雷帕霉素在移植物抗宿主病防治中作用的研究进展

移植物抗宿主病(GVHD)降低异基因造血干细胞移植后患者的疗效和生活质量,特别是激素耐药的GVHD,探索新的防治策略至关重要。雷帕霉素通过抑制mTOR信号通路,在急、慢性GVHD的预防和治疗中均显示出一定的临床优势。另外,雷帕霉素可以调节T细胞、B细胞、树突细胞、骨髓来源的抑制细胞等细胞亚群,阐明了其有效防控GVHD的机制。本文就mTOR抑制剂雷帕霉素防治GVHD的最新研究进展作一综述,同时就如何优化使用雷帕霉素提出新的思考。

ATG用于异体造血干细胞移植前预防移植物抗宿主反应

目的分析异体造血干细胞移植前加用抗T淋巴细胞球蛋白（ATG）预防移植物抗宿主反应（GVHD）的疗效。方法27例白血病患者分为两组，每组移植供体来源及病种类似，分别有同胞兄妹、无关供体和人类白细胞抗原（HLA）半相合供体。A组（n=12）：采用经典的CsA＋MTX预防GVHD；B组（n=15）：采用CsA＋MTX＋ATG预防GVHD。结果B组15例患者全部存活，除4例出现Ⅱ°急性GVHD（aGVHD）外，其余11例均在移植后30d左右仅出现Ⅰ°GVHD，并很快控制。A组12例患者中，3例HLA半相合移植患者分别在移植后第7、9和10天即出现Ⅳ。超急性GVHD，另有1例无关供体患者出现Ⅲ°aGVHD，该4例患者由于重度GVHD继发肺部感染而死亡；其余8例同胞之间的移植分别出现Ⅱ°～Ⅲ°aGVHD。结论在异体造血干细胞移植前应用ATG可以有效预防GVHD的发生或减轻GVHD的严重度，明显减少移植相关死亡率。

异种骨髓移植移植物抗宿主反应的实验动物模型

为了观察大鼠和小鼠间异种骨髓移植中移植物抗宿主病 (GVHD)的现象 ,建立动物模型。受体BALB/c小鼠接受 8.5Gy全身照射后 ,一组 (n =10 )输入SD大鼠骨髓细胞 4× 10 7,另一组 (n =10 )输入SD大鼠骨髓细胞 4× 10 7及脾细胞 2× 10 7,观察 6 0天 ,记录受鼠发生GVHD情况。结果表明 :单纯骨髓细胞输入组 8只鼠存活超过 6 0天 ,另 2只鼠分别于 18天和 31天死亡 ,肝、小肠病理切片未见明显GVHD。而骨髓细胞及脾细胞输入组均于14天内死亡 ,肝、小肠病理切片证实有GVHD。结论 :大、小鼠间异种全骨髓细胞移植未见明显GVHD 。

移植物抗宿主反应与造血干细胞移植术后膜性肾病

目的:分析异基因造血干细胞移植术后膜性肾病(MN)的临床病理特征,并探讨其与慢性移植物抗宿主反应(GVHD)之间的关系。方法:选取在我科经活检证实的5例异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)术后MN为研究对象,分析5例患者的临床表现,实验室结果以及肾脏病理形态学、免疫荧光及电镜的病理特点,并行IgG亚型免疫荧光染色,观察不同IgG亚型在肾小球分布的特点及与nephrin分布的关系。此外,利用Western印迹的方法,我们检测了患者血清中是否存在抗M型磷脂酶A2受体(PLA2R)自身抗体。结果:5例患者的临床病理特征如下:(1)移植前无肾脏病史及肾脏病家族史;(2)所有患者在出现蛋白尿的时候均合并存在慢性GVHD(cGVHD)的表现,且4例患者既往有急性GVHD(aGVHD)的病史,经过有效的抗GVHD治疗后,患者的蛋白尿也随之好转;(3)部分患者自身抗体检测阳性,肾组织伴有C4及C1q的沉积,提示体内存在自身免疫现象;(4)肾组织沉积的IgG以IgG4为主,其分布与nephrin一致;(5)抗PLA2R自身抗体的检测结果显示5例患者中仅有1例阳性,阳性率远低于特发性膜性肾病(IMN)的检测结果。结论:我们认为Allo-HSCT术后的MN也是cGVHD的一种表现形式,其发病机制可能与移植入的免疫细胞产生了抗宿主足细胞的抗体有关,且抗体的类型不同于IMN的抗PLA2R自身抗体。

