移植气管软骨再生的实验

目的 研究同种异体移植气管软骨的再生能力 .方法 将供体犬气管置于受体犬腹腔内 ,以带蒂大网膜包绕 ,分别在术后 1,2 ,3,4,5 ,6 ,7,8及 12 wk时 ,共 9个时间段将移植段气管取出作病理及透射电镜检查 ,部分标本软骨用 3 H-TDR(3 H-脱氧胸苷 )标记 ,行放射自显影检查 .结果 软骨再生存在于移植后的各个时间段的气管软骨膜下 ,其再生的程度与良好的血液循环有关 .结论 同种异体气管移植 ,血液循环充分建立的条件下 。

异体移植气管中骨形态发生蛋白诱导软骨再生的实验

目的:比较骨形态发生蛋白2在犬自体、异体、冷冻异体气管移植体内诱导软骨再生的作用。方法:实验于2004-03/10在第四军医大学唐都医院实验外科完成。21只杂种犬随机等分为3组,自体移植组、异体移植组、冷冻后的异体移植组。各组动物颈部切除4环气管段作为移植体,植入骨形态发生蛋白2后埋入腹腔大网膜中。骨形态发生蛋白2均以胶原溶液作为缓释载体,用注射器直接注入各软骨环间。术后5周处死实验动物,通过对标本组织学观察、碱性磷酸酶活性和钙含量测定,对各标本的新生软骨进行观察和定量分析。结果:各组实验犬均存活到预杀期。①定量组织学观察:各实验组骨形态发生蛋白2植入区均可见新生软骨细胞和软骨岛,HPLAS-1000病理图像分析系统计算各环间新生软骨的像素面积,自体移植组、异体移植组、冷冻后的异体移植组的新生软骨面积差异有显著性犤2573.6±738.4,1691.3±743.6,2482.9±827.5,F=5.711,P<0.05犦自体移植组和深低,而温冷冻后的同种异体移植组差异无显著性。②碱性磷酸酶活性和钙含量测定:自体移植组、冷冻后的异体移植组与异体移植组均差异有显著性犤体移植组:(7.00±0.50)μkat/g,(5.48±1.15)mg/g;冷冻后的异体移植自组:(7.00±0.83)μkat/g,(5.03±0.91)mg/g;异体移植组:(5.00±0.67)μkat/g,(3.57±0.98)mg/g,P<0.05犦,自体移植组与深低温冷冻后的同种异体移植组间无显著性差异(P>0.05)。结论:骨形态发生蛋白2能在气管移植体内有效地诱导出新生软骨,在冷冻后的异体气管移植体内的作用效果与自体气管移植体内相似,明显优于异体气管移植体。

CTLA4Ig-重组腺病毒载体延长大鼠异基因原位移植气管存活期

目的 研究腺病毒介导的CTLA4Ig基因在大鼠异基因原位气管移植中的作用。 方法 建立异基因大鼠原位气管移植模型。分别采用腹腔注射生理盐水 (Saline组 ,2ml/只 )、腹腔注射CTLA4Ig重组腺病毒载体 (Ad CTLA4Ig组 ,2× 10 9PFU/只 )和肌肉注射环胞素A(CsA组 ,5mg/kg) ,观察术后大鼠的存活时间和移植气管的病理改变。 结果 Ad CTLA4Ig组大鼠存活时间为(2 7 3± 5 88)d ,较Saline组 (7 3± 1 63 )d和CsA组 (18 3± 1 70 )d明显延长 (P <0 0 5 )。同时 ,术后 10dAd CTLA4Ig组大鼠气管组织学改变与CsA组大鼠比较无明显差异。结论 Ad

