24h、48h以及72h后对肝癌SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,并随时间和浓度的作用梯度增加抑制作用也明显增强。根据流式细胞分析检测结果显示,不同浓度秦巴硒菇提取物作用于人肝癌SMMC-7721细胞24h后细胞凋亡率明显高于对照组(0μg/mL),随秦巴硒菇提取物浓度增加细胞凋亡率明显增高。另外递增浓度的秦巴硒菇提取物可促进人肝癌SMMC-7721细胞通路蛋白P53、Caspase3及Caspase9蛋白的表达。结论秦巴硒菇提取物能抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖从而促进细胞凋亡,其机制可能与诱导P53/Caspase信号通路激活有关。

秦巴硒菇提取物对NCG小鼠慢性髓系白血病模型体内抗肿瘤的初步研究

目的:验证秦巴硒菇提取物酸性RNA蛋白复合物FA-2-b-β诱导肿瘤细胞凋亡及免疫调节的作用。方法:采用CCK-8法计算FA-2-b-β对K562细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。通过尾静脉/皮下注射K562细胞构建慢性髓系白血病模型,观察小鼠成瘤负荷,每天2次观察小鼠一般情况,定期检测小鼠外周血细胞数。RT-q PCR及Western blot检测FA-2-b-β作用于白血病小鼠后相关凋亡基因/蛋白的表达;免疫荧光和免疫组织化学检测CD3、CD4、CD8的表达。结果:FA-2-b-β抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,模型小鼠成瘤率100%,药物治疗21天后,与对照组相比,外周血白细胞数明显升高,血红蛋白降低;免疫荧光及免疫组化结果显示CD3、CD4、CD8阳性,比例失调,治疗后各项指标有所改善。结论:初步验证秦巴硒菇提取物FA-2-b-β具有诱导肿瘤细胞凋亡及免疫调节作用。

我国西部开发出秦巴硒菇

最近,陕西省安康市紫阳县成功开发出富含硒的绿色食用菌——秦巴硒菇。紫阳县位于秦岭和大巴山麓,汉水之滨,是中国第二大富硒区,土壤及农副产品废料中硒含量丰富。自2000年3月起,在中科院专业技术人员的指导下,这个县开始进行秦巴硒菇大面积规范栽培,首次利用富硒的天然原料桑枝、

秦巴硒菇提取物联合多柔比星抗白血病K562/ADR细胞多药耐药的机制研究

目的:探讨秦巴硒菇提取物FA-2-b-β联合多柔比星(Adriamycin, ADR)抗白血病K562/ADR细胞多药耐药的协同抗肿瘤机制。方法:通过转录组测序分析筛选白血病敏感细胞K562和耐药细胞K562/ADR中的差异表达基因,分析可能的信号通路;CCK-8法检测K562/ADR细胞的耐药表型及FA-2-b-β对多柔比星的增敏作用;流式细胞术检测不同药物干预后各组细胞的凋亡比例、细胞内多柔比星的荧光强度变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测耐药蛋白、凋亡相关蛋白以及PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:与敏感细胞K562相比,K562/ADR细胞的耐药性明显增加,耐药倍数为26.88倍。试验结果表明,与空白对照组相比,FA-2-b-β协同多柔比星对K562/ADR细胞的增殖有明显抑制作用,可显著诱导K562/ADR细胞凋亡,并提高细胞内多柔比星的荧光强度;上调促凋亡蛋白BAD的表达,明显下调耐药蛋白P-gp、抗凋亡蛋白BCL-XL以及p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白的表达(P<0.05)。结论:秦巴硒菇提取物FA-2-b-β联合多柔比星有协同抗肿瘤作用,可能是通过促进K562/ADR细胞凋亡、减少细胞内化疗药物外排并抑制耐药蛋白而发挥作用,其作用机制可能与调控PI3K/AKT/mTOR通路有关。

秦巴硒菇提取物FA-2-b-β对伯基特淋巴瘤Raji细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制

