sCD30表达与移植肾慢性排斥反应的关系

目的探讨肾移植受者sCD30(soluble CD30)表达与移植肾慢性排斥反应的关系。方法用ELISA方法对80例肾移植2年以上受者血样进行sCD30定量测定,同时进行移植肾穿刺活检、PRA、血环孢素A浓度、血肌酐检测。结果移植肾慢性排斥反应发生组sCD30表达水平明显高于无慢性排斥组,差异有统计学意义(P<0.05)。高sCD30组中慢性排斥反应发生率明显高于低sCD30组慢性排斥反应发生率,差异有统计学意义(P<0.05),且高sCD30与低sCD30受者相比其PRA阳性率并无统计学意义(P>0.05)。结论检测sCD30对判断移植肾慢性排斥反应发生有指导意义,且可能不受PRA影响。

沙利度胺对大鼠慢性移植物血管病的保护作用

目的探讨沙利度胺对大鼠慢性移植物血管病的保护作用。方法实验分为4组:同种移植对照组,供、受者均为Lewis大鼠,无特殊处理;异种移植对照组,Lewis大鼠接受Brown-Norway(BN)大鼠腹主动脉移植(BN-Lewis);沙利度胺小剂量组(50mg·kg-1·d-1,BN-Lewis);沙利度胺大剂量组(100mg·kg-1·d-1,BN-Lewis)。于移植后60d取移植动脉,分别进行组织病理学观察、测量内膜厚度,免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测TNF-α及上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)在移植动脉中的表达。结果同种移植对照组移植动脉形态正常;异种移植对照组移植动脉呈移植物血管病表现,血管内膜增厚;沙利度胺小剂量及大剂量组移植动脉呈内膜炎改变,内膜厚度比异种移植对照组减小(P<0.05)。与异种移植对照组相比,沙利度胺小剂量组和大剂量组移植动脉TNF-α及PCNA蛋白表达量降低(均P<0.05)。结论沙利度胺能降低移植动脉TNF-α及PCNA蛋白的表达,缓解移植动脉的纤维化进程以及内膜增生,对慢性排斥反应所致的移植物血管病具有抑制作用。

沙利度胺减轻大鼠移植动脉慢性移植物血管病的研究

目的探讨沙利度胺对大鼠移植动脉慢性移植物血管病的改善作用及其机制。方法以Brown-Norway大鼠和Lewis大鼠制备大鼠腹主动脉慢性移植物血管病模型，模型分为3组：（1）同系移植对照组，供、受鼠均为Brown-Norway大鼠，术后每天以生理盐水灌胃至术后60d；（2）异系移植对照组，以Brown-Norway大鼠为供鼠，Lewis大鼠为受鼠，受鼠术后每天以生理盐水灌胃至术后60d；（3）异系移植实验组，以Brown-Norway大鼠为供鼠，Lewis大鼠为受鼠，受鼠术后以沙利度胺100mg·kg-1·d-1灌胃60d。术后60d切取移植血管分别在光镜下观察移植物血管组织形态学的变化，在电子显微镜下观察血管内皮细胞及中膜平滑肌超微结构的变化；采用免疫组织化学法测定移植动脉组织中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达。结果光镜下，异系移植对照组和异系移植实验组血管内膜增生程度超过同系移植对照组（P〈0．05）；异系移植实验组内膜增生程度较异系移植对照组轻（P〈0．05）。透射电镜下，与同系移植对照组相比较，异系移植对照组和异系移植实验组内皮细胞变性坏死，平滑肌细胞固缩明显，中性粒细胞空泡变性程度重；异系移植实验组内皮细胞、平滑肌细胞变性坏死程度较异系移植对照组轻。同系移植对照组移植动脉中VEGF阳细胞数为（1．218±0．118）个，低于异系移植对照组的（32．124±2．003）个和异系移植实验组的（10．873±1．932）个（Pd0．05）；异系移植实验组VEGF阳细胞数低于异系移植对照组（P〈0．05）。结论沙利度胺具有缓解慢性移植物血管病的作用，机制可能与Ⅵ1GF表达下调和内皮细胞结构功能改变相关。