移植气管组织中肿瘤坏死因子α的表达及临床意义

目的建立兔同种异体气管移植的实验动物模型,探讨移植气管组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达与管腔狭窄相关性,并研究其表达与应用免疫抑制剂的相关性。方法20只雄性大白兔随机分为2组,每组10只,A组为对照组,常规行气管移植术;B组为保护组,气管移植术后给予免疫抑制剂环孢素A。术中均利用带蒂大网膜包绕气管移植体及上下吻合口。术后4周处死动物,行大体及组织学检查并测定移植气管的通畅度,利用RT-PCR技术检测移植气管组织中TNF-α的基因表达。结果A组移植体管腔严重狭窄,吻合口有水肿及坏死现象;B组移植体管腔轻度狭窄,吻合口生长良好。移植气管通畅度及TNF-α的mRNA的检测结果,两组差别具有显著性,移植物狭窄程度与TNF-α表达呈正相关,应用免疫抑制剂组,TNF-α表达明显下降。结论TNF-α在形成移植后管腔狭窄过程中起重要作用,免疫抑制剂有利于减少TNF-α的表达,为寻求解决移植气管管腔狭窄问题提供新的方法。

移植气管组织中TNF-α的蛋白表达与管腔狭窄相关性研究

目的探讨移植气管组织中TNF-α蛋白表达与管腔狭窄相关性。方法建立兔同种异体气管移植模型,测定移植气管的通畅度,免疫组化方法检测移植气管组织中TNF-α的蛋白表达。结果应用免疫抑制剂,移植物中TNF-α蛋白表达明显下降,管腔轻度狭窄。结论气管移值后TNF-α促进管腔狭窄。

免疫排斥反应影响移植气管存活的实验研究

气管移植后机体的免疫反应对移植段气管存活的影响、目前仍不清楚。文章对同种异体气管移植后机体免疫状态进行实验研究。研究分二期,所用动物为杂种犬,均行5个环的气管移植,定期取出并行病理观察。结果表明:移植段气管靠带蒂大网膜可早期建立血液循环,同种异体移植段气管存活与免疫排斥反应无关。

基因治疗促进移植气管血运重建的实验研究

目的 了解基因治疗对移植气管早期血运重建及延长移植气管长度的作用。方法直流电脉冲介导重组质粒pcDNA3 1 myc His( )C bFGF和pCD2 VEGF1 2 1 分别转染兔胸骨乳突肌肉瓣 ,于术后 3、7、14、2 1、2 8d应用组织化学和免疫组织化学检查碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和血管内皮生长因子 (VEGF1 2 1 )外源基因蛋白在该肌肉瓣的表达及其促血管生成的生物学效应 ;分别以bFGF基因和VEGF1 2 1 基因转染单侧胸骨乳突肌肉瓣和双侧胸骨舌骨肌肉瓣 ,用转基因肌肉瓣包裹并结合基因缝线方法对兔颈部 10个环自体移植气管进行基因治疗 ,观察对其成活的影响。结果pcDNA3 1 myc His(- )C bFGF和pCD2 VEGF1 2 1 重组质粒分别转染在体肌瓣 ,获得bFGF和VEGF1 2 1 外源基因蛋白高水平表达。转基因肌肉产生血管增生 ,血流增强的生物学效应。转基因肌肉瓣包裹并结合基因缝线方法对移植气管进行基因治疗 ,使兔颈部 10个环移植气管血运建立并长期存活 ,与对照组相比差异有显著性意义 (P <0 0 1)。bFGF ,VEGF1 2 1 两基因治疗组差异无显著性意义。结论颈部肌肉瓣包裹结合一次性基因治疗能够促进移植气管早期血运建立 ,延长移植气管长度。

兔气管移植组织一氧化氮浓度测定及意义

目的 探讨移植气管组织中一氧化氮浓度与管腔狭窄的相关性,以及应用免疫抑制剂对两因素的影响.方法 将48只雄性大白兔随机分为A、B两组,每组24只.A组常规行气管移植术;B组气管移植术后给予免疫抑制剂环磷酰胺.两组兔分别于术后第3天、第7天、第14天取8只兔子处死.分别测定术后不同时间两组移植气管标本中的NO浓度,并测定移植气管的通畅度.结果 B组兔移植气管狭窄较A组轻,术后第7天、第14天两组间差别显著（P＜0.01）.B组术后不同时间移植段气管NO水平与A组比较均明显降低（P＜0.05）.结论 移植气管组织中一氧化氮浓度与管腔狭窄的程度有相关性;免疫抑制剂能减少NO的产生,对减轻移植段气管术后狭窄有帮助.

