高效液相色谱法测定化妆品中羟基积雪草苷和积雪草苷的含量

建立了一种使用高效液相色谱测定化妆品中羟基积雪草苷和积雪草苷含量的方法。样品经提取液超声提取后,用Acutfex PA-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm×5μm)分离,以体积比2:2:6的甲醇-乙腈-水作为流动相等度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温35℃,检测波长205 nm。采用外标法测定,结果表明,积雪草苷和羟基积雪草苷在质量浓度5~100μg/mL内线性关系良好,方法的检出限为质量分数0.0015%,定量限为质量分数0.005%。在不同类型的空白化妆品(水类、乳类、膏霜类)中进行加标回收试验,方法的回收率为82.8%~106%,相对标准偏差为0.94%~4.28%。该方法前处理简单,分离效率高,重复性好,准确度和精密度高,适用于化妆品中积雪草苷和羟基积雪草苷的测定。

积雪草苷抑制伊马替尼耐药的K562细胞的生长和迁移

目的研究积雪草苷对慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)细胞增殖、迁移和周期停滞的作用,并且探讨了其对GATA-1表达的调节。方法以CML细胞系K562、抗伊马替尼(imatinib,IM)K562细胞(K562r)和人源CML细胞为模型,CCK-8测定不同浓度积雪草苷对3种细胞活力的影响。选择0、25、50、100μmol/L积雪草苷处理K562r细胞,CFSE标记测定细胞增殖,Transwell测定细胞迁移,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹检测cyclin A、CDK2、CDK4、cyclin D1、Ki67、PCNA、VEGF、MMP-9和MMP-14蛋白水平。结果与对照组比较,积雪草苷处理可显著抑制K562r细胞增殖和迁移,并促进其细胞周期阻滞。同时我们发现积雪草苷处理可显著上调K562r细胞中GATA-1水平。结论积雪草苷能够抑制K562r细胞增殖、迁移并诱导其细胞周期阻滞,其机制可能与GATA-1的表达上调相关。

积雪草苷对离体大鼠胸主动脉的舒张作用及其机制

目的研究积雪草苷降血压和对大鼠胸主动脉的舒张作用及机制。方法将SD大鼠分为正常对照组、积雪草苷低剂量组(50 mg/kg)和积雪草苷高剂量组(100 mg/kg),6只/组,治疗组每日予以积雪草苷对应剂量灌胃处理,分别在给药前1 d、给药第8天和给药第15天测大鼠尾动脉收缩压,HE染色评估大鼠胸主动脉血管组织形态变化。取大鼠胸主动脉血管环,以舒张血管百分比为指标,考察不同浓度积雪草苷对基础状态血管环、去甲肾上腺素(NE,1×10-6 mol/L)及氯化钾(KCl,60 mmol/L)收缩的内皮保留或去内皮胸主动脉血管环的舒张作用;对内皮保留的血管环,分别以左旋硝基精氨酸甲酯(0.1 mmol/L)、吲哚美辛(1×10-5 mol/L)、锌原卟啉Ⅸ(10µmol/L)和6种钾离子通道阻滞剂:四乙基氯化铵(5 mmol/L)、格列苯脲(1×10-5 mol/L)、氯化钡(0.1 mmol/L)、Iberiotoxin(0.1μmol/L)、4-氨基吡啶(0.1 mmol/L)、TASK-1-IN-1(1×10-5 mol/L)预孵育血管环,加NE(1×10-6 mol/L)预收缩,考察不同浓度积雪草苷对血管环的舒张作用;以血管收缩百分率为指标,在无钙条件下,分别以KCl(60 mmol/L)、NE(1×10-6 mol/L)刺激血管,再分别累积加入CaCl2(0.1、0.3、1、3、10 mmol/L),考察积雪草苷对CaCl2导致外钙内流及内钙释放引起的血管收缩的影响。结果与正常对照组相比,积雪草苷50和100 mg/kg组大鼠收缩压降低(P<0.05),胸主动脉组织形态未见明显改变。累积浓度积雪草苷对静息状态下的胸主动脉内皮保留的血管环无明显收缩和舒张作用。积雪草苷(30、50、100μmol/L)对KCl和NE提前收缩的血管环具有舒张作用(P<0.01),积雪草苷100 mg/kg浓度组对去内皮和内皮保留的NE预收缩的血管舒张有差异(P<0.05)。经吲哚美辛、ZnPPⅨ、氯化钡、格列本脲、TASK-1-IN-1和4-氨基吡啶预孵育后,不同浓度的积雪草苷对经NE预收缩的血管环无显著影响(P>0.05),四乙基铵、Iberiotoxin和左旋硝基精氨酸甲酯均可抑制积雪草苷对NE预收缩血管环的舒张作用(P<0.05)。在无钙条件下,血管环经KCl、NE作用,积雪草苷能抑制CaCl2导致外钙内流、内钙释放引起的收缩(P<0.01)。结论积雪草苷通过介导高电导钙激活性钾离子通道开放、促进内皮细胞一氧化氮释放并调节钙离子内外流诱导大鼠胸主动脉舒张,从而降低大鼠收缩压。