大鼠胸主动脉腹腔移植套管法的改良

目的:构建大鼠同种异体心脏移植物血管病模型,有效诱导心脏移植后的慢性排斥反应。方法:以Wistar大鼠为供体,将摘取的胸主动脉穿过自制的静脉留置针管后,翻转血管对称吻合、单侧打结固定,利用半针管将动脉套管植入到受体SD大鼠腹腔动脉中。术后7 d、28 d和56 d取移植动脉,常规行HE染色,观察血管形态变化,计算内膜厚度;免疫组织化学染色,观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和增殖细胞核抗原(PCNA)相对表达量。结果:34只大鼠成功建模30只,成功率为88.24%;随时间增加,移植动脉不断被单核巨噬细胞侵蚀,弹性纤维断裂,内膜出现炎症细胞和平滑肌血细胞的堆积;与对照组相比,7 d、28 d和56 d各组动脉内膜厚度显著增加(均P<0.01),α-SMA表达量明显减少(均P<0.05),PCNA表达量显著增加(均P<0.05);且随着时间的增加,动脉内膜厚度不断增加,α-SMA的表达量逐渐减少,PCNA的表达量逐渐增加(均P<0.05)。结论:此种动脉套管的改良以及半针管的运用使动脉移植更加简便有效,可重复性高,内膜增厚显著,能成功诱导出移植后的慢性排斥反应。

SDF-1/CXCR4信号通路在大鼠移植肾慢性排斥反应中的作用及其机制研究

目的 研究大鼠移植肾慢性排斥反应模型中基质细胞衍生因子-1（SDF-1）/趋化因子受体4（CXCR4）信号通路的作用及其机制.方法 以Fisher 344大鼠为供鼠,Lewis大鼠为受鼠,制备慢性排斥反应模型.空白对照组（n=10）Lewis大鼠行同基因肾移植,术后注射环孢素A;阳性对照组（n=10）建立大鼠慢性排斥反应模型,术后注射环孢素A;CXCR4拮抗组（n=10）建立大鼠慢性排斥反应模型,术后注射环孢素A和AMD3100（1 mg/kg）.每周监测大鼠血清肌酐值,并于术后第12周处死,取肾脏进行病理检查.使用慢性移植物损伤指数（CADI）评分评价各组移植肾损伤情况.使用蛋白质印迹法和荧光定量聚合酶链反应法检测移植肾中CXCR4、转化生长因子β（TGF-β1）/Smad3信号通路以及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达情况.结果 移植6周后CXCR4拮抗组和空白对照组血清肌酐值明显低于阳性对照组（P〈0.05）.相比于阳性对照组,CXCR4拮抗组和空白对照组组织学改变较轻,CXCR4拮抗组CADI评分为3.54,显著低于阳性对照组8.14（P〈0.05）.TGF-β1/Smad3通路及SDF-1/CXCR4通路相关标志物在空白对照组和CXCR4拮抗组表达低于阳性对照组（P〈0.05）.结论 SDF-1/CXCR4通路在慢性排斥反应发生发展过程中可能起到重要作用,使用药物拮抗SDF-1/CXCR4轴可在慢性排斥反应发生时抑制TGF-β1/Smad3通路,并对移植肾起保护作用.因此,拮抗CXCR4可能为预防慢性排斥反应导致的移植肾损伤提供新的治疗思路.

增强Foxp3表达对大鼠Treg细胞的功能及移植肾慢性排斥反应的影响

目的探讨增强叉状头转录因子3（Foxp3）表达对大鼠肾移植后调节性T淋巴细胞（Treg细胞）的功能及移植肾慢性排斥反应的影响。方法分别以F344大鼠和Lewis大鼠作为供、受鼠，建立肾移植慢性排斥反应模型，慢性移植肾肾病（CAN）的病理诊断标准采用Banff97分级诊断标准。根据基因Bank设计鼠Foxp3编码区引物，构建高表达Foxp3的逆转录病毒。取成功建立肾移植慢性排斥反应模型的受鼠，采用随机数字表法分为3组。（1）实验组：经受鼠尾静脉注入pSCV-BsdRFP-Foxp3病毒液500μl；（2）阴性对照组：经受鼠尾静脉注入pSCV-BsdRFP病毒液500／zl；（3）空白对照组：经受鼠尾静脉注入生理盐水500μl。注射的时间为术后即刻。术后0、1、2、3、4周应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒检测受鼠血清中Treg相关细胞因子IL-10和TGF-β水平；术后4周处死受鼠，取移植肾组织进行病理检查。结果各组受鼠术后4周开始出现CAN的病理改变，术后12周可见典型的慢性排斥反应病变。实验组受鼠的血清IL-10和TGF-β水平均随着术后时间的延长而逐渐增高，至术后3周时达到峰值，术后1、2、3、4周，实验组的血清IL-10和TGF-β水平均显著高于阴性对照组和空白对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）；而阴性对照组与空白对照组受鼠间比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。术后4周，3组受鼠的移植肾组织均可见不同程度的血管内膜增厚、肾小球硬化及轻度的间质纤维增生，并有淋巴细胞和浆细胞浸润，其中以实验组病变程度最轻，并出现明显的血管内膜增生。结论增强Foxp3表达可以缓解大鼠肾移植慢性排斥反应的发展，可能对大鼠肾移植慢性排斥反应有治疗作用。