同种异体近交系小鼠原位气管移植模型的建立

目的:建立近交系小鼠同种异体原位气管移植模型.方法:供受体体质量配对后,C57BL/6和BALB/c小鼠随机分为2组,每组各10对,A组为C57BL/6(供体)→BALB/c(受体)组,B组BALB/c(供体)→BALB/c(受体)组,昆明种小鼠10对作为C组即KM(供体)→KM(受体)组.利用颈前肌肉及周围组织被覆移植气管提供血供建立同种异体小鼠原位气管移植模型.使用HE染色以及扫描电镜对同种异体小鼠原位气管移植模型进行评估,观察比较上皮积分、淋巴细胞计数以及无核软骨细胞/全部软骨细胞等指标.结果:A,B组全部存活,C组存活6只.A,C组移植气管均发生一定程度的排斥反应,B组无排斥反应发生.A,B,C三组上皮积分分别为:1.094±0.120分,2.872±0.059分及0.995±0.444分;无核软骨细胞数/骨细胞总数比值分别为:(27.22±1.09)%,(10.60±1.01)%及(31.40±6.43)%;淋巴细胞计数分别(20.18±1.31)个/HPF,≤5个/HPF及(22.55±4.87)个/HPF.A,B组及C,B组各项指标相比均有统计学意义,而A,C组相比则差异无统计学意义;且C组各数值离散程度均大于A组.结论:成功建立了C57BL/6(供体)→BALB/c(受体)小鼠原位气管移植模型.近交系及封闭群模型均能反应移植气管的各种病理生理变化,但封闭群模型稳定性较近交系差.

肌瓣对自体及异体气管移植段血液循环建立的促进作用

目的 :探讨采用肌瓣包裹促进自体及异体气管移植段重建血运的方法 .方法 :将 30只杂种犬随机等分为 3组 ,均切取颈部 5环气管段作为移植段 .A组 :无肌瓣包裹自体移植组 ;B组 :采用自体双侧胸骨舌骨肌 胸骨甲状肌联合肌瓣包裹组 ;C组 :采用异体双侧胸骨舌骨肌 胸骨甲状肌联合肌瓣包裹组 .于术后 1,2 ,4和 8wk处死动物取材 ,观察和比较实验动物的存活情况、移植体气管标本的大体和组织学改变 ,以及新生微血管密度 (MVD)等指标 .结果 :无肌瓣包裹自体移植组不能维持管腔结构 ;自体肌瓣包裹组移植段血供良好 ,管腔通畅 ,狭窄程度轻 ,存在炎症反应 .异体肌瓣包裹组移植体血供尚可 ,炎症反应重 ,管腔狭窄 ,但仍可维持通畅 .结论 :移植体的狭窄现象与血供关系密切 .肌瓣包裹气管自体移植段能够诱导出新生血管 ,维持气管形态 ,移植的气管可以存活 8wk以上 .自体较异体移植段血供好 ,虽可维持气管通畅 ,但存在狭窄 .