羟基积雪草苷通过激活Nrf2-HO-1通路发挥抗衰老及皮肤修复作用

考察羟基积雪草苷(MA)对D-半乳糖诱导的皮肤衰老小鼠的抗衰老及皮肤修复作用。将小鼠分为6组(n=12):正常组(N)、模型组(M)、低、中、高剂量MA组(L-MA,M-MA,H-MA)和高剂量MA+Nrf2抑制剂ML385组(H-MA+ML385)。分别检测了各组小鼠的体重、皮肤含水量、皮肤组织中的抗氧化指标(SOD、CAT、GSH-Px和MDA)、HYP和HA水平。采用HE染色评价了小鼠皮肤组织结构。通过RT-qPCR检测了小鼠皮肤组织中MMP-1、MMP-3、Nrf2、Keap1和HO-1的转录水平。通过Western blotting检测了小鼠皮肤组织中Nrf2、Keap1和HO-1的蛋白表达水平。结果显示,与M组比较,L-MA组、M-MA组和H-MA组小鼠皮肤含水量升高,表皮和真皮厚度增加,皮肤结构明显改善,SOD、CAT和GSH-Px水平升高,MDA水平降低,HYP和HA水平升高,MMP-1和MMP-3 mRNA相对表达量降低,Nrf2和HO-1的mRNA和蛋白相对表达量升高,Keap1 mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05)。ML385部分减弱了MA对Nrf2-HO-1通路的激活效果,并减弱了MA的抗衰老和皮肤修复作用(P<0.05)。本研究表明,MA具有良好的抗衰老和皮肤修复作用,其机制与激活Nrf2-HO-1通路有关。

