纤维蛋白原与特发性膜性肾病患者肾小管萎缩/间质纤维化的关系及预测价值

目的:探讨纤维蛋白原(FIB)与特发性膜性肾病(IMN)患者肾小管萎缩/间质纤维化(TA/IF)之间的关系及预测价值。方法:本研究纳入2018年9月至2023年12月在湖北医药学院附属太和医院肾病内科经肾活检证实的171例IMN患者,收集肾活检时的各项临床参数。根据肾穿刺活检前的FIB水平将患者分为正常FIB组(FIB≤4 g/L)和高FIB组(FIB>4 g/L)。根据TA/IF的程度,患者分为T1组(无/轻度,n=67)、T2组(中度,n=56)、T3组(重度,n=48)。通过有序Logistic回归对TA/IF程度的影响因素进行分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析FIB对TA/IF程度的预测价值。结果:与正常FIB组相比,高FIB组中、重度TA/IF的比例明显较高;T2和T3组患者的临床表现更差。年龄、FIB、TG是影响IMN患者TA/IF程度的独立危险因素;FIB对中重度TA/IF预测价值较好。结论:合理控制FIB水平可能减少IMN患者中重度TA/IF发生的风险。

六味地黄汤调控TGF-β及Smad家族蛋白表达对肾间质纤维化的影响研究

目的探究六味地黄汤抑制肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)的干预作用及机制。方法将30只SPF级SD大鼠随机均分为假手术组、模型组、阳性药物组、中药高剂量组和中药低剂量组,每组6只。除假手术组外,其余各组采用左侧输尿管结扎术制备RIF模型。造模结束后,假手术组和模型组予以蒸馏水灌胃,阳性药物组予以醋酸泼尼松片0.2 mg/kg灌胃,中药低、高剂量组分别予以六味地黄汤0.5、1 mg/kg灌胃,疗程为21 d。治疗结束后,采用HE染色法评估肾间质损伤,Masson染色法检测肾间质胶原蛋白沉积和纤维化,RT-PCR测定肾间质转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、针对半身不遂同源物2的重组母体(recombinant mothers against decapentaplegic homolog 2,Smad2)、Smad3、Smad7的mRNA表达,Western blot测定肾间质TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组的病理呈现系膜增生、间质增宽、胶原蛋白大面积沉积和明显纤维化,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05)。与模型组相比,阳性药物组和中药低、高剂量组的病理表现均减轻,且TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。与中药低剂量组相比,阳性药物组和中药高剂量组的TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。结论六味地黄汤能够减轻RIF大鼠的肾间质纤维化程度,且高剂量效果更佳,其机制可能与调控TGF-β及Smad家族蛋白表达有关。

NLRP3炎症小体在大鼠单侧输尿管梗阻引起肾间质纤维化中的作用及其机制

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体在大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化中的作用,并阐明其可能的作用机制。方法:健康雄性Wistar大鼠30只随机分为假手术组(n=6)和UUO组(n=24),假手术组大鼠仅分离输尿管不结扎,UUO组分别于术后3、7和14 d处死大鼠,并按照处理时间分为UUO 3 d组(n=8)、UUO 7 d组(n=8)和UUO 14 d组(n=8)。HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理形态表现,试剂盒检测各组大鼠肾组织中丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性和羟脯氨酸(HYP)水平,免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平,Western blotting法检测各组大鼠肾组织中NLRP3蛋白表达水平。结果:HE染色,UUO组大鼠出现明显肾小管扩张,肾间质水肿和增宽,可见较多炎症细胞浸润,部分肾小管腔内可见脱落的上皮细胞。与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠HE染色肾间质纤维化评分均明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组和UUO 7 d组比较,UUO 14 d组大鼠HE染色肾间质纤维化评分明显升高(P<0.05)。Masson染色,UUO组大鼠肾间质炎症细胞浸润明显,可见明显纤维组织增生;随UUO作用时间增加,大鼠部分肾小管消失,肾间质明显增宽,胶原沉积逐渐增多,皮髓交界处胶原沉积程度更加明显。与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠Masson染色肾间质纤维化评分均明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组和UUO 7 d组比较,UUO 14 d组大鼠Masson染色肾间质纤维化评分明显升高(P<0.05)。与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠梗阻侧肾组织中MDA水平均明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05)。与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠梗阻侧肾组织中HYP水平均明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组比较,UUO 14 d组大鼠梗阻侧肾组织中HYP水平明显升高(P<0.05)。免疫组织化学法,与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠肾组织中α-SMA蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组和UUO 7 d组比较,UUO 14 d组大鼠肾组织中α-SMA蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与假手术组比较,UUO 3 d组、UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠肾小管上皮细胞和肾小管间质组织中TGF-β1蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与UUO 3 d组比较,UUO 14 d组大鼠肾小管上皮细胞和肾小管间质组织中TGF-β1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。Western blotting法,与假手术组比较,UUO 7 d组和UUO 14 d组大鼠肾组织中NLRP3蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:NLRP3炎症小体在UUO大鼠肾纤维化过程中发挥重要作用,其作用机制与氧化应激增加和TGF-β1蛋白表达水平升高有关。