异体气管移植去抗原性的实验研究

目的探讨移植段气管去除上皮细胞和腺体细胞后异体、异位移植排斥反应的强弱。方法25只雄性SD大鼠作为供体,制备新鲜移植段气管、冷冻移植段气管和去上皮细胞移植段气管。取制备的新鲜移植段气管40个平均分为4组,分别用0、0.1、0.3和0.5mg/ml的蛋白酶溶液,4℃浸泡12h,根据镜下移植段气管上皮细胞和腺体细胞脱落情况及软骨细胞破坏程度确定蛋白酶的最佳浓度。另取30只雄性SD大鼠作受体,均分成3组,分别为:新鲜气管移植组(A组)、冷冻气管移植组(B组)及去上皮细胞移植组(C组),n=10。行左上腹旁正中切口,提出大网膜包绕各移植段气管,于21d后取出移植段气管,行组织学观察及淋巴细胞浸润测定。结果0.3mg/ml蛋白酶能去除移植段气管上皮细胞及腺体细胞,而对软骨细胞无明显损坏。异体植入大鼠腹腔的3组气管软骨均成活,血运建立,其中A组管腔内有肉芽组织,出现坏死、实变;B组有少量肉芽组织;C组管腔内无肉芽组织。A、B、C3组淋巴细胞浸润分别为29.16±2.69、15.17±2.19和11.56±0.87个/Hp,A组与B、C组比较及B组与C组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),排斥反应强弱为:A组>B组>C组。结论0.3mg/ml蛋白酶,4℃,浸泡12h的移植段气管,能完全脱上皮细胞和腺体,对软骨细胞基本无损伤,与冷冻法比较去抗原作用更好。一期异体大网膜包裹异位移植后,血运重建且移植段气管成活。

骨形态发生蛋白诱导犬的自体及异体气管移植段软骨再生的比较

目的 :将重组人骨形态发生蛋白 2 (rhBMP 2 )植入犬的自体及异体气管移植段内 ,促进新生软骨形成 ,比较rhBMP 2在自体及异体气管移植段内诱导软骨再生的作用 .方法 :16只杂种犬随机等分为 4组 ,颈部切去 5环气管埋入腹腔大网膜中作为移植段 .A ,B组为自体移植 ,C ,D组为异体移植 ,其中A ,C组移植段植入rhBMP 2 ,B和D组移植段不植入任何物质作为对照 .术后 4wk处死动物 ,标本行大体及组织学观察 .结果 :4组移植段软骨环均有不同程度的软骨再生 ,且以A ,C组再生更明显 .结论 :rhBMP 2可刺激气管移植段软骨再生 ,但在自体及异体移植段内的作用效果不同 .

同种异体气管移植的研究及展望

学术背景:同种异体气管移植是气管移植研究的热点,新观点、新进展不断涌现。目的:总结分析近年来气管移植的现状及进展,介绍气管移植研究的新方法、新观点。检索策略:作者应用计算机检索,以网络数据库资源为主,查询Science Direct,Pubmed,Springer等数据库1990-01/2007-07有关同种异体气管移植方面的文章,检索词为"tracheal,allotransplantation,allograft",并限定文章语言种类为English。同时应用计算机检索CNKI数据库1994-01/2007-07有关同种异体气管移植方面的文章,限定文章种类为中文,检索词"同种异体,气管,移植"。初检得到328篇文献,140篇符合纳入标准,取其中有关气管移植的30篇文献进行归纳总结。纳入标准:文章所述重点与气管移植相关。排除标准:重复性文章。文献评价:30篇文献中7个实验分析了移植气管的血运建立问题;17个实验分析了气管的免疫排斥问题;6个实验分析了移植气管组织细胞的再生与组织诱导因子问题。资料综合:通过文献回顾,发现决定同种异体气管移植成败的关键集中于以下3方面:①移植气管的血运建立。②移植气管的免疫原性及免疫反应强度。③移植气管组织细胞的再生。结论:在同种异体气管移植中各种相关因素的重要性及相互间的影响还需要进行深入分析。期望将来通过对各种组织诱导因子及局部应用的免疫抑制缓释剂的研究,在同种异体气管移植的研究领域中取得新突破。