积雪草苷在高糖诱导人角膜上皮细胞损伤修复中的作用及机制研究

目的探究积雪草苷(AS)对高糖诱导的人角膜上皮细胞(HCEC)损伤修复的作用及机制。方法体外培养HCEC;CCK-8法检测不同浓度的葡萄糖及AS对HCEC细胞增殖活性的影响,筛选出HCEC最佳高糖诱导浓度(150 mmol·L^(-1))及AS干预浓度(20μmol·L^(-1))进行后续实验;实验分组:空白对照组(NC组;仅加入培养基DMEM)、高糖组(HG组;添加150 mmol·L^(-1)葡萄糖)、AS组(添加20μmol·L^(-1)的AS)、高糖+AS组(HG+AS组;添加150 mmol·L^(-1)葡萄糖及20μmol·L^(-1)的AS)。CCK-8法检测各组细胞培养24 h、48 h及72 h增殖活性;细胞划痕实验检测各组细胞培养24 h迁移能力;TUNEL染色实验检测各组细胞凋亡率;RT-PCR检测各组细胞中Wnt1、β-catenin、CyclinD1 mRNA的表达;Western blot检测各组细胞中Wnt1、β-catenin、CyclinD1蛋白表达。结果与NC组比较,HG组细胞培养24 h、48 h及72 h时增殖活性均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.001);与HG组比较,HG+AS组细胞培养24 h、48 h及72 h时增殖活性均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。与NC组比较,HG组细胞凋亡率明显升高,差异有统计学意义(P<0.001);与HG组比较,HG+AS组细胞凋亡率明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与NC组比较,HG组细胞迁移能力明显被抑制,差异有统计学意义(P<0.0001);与HG组比较,HG+AS组细胞迁移能力明显增强,差异有统计学意义(P<0.0001)。与NC组比较,HG组细胞中Wnt1、β-catenin及CyclinD1 mRNA表达均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与HG组比较,HG+AS组细胞中Wnt1、β-catenin及CyclinD1 mRNA表达均明显升高,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。与NC组比较,HG组细胞中Wnt1、β-catenin及CyclinD1蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.01);与HG组比较,HG+AS组细胞中Wnt1、β-catenin及CyclinD1蛋白表达均明显升高,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论AS可以缓解因高糖导致的HCEC损伤,促进细胞增殖和迁移,抑制细胞凋亡,这种作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的。

羟基积雪草苷通过抑制NF-κB/NLRP3细胞焦亡通路缓解间质性膀胱炎

目的 通过NF-κB/NLRP3介导的细胞焦亡途径探究羟基积雪草苷对间质性膀胱炎的相关作用。方法 通过脂多糖建立体外间质性膀胱炎细胞模型,使用不同浓度的羟基积雪草苷处理,采用MTT、单层细胞划痕伤口实验、实时荧光定量PCR和蛋白印迹实验检测羟基积雪草苷对SV-HUC-1细胞间质性膀胱炎体外模型中细胞活力,伤口愈合能力和NF-κB/NLRP3通路介导的细胞焦亡相关蛋白和mRNA的表达的作用。结果 体外细胞实验结果显示,与模型组相比,羟基积雪草苷能改善细胞活力和伤口愈合能力,并抑制细胞模型中NF-κB/NLRP3通路介导的细胞焦亡相关蛋白和mRNA的表达。结论 在脂多糖诱导的SV-HUC-1细胞间质性膀胱炎体外模型中,羟基积雪草苷可通过抑制NF-κB/NLRP3通路介导的细胞焦亡从而发挥对膀胱上皮细胞的保护作用。

积雪草苷调节JAK/STAT信号通路对糖尿病肾病大鼠炎症反应的影响

目的探讨积雪草苷(ASI)调节Janus激酶(JAK)/细胞信号转导转录因子(STAT)信号通路对糖尿病肾病(DN)大鼠炎症反应的影响。方法30只SD大鼠随机取6只作为对照组(NC组),其余大鼠使用链脲佐菌素(STZ)构建DN大鼠模型,并随机均分为DN组、ASI组(45 mg/kg)、JAK2/STAT3信号通路激活剂Coumermycin A1(C-A1)组(100μg/kg)及ASI+C-A1组(45 mg/kg ASI+100μg/kg C-A1),NC组、DN组给予等量生理盐水,1次/d,连续2周;药物处理结束12 h,使用全自动生化分析仪测定肌酐、白蛋白和尿素水平,ELISA法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平,HE染色检测肾脏组织病理变化,TUNEL染色检测肾脏细胞凋亡情况,Western blot检测JAK2/STAT3通路相关蛋白表达。结果与NC组相比,DN组大鼠出现肾小球萎缩、肾小球类囊体严重增生、肾小管上皮分离、基底膜暴露、炎性细胞浸润和间质性水肿等症状;DN组较NC组IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA水平、肌酐、白蛋白、尿素、细胞凋亡率、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白水平显著升高(P<0.05),SOD水平显著降低(P<0.05);与DN组相比,ASI组肾组织病变严重程度有所缓解,炎性细胞浸润现象减轻,IL-1β、IL-6、TNF-α、肌酐、白蛋白、尿素、MDA、细胞凋亡率、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白水平降低,SOD水平升高(P<0.05);C-A1减弱了ASI对DN大鼠炎症损伤的改善效果。结论ASI可能通过下调JAK2/STAT3信号通路抑制DN大鼠炎症反应。