保肾通络方对糖尿病肾病小鼠肾小管间质纤维化及上皮细胞间充质转分化的影响

目的:观察保肾通络方对糖尿病肾病(DN)小鼠肾小管间质纤维化及上皮细胞间充质转分化(EMT)的影响。方法:选用KK-Ay小鼠作为DN模型小鼠,随机分为模型组、保肾通络方组及缬沙坦组,正常对照组小鼠选用C57BL/6J小鼠。保肾通络方组小鼠给予保肾通络方灌胃治疗,缬沙坦组小鼠给予缬沙坦灌胃治疗,模型组、正常对照组小鼠给予剂量相同的蒸馏水灌胃治疗;灌胃给药12周后检测各组血清肌酐、尿素氮水平,HE、PAS、Masson染色观察肾组织病理改变,同时进行细胞外基质蛋白CollagenⅠ、FN及肾小管EMT标志蛋白α-SMA、E-cadherin表达检测。结果:模型组小鼠血清肌酐、尿素氮水平较正常对照组明显升高(均P<0.05),保肾通络方组及缬沙坦组小鼠血清肌酐、尿素氮水平较模型组明显降低(均P<0.05)。与正常对照组相比,模型组小鼠肾小管出现明显的间质纤维化及上皮细胞脱落、空泡变性,而保肾通络方组及缬沙坦组小鼠上述病理改变均明显减轻。模型组小鼠肾小管CollagenⅠ、FN蛋白及mRNA表达较正常对照组明显上调(均P<0.05),保肾通络方组及缬沙坦组小鼠肾小管CollagenⅠ、FN蛋白及mRNA表达较模型组明显下调(均P<0.05)。与正常对照组相比,模型组小鼠肾小管上皮细胞α-SMA蛋白及mRNA表达明显上调,E-cadherin蛋白及mRNA表达明显下调(均P<0.05);与模型组相比,保肾通络方组及缬沙坦组小鼠α-SMA蛋白及mRNA表达明显下调,E-cadherin蛋白及mRNA表达明显上调(均P<0.05)。结论:保肾通络方能够改善DN小鼠肾小管间质纤维化,减轻肾小管EMT。

基于Wnt/β-catenin信号通路探索芪蛭通络方对糖尿病肾病大鼠肾间质纤维化的作用机制

目的:基于Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路探讨芪蛭通络方对糖尿病肾病(DKD)大鼠肾间质纤维化的作用机制。方法:SD大鼠予高糖高脂饲料及腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作DKD模型,取50只造模成功的大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组(每日14 mg/kg)和芪蛭通络方低、中、高剂量组(每日1.215 g/kg、2.430 g/kg、4.860 g/kg),每组10只。同时取10只SD大鼠予普通饲料和腹腔注射柠檬酸缓冲液,作为正常组。造模成功后,各给药组每日予相应药物灌胃,正常组和模型组每日灌胃等体积蒸馏水,各组均连续灌胃8周。收集处死前1 d各组大鼠24 h尿液,检测24 h尿蛋白定量(24 h-UTP);处死前尾静脉取血,测血糖(GLU);末次给药后5 h,各组大鼠予异氟烷吸入麻醉,腹主动脉取血,分离血清测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);取双肾,采用苏木素-伊红(HE)染色法、马松(Masson)染色法观察各组大鼠肾脏组织病理变化;分别采用免疫组化(IHC)法、蛋白免疫印迹(Westernblot)法检测各组大鼠肾组织Wnt1、β-catenin、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达。结果:模型组大鼠GLU、Scr、BUN、24 h-UTP水平均明显高于正常组(P<0.01),各给药组大鼠上述指标均明显低于模型组(P<0.01),芪蛭通络方高剂量组上述指标均明显低于厄贝沙坦组(P<0.01),芪蛭通络方对上述指标的改善作用表现出一定的剂量依赖性。病理图片显示,模型组大鼠肾小球结构遭到破坏,炎性改变明显,肾小管扩张,肾间质纤维化明显,肾组织蓝色胶原分泌增多且伴病理损伤;各给药组大鼠肾组织病理改变均有不同程度的改善,以芪蛭通络方高剂量组改善最为显著。免疫组化法及蛋白免疫印迹法结果显示,模型组大鼠Wnt1、β-catenin、CTGF、GSK-3β蛋白表达均明显高于正常组(P<0.01);各给药组大鼠上述蛋白表达均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。免疫组化法结果显示,芪蛭通络方高剂量组上述蛋白表达均明显低于厄贝沙坦组(P<0.05,P<0.01);蛋白免疫印迹法结果显示,芪蛭通络方高剂量组Wnt1、GSK-3β蛋白表达明显低于厄贝沙坦组(P<0.05,P<0.01),β-catenin、CTGF蛋白表达与厄贝沙坦组比较差异无统计学意义(P>0.05)。芪蛭通络方对上述蛋白的表达表现出一定的剂量依赖性。结论:芪蛭通络方可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,在一定程度上延缓肾间质纤维化,从而起到保护肾功能的作用。

