基于网络药理学和大鼠移植性肝癌模型探讨癌痛消颗粒防治肝癌的分子作用机制

目的:利用网络药理学方法探讨癌痛消颗粒(ATXF)防治肝癌的物质基础和作用靶点,并结合大鼠移植性肝癌模型进行初步的验证。方法:通过TCMSP数据库收集癌痛消颗粒各中药活性成分及其潜在作用靶点,在GeneCards、OMIN、Drugbank、TTD数据库获取肝癌疾病靶点,取两者交集获得ATXF防治肝癌的潜在作用靶点。使用Cytoscape 3.8软件构建ATXF各成分与肝癌作用靶点的相互作用网络,并对其结果进行可视化分析。使用STRING平台分析ATXF防治肝癌靶点的互作网络,并运用CytoNCA分析各节点之间的拓扑关系,利用中位数筛选获得ATXF防治肝癌的核心靶点。通过Metascape数据分析平台,对获得的核心靶点进行GO、KEGG通路富集分析。采用大鼠腹水癌Walker-256细胞株建立SD大鼠移植性肝癌模型,经ATXF灌药干预15 d后取出瘤块。采用Western blot检测比较治疗组与对照组移植瘤内AKT、pAKT、p53、p-p53、ERK1/2以及p-ERK1/2的蛋白表达水平。结果:从ATXF中筛选得到257种活性成分,作用于294个靶点,与7993个肝癌疾病靶点相映射得到潜在作用靶点231个。进一步筛选获得AKT1、IL6、TP53、MAPK3、TNF、JUN、CASP3、MAPK1、MYC、PTGS2、MMP9等11个核心靶点,GO及KEGG分析结果显示以上核心靶点富集于HBV、TNF和癌症相关信号通路。大鼠移植瘤实验结果表明,ATXF可显著下调移植瘤内AKT、pAKT、pERK1/2的表达水平,同时显著上调p-p53蛋白表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:运用网络药理学方法分析发现癌痛消颗粒可作用于多条肿瘤信号通路,并运用大鼠移植瘤实验初步证实ATXF对于AKT、p53以及ERK1/2蛋白具有显著的调控作用,其机制可能是通过调控以上信号通路而发挥抗肝癌作用。

黄芪多糖通过JAK/STAT3通路抑制口腔鳞癌SCC-25裸鼠移植瘤

目的阐明黄芪多糖(AP)对口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma)细胞系SCC-25移植瘤模型小鼠的影响和机制。方法皮下注射口腔鳞癌细胞系SCC-25建立异种移植瘤模型,将移植瘤BALB/c裸鼠模型随机分为4组:对照组(cTRL)、AP低剂量组(AP 10 mg)、AP中剂量组(AP 25 mg)和AP高剂量组(AP 50 mg)。AP治疗后,检测移植瘤体积和小鼠存活率;免疫组化检测Ki67和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平;TUNEL实验检测移植瘤细胞凋亡情况;Western blot检测JAK2/STAT3通路蛋白表达情况和磷酸化情况。结果与对照组相比较,AP低、中、高剂量组肿瘤体积明显减小(P<0.01),小鼠存活率明显增加(P<0.01),Ki67和VEGF表达水平明显下降(P<0.01),JAK2/STAT3/c-myc磷酸化水平明显被抑制(P<0.01)。结论 AP以剂量依赖抑制SCC-25移植瘤体积,提高移植瘤小鼠存活率,下调Ki67和VEGF表达水平和JAK2/STAT3磷酸化水平。AP可能通过抑制JAK2/STAT3/c-myc信号通路抑制口腔鳞癌细胞SCC-25移植瘤生长。

解毒颗粒对H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用的研究

目的：观察解毒颗粒对小鼠H22皮下移植瘤的抑制作用。方法：建立H22皮下瘤小鼠模型,随机分为解毒颗粒低剂量组（JL）、解毒颗粒高剂量组（JH）、索拉非尼组（SF）、生理盐水组（NS）,造模1天后开始给药,连续14天,第15天每组处死6只小鼠,观察小鼠实体瘤、肝脏、肾脏组织病理形态的变化,记录给药后第21天各组小鼠的生存率。结果：与生理盐水组相比,3种治疗方案均有一定的抑瘤作用,其中解毒颗粒低剂量组和高剂量组抑瘤效果较好,并在第21天的生存率较高。解毒颗粒高剂量组和索拉非尼组均出现了肿瘤坏死程度上升,肿瘤细胞密度下降,肿瘤细胞异型性下降,核分裂像计数下降的现象（P〈0.01）,且在肿瘤细胞密度评分和肿瘤细胞异型性方面,解毒颗粒高剂量组效果优于低剂量组（P〈0.05）。结论：解毒颗粒在肝癌小鼠移植瘤模型体内具有一定抗肿瘤效果,本研究为今后解毒颗粒的临床推广提供了一定的实验基础。