骨形态发生蛋白质诱导犬的自体气管移植段软骨再生

目的 :将重组人骨形态发生蛋白 2 (rhBMP 2 )植入犬的自体气管移植段内 ,促进新生软骨形成 ,克服移植后软骨软化吸收造成的移植段气管塌陷。 方法 :2 4只杂种犬随机等分为三组 ,颈部切除 5个气管环段作为移植段。A组原位再植 ,外覆带蒂大网膜 ;B组移植段植入rhBMP 2后埋入腹腔大网膜中 ;C组移植段植入rhBMP 2后原位再植 ,外覆带蒂大网膜。以上rhBMP 2均以胶原溶液作为缓释载体 ,用注射器直接注入各环间。术后 1、2、4、8周处死动物 ,标本行大体及组织学观察。 结果 :三组移植体软骨环均有不同程度的吸收。B、C组移植体的rhBMP 2植入区有软骨再生 ,且以B组再生更明显。 结论 :rhBMP 2可刺激气管移植段软骨再生 ;胶原可充当rhBMP 2的缓释载体 。

大鼠深低温冻储同种异体气管移植的实验研究

目的探讨深低温冻储对大鼠同种异体移植气管上皮再生的影响。方法用深低温冻储2周和6周的大鼠气管进行同种异体气管移植,以自体和异体新鲜气管作为对照,通过观察供体气管的组织学、上皮爬行和再生情况,评价深低温冻储不同时长对移植气管的存活和新生上皮再生的作用。结果深低温冻储6周后实验组的移植气管复层上皮比自体气管移植组厚度明显变薄或成单层,软骨无变性坏死,未见有单核细胞浸润,最长存活达35 d,而深低温冻储2周气管移植大鼠为10 d。结论深低温冷冻后的组织可以保持其原有的活力和组织完整性,并能消减供体气管的抗原性。冻储6周的移植气管上皮再生和受体的存活率要优于冻储2周组。

异位气管移植模型中上皮细胞的增殖与凋亡

背景:异位气管移植中上皮细胞的变化过程尚不清楚,有研究表明在上皮增殖同时伴随有不可逆的细胞死亡,并且气道上皮再生与死亡发生在移植气道闭塞之前。目的:观察异位鼠气管移植过程中气道上皮细胞的增殖与凋亡情况。方法:将异体BALB/c小鼠气管植入BALB/c小鼠颈背部皮下,移植后不注射环孢素A。将BALB/c小鼠气管植入C57BL/6小鼠颈背部皮下,一组不注射环孢素A,另一组全程腹腔注射环孢素A。移植后第3,7,14,21,30天苏木精-伊红染色评价气道上皮的完整性、黏膜下炎症细胞浸润和纤维组织增生情况;测定移植气管中BrdU标记指数及TUNEL阳性细胞数。结果与结论:受体BALB/c小鼠移植后第3天气道上皮细胞轻度损伤丢失,第7～21天,气道上皮逐渐恢复正常,第30天,气道上皮接近正常上皮;BrdU标记指数变化范围为3%～5%;TUNEL阳性细胞数基本无变化。受体C57BL/6小鼠移植后第3天,气道上皮轻度损伤,第7～21天,气管上皮脱落、坏死,开始出现纤维增殖并逐渐加重,第30天时,上皮细胞完全消失,管腔被纤维组织填塞,接近闭塞;移植后第14天,BrdU标记指数达到最高,未注射环孢素A组高于注射环孢素A组(P=0.000),移植后第21,30天,标记指数明显降低;移植后第21天,未注射环孢素A组TUNEL阳性细胞数达到最大值,注射环孢素A组于移植后第14天达最大值。说明异位气管移植上皮增殖同时伴随有不可逆的细胞凋亡,环孢素A可以减轻闭塞性细支气管炎的发病程度,但并不能阻止其发生。