口腔清洁护理用品 牙膏中积雪草苷和羟基积雪草苷含量的测定高效液相色谱法(T/COCIA 27-2024)

前言本文件按照《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则(GB/T 1.1-2020)》的规定起草。本文件由中国口腔清洁护理用品工业协会提出。本文件由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会(SAC/TC492/SC1)归口。本文件起草单位:无限极(中国)有限公司、重庆登康口腔护理用品股份有限公司、浙江方圆检测集团股份有限公司。本文件主要起草人:高艳、陈杰锋、肖蕾、管弋铦、杨铭、王晨蕾。本文件为首次发布。

积雪草苷应用于漱口水中的护龈舒缓作用评估

将水溶性的积雪草苷按0.3%的加量添加到无其他活性功效组分的基础漱口水产品中,可制备得到稳定的口感良好的漱口水产品。经口腔黏膜上皮模型体外模拟试验表明,含积雪草苷0.3%的漱口水在浓度为10%时能明显降低炎症因子IL-6和IL-8的含量,表明积雪草苷应用于漱口水中有护龈舒缓作用。

MTT法检测积雪草苷脂质体凝胶剂对B16F10小鼠黑色素细胞活性的影响

目的探讨积雪草苷脂质体凝胶剂对B16F10小鼠黑色素细胞活性的影响。方法体外培养B16F10细胞,以不同浓度积雪草苷、积雪草苷普通凝胶剂、积雪草苷脂质体凝胶剂进行孵育,以四甲基偶氮唑盐法(MTT法)测定各组细胞的活力。结果积雪草苷、积雪草苷普通凝胶剂和积雪草苷脂质体凝胶剂均显示出体外降低B16F10小鼠黑色素细胞活力的作用;积雪草脂质体凝胶剂降低B16F10小鼠黑色素细胞活力的作用明显高于同等药物浓度的积雪草苷普通凝胶剂和相当药物浓度的积雪草苷。结论脂质体凝胶剂剂型有利于药物发挥疗效,积雪草苷脂质体凝胶剂能降低B16F10小鼠黑色素细胞活性,有望应用于治疗皮肤黑色素瘤。

LED光质对积雪草生长及总苷含量的影响

通过研究LED光质对水培积雪草生长和生理指标的影响,探索积雪草在植物工厂中适宜的光质,为积雪草在植物工厂水培过程中的光环境适应机制和高产优质提供理论依据。本试验以未生根的积雪草幼苗为材料进行水培,利用植物工厂的LED人工光源,设计蓝光(B)、红蓝光组合(R∶B=2∶8、R∶B=3∶7、R∶B=5∶5、R∶B=7∶3、R∶B=8∶2)、红光(R)等7种不同光质的处理,测定各处理水培积雪草的生长指标、光合色素及有效成分的含量和产量。试验结果表明:R有利于水培积雪草的分枝数、叶片数、叶面积、匍匐茎、全株鲜质量和全株干质量;R∶B=2∶8、R∶B=3∶7、B有利于水培积雪草的叶绿素a、总叶绿素和类胡萝卜素的积累;R∶B=7∶3有利于积雪草苷和羟基积雪草苷含量的形成与积累;R有利于积雪草总苷产量积累。