驱动肾小管间质纤维化的新机制

肾纤维化,尤其是肾小管间质纤维化,是所有慢性肾脏疾病进展为终末期肾病的最常见途径。肾小管上皮细胞在受到慢性损伤后会发生糖脂代谢改变、未折叠蛋白反应、自噬和衰老、上皮细胞-间充质转化和细胞周期G2/M期停滞等几种适应性反应。修复机制适应不良,会诱导产生肾小管间质纤维化。本文将讨论肾小管上皮细胞的这些适应性反应驱动肾小管间质纤维化的分子机制,为探寻肾小管间质纤维化新的药物作用靶点提供参考。

尿酸盐在慢性肾病并发肾间质纤维化中的作用及机制

目的探讨尿酸盐在慢性肾病并发肾间质纤维化过程中的作用及机制。方法利用0.2%腺嘌呤的饲料喂养小鼠9周,构建慢性肾病小鼠模型。造模结束后,小鼠眼眶后静脉丛采血,检测肾功能和血尿酸含量;HE染色和PAS染色分析肾脏组织病理变化;Masson染色观察肾脏纤维化程度;尿酸盐染色观察肾组织中尿酸盐沉积;Western blot和免疫组化检测目标分子的表达变化。利用不同浓度尿酸刺激原代培养小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)及人肾小管上皮细胞系(HKC);划痕实验观察尿酸对细胞迁移的影响。结果动物水平上,生化分析检测结果显示,模型组小鼠血清尿素氮(P=0.0064)、肌酐(P=0.0080)、血尿酸(P=0.0007)水平较对照组明显增加;HE和PAS染色结果显示,模型组小鼠出现严重肾小管损伤及炎症细胞浸润;Masson染色结果显示,模型组胶原沉积明显增加;尿酸盐染色结果显示,与对照组比较,模型组小鼠肾组织出现大量尿酸盐结晶;Western blot和免疫组化结果显示,模型组小鼠波形蛋白、平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)水平较对照组升高,E钙黏蛋白水平较对照组降低。细胞水平上,划痕结果显示,尿酸刺激促进肾小管上皮细胞迁移;Western blot检测结果与免疫组化一致。结论尿酸可通过促进肾小管上皮细胞分泌TGF-β1,进而促进上皮-间质细胞转分化,加速肾间质纤维化的发生。

通络益肾方对UUO大鼠肾间质纤维化及piezo1的影响

目的探讨通络益肾方对单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾脏纤维化及压电式机械敏感离子通道组件1(piezo-type mechanosensitive ion channel component 1,piezo1)的影响。方法以UUO大鼠为模型,以通络益肾方为干预手段,以缬沙坦为阳性药,连续给药14天。观察大鼠血肌酐和尿素氮变化。采用苏木素—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,观察大鼠肾脏病理形态学变化。采用Ⅲ型胶原免疫组化评估大鼠肾间质纤维化程度。采用CD34免疫荧光观察大鼠肾脏肾小管周毛细血管(peritubular capillary,PTC)变化。采用免疫组化、免疫蛋白印记法和转录PCR观察大鼠肾脏piezo1及其下游分子mRNA以及蛋白表达改变。结果与假手术组相比,模型组血清肌酐和尿素氮水平升高(P<0.05),与模型组相比,缬沙坦组和通络益肾方组血清肌酐(P<0.05)和尿素氮(P>0.05)较低。与假手术组相比,模型组镜下观察肾间质纤维化改变明显,PTC明显减少,piezo1表达增加,经通络益肾方和缬沙坦干预后UUO大鼠肾脏间质纤维化程度改善,PTC增多,piezo1表达减少。与假手术组相比,模型组piezo1蛋白表达显著增加(P<0.05),通络益肾方和缬沙坦干预均能降低piezo1蛋白表达(P<0.05);与假手术组相比,模型组大鼠肾组织胎盘生长因子(placental growth factor,PlGF)表达增多(P<0.05);与模型组相比,缬沙坦组和通络益肾方组PlGF表达增多(P<0.05);模型组PlGF的受体血管内皮生长因子受体1(FMS-like tyrosine kinase 1,flt1)表达较假手术组减少(P<0.05),缬沙坦组与通络益肾方组与模型组相比flt1表达水平的升高。结论通络益肾方能明显改善UUO大鼠肾间质纤维化进展,其机制可能是通过下调piezo1蛋白表达,上调ADM、PlGF及其受体flt1表达,减轻PTC损伤,起到拮抗肾间质纤维化的作用。