气管的低温保存和临床移植研究

气管是个机构复杂的器官，其中纤毛更具有特殊的功能。为满足临床气管移植的需要，本文研究了气管的低温保存工艺和移植技术。本研究探索得到的气管低温保存工艺方法，经电镜分析显示，气管的超微结构和纤毛的功能均得到很好保存。对２０只狗进行移植试验，除３只因移植物气管软化和狭窄的死亡外，存活率达８０％；对人的临床低温保存和移植试验进行了２例，也取得很好的效果。

深低温冻储同种异体气管移植并骨髓间充质干细胞移植后气管上皮细胞血管内皮生长因子的表达

背景:深低温冷冻后的组织可以保持其原有的活力和组织完整性,并能消减抗原性。目的:静脉移植骨髓间充质干细胞合并深低温处理供体气管后进行同种异体气管移植,观察骨髓间充质干细胞在促进上皮再生和再血管化后的作用。方法:用深低温冻储2周和6周的气管进行Wistar大鼠同种异体气管移植后,用PKH-26标记的3～5代骨髓间充质干细胞经鼠尾静脉移植入受体内,等量的磷酸盐缓冲液注射作为实验对照。观察供体气管的组织学和血管内皮生长因子蛋白表达。结果和结论:骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储后的移植气管结构完整,软骨无变性坏死;深低温6周的移植气管上皮再生情况优于2周。骨髓间充质干细胞移植组的上皮细胞表达血管内皮生长因子水平高于磷酸盐缓冲液对照组。结果提示,骨髓间充质干细胞移植合并深低温冻储6周后移植气管存活期好于深低温冻储2周;骨髓间充质干细胞能够促进移植物周围新生血管的增加,从而促进气管损伤的修复。

BMP诱导同种异体气管移植体的软骨再生

目的 :重组人骨形态发生蛋白 2 (rhBMP 2 )植入犬的同种异体气管移植体内诱导软骨再生 .方法 :1 4只犬 ,两两配对 ,随机分为A ,B 2组 .配对者两两交换移植体 ,异位移植(植入腹腔大网膜内 ) .移植体一端环间植入rhBMP 2 ,另一端做对照 .B组术后加服免疫抑制剂 .术后 4wk处死动物 ,标本行大体及组织学观察 .结果 :2组实验动物均于术后 4wk处死 .移植段气管植入rhBMP 2后新生软骨面积为 (pix el) 1 4 1 8.7± 5 1 2 .3,对照组为 2 78.2± 1 83.1 (P <0 .0 1 ) .应用免疫移植剂后 ,植入rhBMP 2组新生软骨面积 (pixel)增加为 1 936 .0± 6 0 9.8(P <0 .0 5 ) .结论 :rhBMP 2可刺激同种异体气管移植体软骨再生 ;免疫抑制剂的应用将会增强其作用效果 .

PKH-26标记骨髓间充质干细胞气管移植的体内示踪

背景:PKH-26已经被成功应用于标记骨髓间充质干细胞并进行体内示踪。目的:通过气管移植合并静脉移植PKH-26标记的骨髓间充质干细胞评价PKH-26的示踪效果,并检测骨髓间充质干细胞在体内向受损组织的迁移情况。方法:用贴壁法进行骨髓间充质干细胞的原代细胞培养,以PKH-26标记3～5代骨髓间充质干细胞经鼠尾静脉移植入气管移植的受体大鼠体内,用等量的PBS注射作为实验对照。结果与结论:用PKH-26进行细胞骨髓间充质干细胞标记后,荧光显微镜下观察可见几乎所有骨髓间充质干细胞均有红色荧光。移植后8周仍可见受体气管和移植气管处有红色荧光标记。远离吻合口的受体气管基本未见红色荧光标记物。结果表明骨髓间充质干细胞经静脉移植后,可向损伤的气管组织迁移并定植,而且可随移植气管的血管化逐渐由受体气管切缘向移植气管迁移,最后可定植于移植段气管。PKH-26的红色荧光标记稳定性高,是可应用于长期观察的无降解的荧光标记物。