积雪草苷调控基质金属蛋白酶-9减轻川崎病血管损伤的机制研究

目的探讨积雪草苷对川崎病血管损伤的影响及其可能作用机制。方法采用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人冠状动脉血管内皮细胞建立川崎病血管损伤模型,分为7组:con组、TNF-α组、TNF-α+低积雪草苷组、TNF-α+中积雪草苷组、TNF-α+高积雪草苷组、TNF-α+积雪草苷+pcDNA组、TNF-α+积雪草苷+pcDNA-MMP-9组;CCK-8法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;qRT-PCR检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达水平;ELISA法检测IL-6、IL-1的水平;Western blot法检测Bax、Bcl-2、MMP-9蛋白表达量。结果与con组比较,TNF-α组细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高,IL-6、IL-1的水平升高,MMP-9 mRNA及蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与TNF-α组比较,TNF-α+低积雪草苷组、TNF-α+中积雪草苷组、TNF-α+高积雪草苷组细胞凋亡率和Bax蛋白水平降低,IL-6、IL-1的水平降低,MMP-9 mRNA及蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且呈剂量依赖性;与TNF-α+积雪草苷+pcDNA组比较,TNF-α+积雪草苷+pcDNA-MMP-9组MMP-9 mRNA及蛋白水平升高,细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高,IL-6、IL-1的水平升高,Bcl-2蛋白水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论积雪草苷可通过下调MMP-9表达而抑制TNF-α诱导的血管内皮细胞凋亡及炎症反应从而减轻川崎病血管损伤。

HPLC-ELSD法测定积雪草中积雪草苷及羟基积雪草苷的含量

积雪草提取物通常被用作化妆品原料,有美白、抗氧化等功效,发挥此功效的主要物质有积雪草苷、羟基积雪草苷。采用高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)技术,建立了测定积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷含量的方法。选用Unitary C18色谱柱(4.6×250 mm,5μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速1 mL/min,柱温为30℃,采用Agilent 1260 InfinityⅡ蒸发光散射检测器(漂移管温度70℃,载气流速1.6 L/min)。研究表明,积雪草苷和羟基积雪草苷质量浓度分别在100~702 mg/L,105~738 mg/L范围内,峰面积与质量浓度线性关系良好,相关系数分别为0.9996和0.9997。积雪草苷和羟基积雪草苷平均加样回收率分别为101.20%,98.30%。相对标准偏差(RSD)均在3%以内。方法简单,准确度高,分离效果好,干扰少,可用于积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷的含量测定。

积雪草苷通过Nrf2/HO-1信号通路对创伤脓毒血症大鼠肾损伤的保护作用研究

目的探究积雪草苷通过核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶1(hemeoxygenase-1,HO-1)信号通路对创伤引起的脓毒血症大鼠肾损伤的影响以及对氧化应激的调控作用。方法将60只SD雄性大鼠随机分为对照组(n=10)和脓毒血症组(n=50)。脓毒血症组通过盲肠结扎建立动物模型,造模成功后随机均分为模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性组。低剂量组、中剂量组、高剂量组灌胃积雪草苷(1.0、2.5、5.0 mg/mL);阳性组注射氨苄西林钠(200 mg/kg);模型组与对照组灌胃生理盐水。记录大鼠的生存时间;取样观察肾组织病理形态;检测血清中血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平以及肾组织中Nrf2和HO-1蛋白含量。结果与对照组比较,模型组生存时间更短(P<0.05),肾组织炎症反应明显,Scr、BUN、MDA水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),Nrf2、HO-1蛋白表达水平降低(P<0.05);与模型组相比,积雪草苷治疗各组及阳性组生存时间延长(P<0.05),肾组织炎症减轻,Scr、BUN、MDA水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05),Nrf2、HO-1蛋白表达水平升高(P<0.05);积雪草苷治疗组上述指标呈现剂量依赖性,其中高剂量组与模型组对比最为明显(P<0.05);高剂量组BUN和MDA水平较阳性组更低(P<0.05),HO-1蛋白表达水平较阳性组更高(P<0.05)。结论积雪草苷可能通过Nrf2/HO-1通路,抑制氧化应激反应,改善脓毒血症大鼠的肾损伤状况,其作用呈现剂量依赖性,且较抗生素治疗有一定的优势。