造血干细胞移植后HLA-G表达与移植物抗宿主反应的相关性研究

背景长期以来,许多研究者花费大量精力致力于研究移植排斥与存活相关的机制,但对造血干细胞移植、器官移植的了解依然缺乏。自从上世纪90年代发现HLA-G在诱导母亲与胎儿耐受起着重要的生理作用以来,研究HLA-G作用于异体移植的观点已经得到有力支持。一些研究报道已经证实,同种移植中HLA-G的出现以及可溶性sHLA-G的血清/血浆水平的增加与更好的移植耐受,并增加移植物的存活都有相关性。目的本研究确定造血干细胞移植后血浆sHLA-G水平和单个核细胞(mononuclear cells)膜HLA-G表达与移植物抗宿主反应的关系。方法 225名首次造血干细胞移植患者依据移植物抗宿主反应的活性,分为急性移植物抗宿主反应组(acute GVHR)和慢性移植物抗宿主反应组(chronic GVHR),分别为96名和129名。健康献血者95名作为对照组。流式细胞法分析单核白细胞膜HLA-G(mHLA-G)表达。ELISA法检测血浆中可溶性HLA-G(sHLA-G)含量。ROC曲线评价sHLA的临界值与预判GVHR活性的相关性。RT-PCR和Western印迹分别分析HLA-G mRNA表达和蛋白一致性。免疫组化染色检测12名移植患者皮肤组织HLA-G表达状态。结果外周血单个核白细胞在acute GVHR组和chronicGVHR组都有低表达。急性组外周血中单核细胞CD14+mHLA-G1+细胞占(45.53±17.32)%,而慢性组中只有(10.22%±5.78)%,两者比较差异有统计学意义。sHLA-G5表达水平在急性组有显著性增加。sHLA-G5预判急性GVHR的最佳临界值是253.9μg/L,有很高的诊断准确度。12名acute GVHR患者中10名皮肤组织HLA-G表达阳性。RT PCR和Western印迹分析显示急性GVHR组的血浆sHLA-G5水平显著高于慢性组。结论 ROC曲线分析得出血浆sHLA-G5水平的临界值253.9μg/L可用于预测造血干细胞移植后移植物对宿主的急性排除反应。单核细胞CD14+HLA-DR-HLA-G+细胞具有干细胞特征,该细胞将可能用于移植排除反应的预防和治疗。

供、受体T细胞比例对HLA-半相合异基因造血干细胞移植移植物抗宿主反应的影响

目的研究移植物和受体的T细胞比例与移植物抗宿主反应(GVHD)的关系。方法①实验研究40对小鼠(受体SD小鼠和供体Wistar小鼠)按移植物和受体的T细胞1∶1、2∶1和4∶1比例和对照组分为4组进行移植,并观察移植后GVHD的发生和程度。②临床研究中5例9～18岁患者进行HLA-半相合异体外周血造血干细胞移植,其中4例进行CD34+细胞分选,并计算移植物和受体循环血中T细胞绝对值,按2∶1比例输入;另1例进行常规异体外周血造血干细胞移植。结果实验发现4组小鼠,1∶1和2∶1组的GVHD最轻,与对照组比较差异有统计学意义,而4∶1组的GVHD与对照组比较差异无统计学意义。临床中1例常规方法移植者出现超急性重度GVHD,死于并发间质性肺炎;其余4例仅出现轻度急性GVHD,1例在+155d时死于多发性神经根炎,3例病人移植成功,且均无病生存3年以上。结论移植物内T细胞与受体循环血内的T细胞绝对值之比介于1∶1和2∶1之间较为合适;临床按此比例进行移植,尤其对于HLA部分不相合或半相合的单倍体移植,可获得更好的抗肿瘤效果和较轻的GVHD。

移植前选择性去除同种异体反应供者淋巴细胞预防移植物抗宿主病的实验研究

目的探讨在移植前选择性去除同种异体反应的供者淋巴细胞预防移植物抗宿主病（GVHD）的效果。方法以（BALB／c×C57BL／6）F1雌性小鼠（H-2^d/^b）为受鼠，于第0天接受亚致死量的^60Co γ射线全身照射（TBI），总剂量为4Gy，第1天接种P388D1白血病细胞，第2天输注由C57BL／6雄性小鼠（H-2^b）为供鼠提供的不相匹配的供者脾淋巴细胞，第6天再次TBI 9Gy，第7天输注由（BALB／c×C57BL／6）F1雄性小鼠（H-2^d/^b）提供的骨髓造血干细胞。结果以TBI选择性去除同种异体反应供者淋巴细胞组的小鼠无白血病和GVHD的发生，生存期超过了210d。对照组的小鼠出现了明显的GVHD、白血病或因出血、感染导致的死亡，生存期短，为20～36d（P〈0．01）。结论在造血干细胞移植前输注不相匹配的供者淋巴细胞诱导移植物抗白血病（GVL）效应，然后再选择性去除同种异体反应的供者淋巴细胞来预防GVHD的发生是可行的。