目的观察秦巴硒菇提取物酸性RNA蛋白复合物FA-2-b-β对伯基特淋巴瘤细胞株Raji增殖及凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法体外培养Raji细胞,分别加入浓度为0.9、1.5、2.1、2.7 mg/mL的FA-2-b-β,对照组加入等量培养基。培养24、48、72 h后收集各组细胞,采用CCK-8法检测FA-2-b-β对Raji细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞β-catenin、c-myc、cyclin D1、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果FA-2-b-β能抑制Raji细胞增殖,且呈浓度-时间依赖性(P<0.01);给药48 h后,各浓度FA-2-b-β组细胞凋亡率较对照组均显著上升,且呈剂量依赖性(P<0.05);各浓度FA-2-b-β组细胞β-catenin、c-myc、cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著低于对照组,且呈剂量依赖性(P<0.05),Bax蛋白表达水平显著高于对照组,同样呈剂量依赖性(P<0.05),Bax/Bcl-2比值增加。结论FA-2-b-β呈时间-剂量依赖性诱导伯基特淋巴瘤凋亡,可能与Wnt/β-catenin信号通路相关。

秦巴硒菇提取物(FA-2-b-β)对慢性髓系白血病原代细胞凋亡的影响

目的探讨中药秦巴硒菇提取物(酸性RNA蛋白复合物FA-2-b-β)对人慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)原代细胞系凋亡的影响。方法采用CCK8法检测不同时间段(24,48,72 h)FA-2-b-β作用于CML原代细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率和周期;蛋白印迹法测定相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、MET、CD44和β-catenin的表达。结果FA-2-b-β抑制CML原代细胞增殖,并呈时间、浓度依赖性。FA-2-b-β处理后,CML原代细胞凋亡率明显升高,促凋亡蛋白Bax表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2、MET、CD44和β-catenin表达降低。结论秦巴硒菇提取物通过下调凋亡相关蛋白抑制CML原代细胞增殖并诱导细胞凋亡,表现出较强的体外抗白血病作用。

西部特色农业奇葩秦巴硒菇

秦巴硒菇(Agaricus blazei),原产于巴西的一种无名菇,1965年日本引种并种植成功。从2000年初开始,在中科院的专业技术人员指导下,在陕西省安康市紫阳县进行了大面积规范栽培,首次利用富硒天然原料桑枝残叶,稻、麦、玉米等秸秆,蚕、牛、羊等畜禽粪农副产品废料,不施用化肥,

FA-2-b-β对慢性髓系白血病原代细胞的增殖抑制作用及其相关机制

目的:探讨秦巴硒菇提取物酸性RNA蛋白复合物(FA-2-b-β)抗慢性髓系白血病的效果及机制。方法:应用CCK-8法检测不同浓度FA-2-b-β对初诊慢性髓系白血病患者原代细胞增殖抑制作用;通过尾静脉注射原代白血病细胞建立慢性髓系白血病小鼠模型,观察模型小鼠生存期、血细胞数、体重变化;采用免疫荧光、免疫组织化学法、RT-qPCR及Western blot法检测caspase3信号通路相关凋亡基因和蛋白的表达。结果:体外实验显示,各药物浓度组中原代细胞增殖抑制率升高,且呈浓度时间依赖性(r24=0.9082,r48=0.9442,r72=0.9546)。组间比较差异具有统计学意义。体内实验显示,实验组(FA-2-b-β)和阳性对照组(伊马替尼)模型小鼠生存期均延长,并且血细胞数升高及体重恢复至正常,尽管白细胞数仍高;BAX、Caspase-3基因和蛋白表达上调,BCL-2、Cytochrome C、caspase 8、caspase 9、BCL/ABL基因和蛋白表达下降。结论:FA-2-b-β诱导慢性髓系白血病原代细胞凋亡,可延长慢性髓系白血病模型小鼠的生存期,其机制可能与caspase-3信号通路相关凋亡基因和蛋白有关。