积雪草苷对Ⅱ型心肾综合征小鼠肾脏保护作用及其机制

目的探讨积雪草苷(ASI)通过跨膜受体蛋白Notch1/神经调节蛋白-1(Notch1/NRG1)信号调控自噬对Ⅱ型心肾综合征(CRS)小鼠肾脏的保护作用及机制。方法将100只8周龄C57/BL6小鼠随机分为4组,每组25只,分别为对照组(sham组)、Ⅱ型CRS模型组(CRS组)、ASI干预组(CRS+ASI组)、ASI联合Notch1受体抑制剂DAPT干预组(CRS+ASI+DAPT组)。CRS组、CRS+ASI组和CRS+ASI+DAPT组小鼠开胸结扎腹主动脉建立Ⅱ型CRS模型,sham组采用纵劈胸骨术式,逐层分离组织至主动脉弓后,不作处理,后逐层关闭胸腔。手术后CRS+ASI组给予腹腔注射ASI[10 mg/(kg·d)],CRS+ASI+DAPT组给予腹腔注射ASI[10 mg/(kg·d)]及DAPT[10 mg/(kg·d)],sham组及CRS组腹腔注射同体积的生理盐水。2个月后取材,检测小鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(UN)评价心肾功能,心脏超声检测左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室舒张末期容积(LVEDV),HE染色、Masson染色观察肾脏组织形态变化及纤维化程度,TUNEL染色检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测肾脏组织Notch1、NRG1以及自噬相关蛋白LC3B、Beclin1、Atg5的表达,免疫荧光染色法检测肾脏组织自噬相关蛋白LC3B的表达。结果与sham组相比,CRS组肾脏组织肾小球萎缩,血清中LDH、Scr、UN水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),自噬相关蛋白Atg5、LC3B和Beclin1表达显著升高(P<0.05),Notch1、NRG1的表达降低(P<0.05),免疫荧光结果显示自噬相关蛋白LC3B相对荧光强度增加(P<0.05)。与CRS组相比,CRS+ASI组肾小球形态明显改善,血清中LDH|、Scr、UN含量降低(P<0.05),细胞凋亡率减少(P<0.05),Atg5、LC3B和Beclin1的表达减少(P<0.05),Notch1、NRG1的表达升高(P<0.05),免疫荧光染色自噬相关蛋白LC3B相对荧光强度降低(P<0.05)。与CRS+ASI组相比,CRS+ASI+DAPT组肾脏组织肾小球萎缩,血清中LDH|、Scr、UN水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),Atg5、LC3B和Beclin1表达显著升高(P<0.05),而Notch1、NRG1的表达降低(P<0.05),免疫荧光结果显示LC3B相对荧光强度增加(P<0.05)。结论ASI可能通过调节Notch1/NRG1信号减轻自噬改善Ⅱ型CRS小鼠肾脏损伤。

VSD联合羟基积雪草苷促进慢性创面愈合和血管生成的机制研究

目的:探究负压封闭引流(Vacuum sealing drainage,VSD)联合羟基积雪草苷促进慢性创面修复愈合和血管生成的作用及机制。方法:以不同剂量羟基积雪草苷处理慢性创面模型大鼠进行预实验,通过检测创面愈合时间筛选羟基积雪草苷最佳作用剂量。将SD大鼠随机分为对照组、模型组、羟基积雪草苷组、VSD组、羟基积雪草苷+VSD组、ML385组、羟基积雪草苷+VSD+ML385组,每组10只,除对照组外其余各组大鼠构建慢性创面模型,以药物分组处理后,检测各组大鼠创面愈合率及微循环血流灌注值(Microcirculation perfusion value,MPD);免疫组织化学染色检测各组大鼠创面微血管密度(Microvessel density,MVD);酶标仪检测各组大鼠血清内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、促血管生成素1(Angiopoietin 1,Ang1)及创面组织活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、环氧化酶-2(Cyclooxygenase 2,COX-2)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)水平;免疫印迹检测各组大鼠创面组织VEGF、Ang1与Nrf2/血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)通路蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠创面MPD及MVD、血清VEGF及Ang1、创面组织VEGF及Ang1、Nrf2、HO-1蛋白表达降低(P<0.05),创面组织ROS、MDA、COX-2、IL-6水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比,羟基积雪草苷组、VSD组、羟基积雪草苷+VSD组大鼠创面愈合率、MPD及MVD、血清VEGF及Ang1、创面组织VEGF及Ang1、Nrf2、HO-1蛋白表达升高(P<0.05),创面组织ROS、MDA、COX-2、IL-6水平降低(P<0.05),且羟基积雪草苷和VSD联合应用作用比单独应用更强;ML385组各指标变化与羟基积雪草苷+VSD组相反,且ML385可逆转羟基积雪草苷和VSD联合应用对模型大鼠各指标变化的作用。结论:VSD和羟基积雪草苷两者联合可协同上调Nrf2/HO-1信号通路蛋白表达,进而促进慢性创面修复愈合和血管生成。