慢性移植物抗宿主反应诱导SLE样小鼠模型

目的 运用慢性移植物抗宿主反应 (GVHR)诱导系统性红斑狼疮 (SLE)样小鼠模型 ,为进一步探索SLE发病机制奠定基础。方法 将亲代BALB/C小鼠淋巴细胞经静脉途径输入 (BALB/C×C57BL/ 6 )F1代小鼠体内 ,用ELISA测定IgG类抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测抗核抗体 (ANA)核型和免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法测定抗可浸出核抗原 (ENA)抗体。结果 亲代淋巴细胞所致的慢性移植物抗宿主反应可诱导F1代小鼠产生高滴度的抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体等多种ANA ,免疫小鼠的肾脏有显著的免疫复合物沉着。结论 运用慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型 ,小鼠发病迅速 ,抗核抗体的产生与人SLE相似 。

移植物抗宿主反应在免疫介导再生障碍贫血发病中的作用

本实验通过大体和组织学观察,脾指数、腘窝淋巴结称重试验以及^(125)I-UdR掺入试验,探讨移植物抗宿主反应(GvHR)在免疫介导小鼠再障模型发病中的作用。从腘窝淋巴结称重试验和^(125)I-UdR掺入试验结果表明,DBA/2小鼠淋巴细胞输给BALB/c小鼠可以引起GvHR,而且呈细胞量依赖关系,但再障小鼠的皮肤、肠、肝、脾组织学检查均未发现GvHR,脾指数毫无例外地明显降低,而且再障小鼠并不因输入细胞量增加而表现发病率增加,存活期缩短现象,提示GvHR在免疫介导小鼠再障中不起重要作用。

抗CD71抗体抑制移植物抗宿主反应的组织病理学研究

探讨抗CD71抗体在动物体内抗移植排斥反应的作用。采用D2C5 6细胞株表达并提纯抗CD71人 鼠嵌合抗体 ;将人外周血单个核细胞 (PBMC)注射到裸鼠体内建立移植排斥反应动物模型 ;将造模裸鼠分成 3组 :抗CD71抗体组、抗CD4抗体组和Hanks液模型组 ,分别注射抗体及Hanks液 ;2 0天后处死 ,取裸鼠肝、肺、脾组织 ,常规组织病理学处理并进行图像分析。实验发现 :Hanks液模型组动物的肝、肺组织有大量的淋巴细胞浸润、肝细胞坏死及脾脏巨噬细胞活化 ;抗CD71抗体组和抗CD4抗体组的炎症性病变轻于模型组 ,差异具有极显著的统计学意义 (P <0 0 1)。提示

造血干细胞移植相关的移植物抗宿主病肠道菌群失调机制及治疗分析

造血干细胞移植(Hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)是将自身或捐赠者身体中健康造血干细胞输注到受体体内的一种治疗方式,是治疗各种恶性肿瘤尤其是血液肿瘤最主要的方法[1]。但在某些情况下,接受HSCT治疗后患者会出现严重的不良反应,其中移植物抗宿主病(Graft versus-host disease,GvHD)是最严重的一种[2]。近年的研究发现HSCT治疗后GvHD等不良反应与肠道菌群之间存在密切的联系。GvHD患者肠道菌群的α多样性低于健康人[3]。

体外皮肤移植模型与移植卵巢的移植物抗宿主反应类同变化

目的探讨体外皮肤移植模型(VSEM)预测移植器官移植物抗宿主反应(GVHR).方法供、受鼠配对后移植卵巢,同时将受鼠淋巴结与供鼠脾淋巴细胞悬液混合培养6～7 d,再加入受鼠耳皮继续培养,制成VSEM.将第12、30天受鼠的移植卵巢、脾和VSEM按病理变化分级.结果第12天VSEM分别与移植卵巢、脾的GVHR相同等级达77%,而且三者浸润细胞类型、数量与受损形式大致相仿;第30天VSEM预测卵巢、脾的GVHR相同等级与第12天的差异无统计学意义.第30天VSEM与卵巢浸润炎性细胞数量、类型差异较大.结论 VSEM预测急性和慢性GVHR准确度相差不大,预测移植器官急性病理变化准确度较高.

细胞因子与移植物抗宿主反应

细胞因子形成的细胞因子网络在移植免疫中起着重要的作用。本文就Th_1/Th_2细胞分泌的几种重要的细胞因子在移植物抗宿主反应中的作用和意义作一综述。

T细胞比例对大鼠移植物抗宿主反应的影响

目的:研究移植物和受体的T细胞比例与移植物抗宿主反应(GVHD)的关系。方法:受体SD大鼠和供体Wistar大鼠共40对,按移植物与受体的T细胞比例1∶1、2∶1、4∶1和对照组分为4组进行移植,并观察移植后GVHD的发生及其程度。结果:4组大鼠中1∶1和2∶1组的GVHD最轻,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而4∶1组的GVHD与对照组比较差异则无统计学意义(P>0.05)。结论:移植物内T细胞与受体循环血内的T细胞绝对值之比介于1∶1与2∶1之间较为合适;按此比例进行的大鼠移植,GVHD较轻。