CYB5D2对乳腺癌皮下移植瘤模型大鼠肿瘤生长的影响

[目的]研究CYB5D2对乳腺癌皮下移植瘤模型大鼠肿瘤生长的影响。[方法]通过乳腺癌MCF-7细胞系建立乳腺癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。将含有CYB5D2表达的质粒稳定转染MCF-7细胞,多点注射,将稳定转染的细胞注入裸鼠皮下,作为观察组,同时设置shRNA-CYB5D2阴性质粒为阴性对照组,PBS为空白对照组。测量各组大鼠肿瘤体积及质量;裸鼠转移瘤模型建立成功后处死小鼠,qRT-CPR法检测肿瘤组织内CYB5D2 mRNA表达水平;Western Blot法检测各组裸鼠转移瘤组织内上皮细胞间质转化(EMT)标志表白表达情况,酶联免疫吸附法检测裸鼠转移瘤细胞上清液中MMP-2及MMP-9水平。[结果]观察组转移瘤平均体积及质量显著低于阴性组与空白组(P<0.05),阴性组与空白组裸鼠转移瘤体积及质量无明显差异(P>0.05)。提取试验小鼠肿瘤组织总RNA,qRT-CPR法检测提示观察组肿瘤组织内CYB5D2 mRNA表达量显著高于阴性组及空白对照组(P<0.05),而阴性组与空白组间差异无显著性差异(P>0.05);Western Blot法检测结果显示,观察组转移瘤组织内E-cadherin、β-catenin蛋白表达水平显著高于与阴性组及空白组(P<0.05),而N-cadherin及Snail蛋白表达显著低于与阴性组及空白组(P<0.05)。阴性组与空白组转移瘤组织内E-cadherin、β-catenin、N-cadherin及Snail蛋白表达无显著性差异(P>0.05);观察组裸鼠转移瘤细胞上清液中MMP-2及MMP-9水平显著低于与阴性组及空白组(P<0.05),而阴性组与对照组MMP-2及MMP-9水平无显著性差异(P>0.05)。[结论]上调CYB5D2基因可有效抑制乳腺癌皮下移植模型大鼠瘤体生长,推测上调CYB5D2基因可能通过下调N-cadherin、Snail、MMP2及MMP9,上调E-cadherin、β-catenin,逆转EMT,发挥抗肿瘤功效。

氢质子磁共振波谱活体检测结肠癌耐药性及其分子标志物的探索

目的探索氢质子磁共振波谱(1H-magnetic resonance spectroscopy,1H-MRS)活体评价人类结肠癌耐药性及可能分子标志物。材料与方法 8只耐药与8只不耐药人类结肠癌SW480荷瘤裸鼠于肿瘤最大径大于1.5 cm后,分别行1H-MRS检查后,过度麻醉处死荷瘤鼠,切下肿瘤,检测肿瘤的坏死(HE染色)及P-gp、MRP1、PKC、γ-GCSh、γ-GCSl、GSHS、GST蛋白表达(Western blot)。结果耐药组人类结肠癌SW480裸鼠模型Cho峰、Lac峰、Glx1峰、Lip及Ins峰/Cr峰面积较不耐药组人类结肠癌SW480/5-FU裸鼠模型增加,差异有统计学意义(P<0.05)。在HE切片上,组耐药组与不耐药组均见少许坏死,两组组织坏死面积差别无显著性,不耐药组组织间隙较耐药组增大。耐药组PKC、P-gp、MRP1、γ-GCSh、γ-GCSl、GSHS、GST蛋白表达显著高于不耐药组(P<0.05)。Cho峰、Lac峰、Glx1峰、Lip及Ins峰/Cr峰面积与肿瘤耐药相关蛋白表达有明显相关性。结论 Cho峰、Lac峰、Glx1峰及Ins峰/Cr峰面积比有可能作为活体监测结肠癌SW480耐药性的分子标志物。

负载盐酸阿霉素的羟基磷灰石玉米醇溶蛋白pH敏感性纳米载体的体内药效学研究

目的:研究负载盐酸阿霉素(DOX)的羟基磷灰石(HA)/玉米醇溶蛋白(Zein)pH敏感型纳米给药系统(HA/Zein-DOX NPs)对小鼠乳腺癌移植瘤的药效,探讨药物新剂型。方法:体内通过构建Balb/c小鼠乳腺癌移植瘤模型,并随机分成生理盐水对照组、DOX组和HA/Zein-DOX NPs组,每隔3日测量小鼠体重及肿瘤体积。尾静脉注射3周,完整剥离肿瘤组织,称取瘤质量,计算抑瘤率。然后剥取主要脏器(心、肝、脾、肺、肾),通过H&E染色切片观察,评价HA/Zein-DOX NPs的抗肿瘤效果。结果:移植瘤小鼠肿瘤体积变化结果显示HA/Zein-DOX NPs能有效抑制小鼠乳腺肿瘤生长,且HA/Zein-DOX NPs组小鼠存活时间比生理盐水组和DOX组长,DOX组与HA/Zein-DOX NPs组的抑瘤率分别为50.28%和83.24%。H&E切片表明HA/Zein-DOX NPs组的心脏毒性明显降低,其他器官毒性差异不明显。结论:体内抗肿瘤实验表明DOX和HA/Zein-DOX NPs均能抑制肿瘤生长,HA/Zein-DOX NPs能够显著提高抗肿瘤疗效和小鼠存活率,且能明显降低DOX原料药的心脏毒性。