积雪草苷促进ROCK/JNK通路介导的自噬减轻小鼠压力负荷性心肌肥厚

目的探讨积雪草苷(asiaticoside,ASI)改善主动脉缩窄(TAC)所致心肌肥厚的作用及机制。方法将100只雄性6周龄C57/BL小鼠随机分为假手术组(sham组)、TAC组、ASI+TAC组、ASI+Y-33075(ROCK抑制剂)+TAC组。各组以普通饲料喂养,TAC组、ASI+TAC组和ASI+Y-33075+TAC组以结扎小鼠主动脉弓方式建立TAC模型。自模型建立第1天起,ASI+TAC组腹腔注射ASI[10 mg/(kg·d)],ASI+Y-33075+TAC组同时给予腹腔注射ASI[10 mg/(kg·d)]以及Y-33075[10 mg/(kg·d)],连续给药30 d。检测小鼠血清结缔组织生长因子(CTGF)、心房钠尿肽(ANP)、脑钠尿肽(BNP)水平,超声检测心脏左室射血分数等心功能指标,HE、天狼猩红、Masson染色检测各组小鼠心肌结构及组织纤维化程度,LC3Ⅱ/Ⅰ免疫荧光染色检测各组小鼠心肌组织自噬水平,Western blot检测心肌组织ROCK、JNK及自噬相关蛋白Atg5、Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达。结果与sham组比较,TAC组射血分数(ejection fraction,EF)值降低,心肌肥厚程度增加,血清ANP、BNP、CTGF水平升高,ROCK、JNK、Atg5、Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平降低(均P<0.05);与TAC组比较,ASI+TAC组EF值增加,心肌肥厚程度降低,血清ANP、BNP、CTGF水平降低,ROCK、JNK、Atg5、Beclin 1、LC3-Ⅰ/Ⅱ表达增高(均P<0.05);与ASI+TAC组比较,ASI+Y-33075+TAC组EF值降低,心肌肥厚程度增加,血清ANP、BNP、CTGF水平升高,ROCK、JNK、Atg5、Beclin 1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达水平表达降低(均P<0.05)。结论ASI通过激活ROCK/JNK信号上调自噬减轻TAC引起的心肌损伤。

积雪草总苷平衡溶解度及油水分配系数研究

为了建立积雪草总苷中代表性组分的高效液相色谱检测方法,本文以积雪草总苷组分为模型药物,选择积雪草苷B、羟基积雪草苷和积雪草苷为代表性组分,采用饱和溶剂法测定代表性成分在蒸馏水、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、正辛醇、0.5%吐温-80及0.5%十二烷基硫酸钠中的平衡溶解度;采用摇瓶法测定三个代表性组分在正辛醇-不同p H磷酸盐缓冲液中的油水分配系数;运用向量夹角余弦法(cosine分析)和格鲁布斯法(Grubbs检验)评价相似性。研究发现,积雪草苷B、羟基积雪草苷和积雪草苷在蒸馏水中平衡溶解度分别为167.64、323.42、264.87μg/mL;在pH值2.5—8范围内,积雪草苷B、羟基积雪草苷和积雪草苷油水分配系数lgP_(o/w)值分别为0.41—0.84、0.22—0.49、0.30—0.92。相似性分析显示,三个代表性组分在不同溶剂中油水分配系数和平衡溶解度具有良好相似性。本文建立的测定积雪草总苷组分的摇瓶-HPLC方法简单可行,各组分属于低溶解性,组分之间良好的相似性反映积雪草总苷中三个代表性组分性质的离散程度小,可以为积雪草总苷新剂型设计提供实验依据。