人脐血细胞在C．B－17SCID小鼠体内HLA－DR抗原表达及移植物抗宿主反应

本文观察了人脐带血和骨髓单个核细胞在Ｃ，Ｂ一１７ＳＣＩＤ（Ｔ、Ｂ细胞联合免疫缺陷）小鼠体内ＨＬＡ一ＤＲ抗原（人白细胞抗原）表达和移植物抗宿主反应（ＧｖＨＲ）．结果发现：人脐带血细胞ＨＬＡ一ＤＲ抗原在小鼠体内表达随着时间的延长，有一定量的增加，但低于骨髓细胞；人脐血细胞异种移植６０天内，仅表现出轻度ＧＶＨＲ，比骨髓细胞所致者弱。这为脐血造血细胞临床应用提供了实验根据据。

中医治愈移植物抗宿主反应性虹膜睫状体炎1例

患者男性，31岁，于2013年3月以双眼视物模糊7个月就诊。现病史：2012年9月因左眼模糊4天就诊外院，当时视力：右眼：0．9左眼：1．0。眼科检查：睑球结膜无充血，角膜Kp（＋），房水细胞（＋），房闪（＋），左眼晶状体后囊混浊，双眼玻璃体混浊（＋＋），

5-Azac诱导急性移植物抗宿主病免疫低反应的甲基化研究

目的 建立小鼠急性移植物抗宿主病（a GVHD）模型,检测DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂胞苷（5-aza-cytidine,5-Azac）诱导a GVHD免疫低反应后的甲基化变化,探讨5-Azac对小鼠a GVHD的免疫调节作用。方法选择雄性C57BL/6（H-2b）与雌性BALB/c（H-2d）小鼠分别作为异基因移植供、受体建立移植物抗宿主病小鼠模型。BABL/c受体按照体质量相近进行配对,分为移植对照组和5-Azac实验组。5-Azac实验组于移植后1~7、14、21、28 d尾静脉注射5-Azac 0.25 mg/kg（0.3 m L/只）;移植对照组尾静脉注射生理盐水0.3 mL/只。提取3只移植对照组和3只5-Azac实验组小鼠的外周血DNA,分别等量混匀,采用甲基化DNA免疫共沉淀测序（Me DIP-seq）的方法检测甲基化变化,筛选差异甲基化基因,并对其功能及生物学通路进行分析。结果 5-Azac实验组小鼠的生存时间延长,排斥反应减弱,成功诱导移植物抗宿主病免疫低反应状态。2组小鼠DNA Me DIP-seq结果对比显示：5-Azac实验组启动子区存在369个差异甲基化基因,其中上调239个、下调130个;外显子区存在184个差异甲基化基因,其中上调113个、下调71个。利用KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）数据库对差异甲基化基因分析,结果显示其主要参与10个免疫学信号通路,其中TGF-β、GSK-3β、SYK、PI3K、NFAT、CD28、α4β7与a GVHD的发生发展密切相关。结论 5-Azac可以通过改变基因的甲基化状态有效诱导a GVHD的免疫低反应。

移植物抗宿主病的炎症反应机制及预防和治疗

异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, allo-HSCT)是治疗白血病、淋巴瘤以及其他恶性血液病和免疫疾病的有效措施,移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)是由体内供者源免疫活性细胞介导的攻击受者细胞和器官的一种过度的炎症反应,严重威胁患者的生活质量甚至生命,是移植失败和影响移植术后患者生活质量的主要原因之一[1-2]。

肝移植术后移植物抗宿主病治疗的初步经验(附2例报道)

目的总结肝移植术后移植物抗宿主病(GVHD)诊治的临床经验。方法对2例肝移植术后GVHD患者的临床表现、诊断、治疗及效果进行总结分析,包括GVHD发病时间,临床症状出现的先后顺序,免疫抑制剂的用法及用量,确诊后的治疗措施等。结果2例患者分别于术后第19、20天出现不明原因高热、皮疹及胃肠道症状,继之出现全血细胞减少,肝功能无明显受损。例1患者经用大量激素、增大免疫抑制剂的剂量等治疗无效,于术后第34天死亡,死亡原因为混合感染及多器官功能衰竭。例2患者早期高度疑似GVHD,应用小剂量甲泼尼龙治疗后减少或停用免疫抑制剂,注射丙种球蛋白,鼻饲加强营养,早期应用抗细菌、真菌及抗病毒药物,患者痊愈,截至目前(术后11个月)仍健康存活。结论肝移植术后出现不明原因发热、皮疹、胃肠道症状应警惕GVHD的发生,停用或减少免疫抑制剂、恢复受体的免疫系统、加强营养、预防感染是治疗的关键。