积雪草苷多功能型水凝胶支架制备及对细胞黏附和三维培养的应用价值

目的 利用积雪草苷中药单体对海藻酸钠水凝胶支架材料进行改性研究,提高其机械性能,为细胞提供更优的生存环境。方法以甲基丙烯酸酐化海藻酸钠为支架材料、N-乙烯基吡咯烷酮(N-Vinyl-2-pyrrolidone,NVP)和中药单体为造孔剂构建三维载细胞多孔复合水凝胶支架。通过表征其基本理化性质,并从机械特性、生物相容性、细胞共培养等方面评价其应用于细胞黏附和三维培养的应用价值。结果当甲基丙烯酸酐化海藻酸钠与NVP为最适比例,且积雪草苷浓度为6 mg/mL时,测得水凝胶成胶后性能最稳定、交联程度最高。与空白组相比,其溶胀率最高为45%,质量损失率最高达61.5%,对凝胶的降解有明显的影响。初步的细胞相容性研究发现,该复合水凝胶支架无细胞毒性,可实现肾小管上皮细胞的增殖,黏附于表面的细胞呈取向性生长,形成单细胞层,水凝胶支架内的细胞呈三维生长。结论 本实验所获中药单体型水凝胶支架在促进细胞黏附、增长的同时还有利于细胞迁移,可为中药天然产物分子组装成绿色凝胶技术提供新思路,对加快天然支架材料在组织工程领域的实际应用具有极其重要的意义。

积雪草苷对增生性瘢痕中转化生长因子-β mRNA及基质金属蛋白酶类表达的影响

目的探讨积雪草苷对人增生性瘢痕中转化生长因子β(TGF-β)mRNA和基质金属蛋白酶及其组织抑制剂(MMPS／ TIMPS)表达的影响。方法临床上收集烧伤后5-8个月经积雪草苷治疗和非积雪草苷治疗的增生性瘢痕标本各9例。采用原位杂交和免疫组织化学方法,分别检测增生性瘢痕中TGF-β1mRNA、TGF-β2mRNA、TGF-β3mRNA及MMP1、 MMP1、TIMP1、TIMP2和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达水平,并利用图象分析方法进行结果分析。结果TGF-βmRNA在增生性瘢痕中主要表达于成纤维细胞胞质,经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中TGF-β1mRNA表达明显减少,胞质淡染,统计学上与非积雪草苷治疗组TGF-β1mRNA表达有显著性差异(P<0．01);而TGF-β3mRNA在积雪草苷治疗的增生性瘢痕中表达增多,明显高于非积雪草苷治疗组的TGF-β3mRNA表达(P<0．05)。MMPS／TIMPS在增生性瘢痕中也表达于成纤维细胞胞质,经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中TIMP1表达明显减少,与非积雪草苷治疗组TIMP1表达有显著性差异 (P<0．01);而MMP1、MMP2、及TIMP2在上述两组中表达无显著性差异(P>0．05)。Ⅰ、Ⅲ型胶原在增生性瘢痕中表达,经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中Ⅰ型胶原排列整齐,含量较少,与非积雪草苷治疗组有显著差异(P<0．05);而Ⅲ型胶原在两组增生性瘢痕中表达无显著性差异(P>0．05)。结论积雪草苷通过降低TGF-β1mRNA表达和增加TGF-β3mRNA的表达,引起TIMP1表达明显减少,从而MMP1／TIMP1对比例增加,达到促进Ⅰ型胶原降解,减轻瘢痕增生的作用。