沉默信息调节因子3调节肾间质纤维化过程中的细胞凋亡和有氧糖酵解

目的观察肾纤维化模型中沉默信息调节因子3(silent information regulator 3,Sirt3)的表达变化及有氧糖酵解水平变化,探讨Sirt3在肾间质纤维化中的作用及机制。方法野生型小鼠及Sirt3基因敲除小鼠分别构建单侧输尿管梗阻肾纤维化模型,对侧肾脏为假手术对照组。HE染色及Masson染色观察肾脏病理变化,蛋白质印迹法检测Sirt3、纤维化相关标志性蛋白(纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白)、有氧糖酵解关键酶(己糖激酶2、M2型丙酮酸激酶)及凋亡相关蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测肾小管上皮细胞凋亡;体外培养人肾小管上皮细胞,分为对照组和si-Sirt3组,转化生长因子β1处理细胞,蛋白质印迹法检测上述纤维化相关蛋白及有氧糖酵解关键酶的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡。结果在体内外纤维化反应中,肾小管上皮细胞凋亡和有氧糖酵解水平明显增加,Sirt3表达显著下调。而Sirt3基因敲除进一步加重了肾小管上皮细胞凋亡和异常的有氧糖酵解,促进了肾间质纤维化。结论Sirt3可能通过抑制肾小管上皮细胞有氧糖酵解减轻肾间质纤维化,在慢性肾脏病中发挥保护作用。

血红蛋白、基质金属蛋白酶-7水平与老年糖尿病肾病患者肾间质纤维化以及预后的关系分析

目的探讨血红蛋白(Hb)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)水平与老年糖尿病肾病患者肾间质纤维化(RIF)以及进展为终末期肾病(ESRD)的关系。方法选择2014年4月至2020年4月石家庄市第三医院肾内科收治的103例老年糖尿病肾病患者(肾病组),95例单纯糖尿病患者(糖尿病组),59例体检志愿者为对照组。所有患者均接受Hb、MMP-7、肾功能、RIF血清学指标检测,出院后随访至2022年4月,统计ESRD发生情况。Pearson分析Hb、MMP-7与肾功能、RIF血清学指标的相关性。Kaplan-Meier生存曲线分析不同Hb、MMP-7水平下糖尿病肾病患者肾脏累积存活率。单因素或多因素COX风险比例回归分析老年糖尿病肾病患者ESRD的危险因素。结果肾病组Hb、估算肾小球滤过率(eGFR)低于对照组(P<0.05),MMP-7、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、转化生长因子(TGF)-β1、TGF-α水平高于对照组(P<0.05)。肾病组Hb与eGFR呈正相关(P<0.05),与Scr、BUN、TGF-β1、TGF-α呈负相关(P<0.05),MMP-7与eGFR呈负相关,与Scr、BUN、TGF-β1、TGF-α呈正相关(P<0.05)。低Hb水平组无ESRD累积存活率低于高Hb水平组(P<0.05),高MMP-7水平组无ESRD累积存活率低于低MMP-7水平组(P<0.05)。多因素COX回归分析结果显示TGF-β1、TGF-α、MMP-7是糖尿病肾病患者ESRD的危险因素(P<0.05),Hb、eGFR是糖尿病肾病患者ESRD保护因素(P<0.05)。结论老年糖尿病肾病患者Hb水平降低,血清MMP-7水平增高,且与肾功能下降、RIF以及ESRD发生有关。

NLRP3炎症小体参与糖尿病肾病肾间质纤维化机制的研究进展

肾间质纤维化(RIF)是糖尿病肾病(DN)进展至终末期肾病的不可逆因素。慢性炎症是DN-RIF发病机制的关键原因,NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体作为重要的炎症调节因子,可通过炎症反应、氧化应激、自噬等机制促进DN-RIF的发生。本文对NLRP3炎症小体与RIF发生发展的机制及传统中药针对NLRP3炎症小体为靶点对RIF的治疗作用作一综述,以期对未来治疗RIF提供帮助。

当归芍药散含药血清及其有效成分对肾间质纤维化大鼠的作用及机制

目的 探讨当归芍药散(DSS)含药血清及其有效成分阿魏酸(FA)、芍药苷(PF)对肾间质纤维化(RIF)大鼠的作用及机制。方法 制备当归芍药散药液,以低剂量(0.05 mL DSS药液/10 g体质量)、中剂量(0.1 mL DSS药液/10 g体质量)、高剂量(0.2 mL DSS药液/10 g体质量)每日同一时间灌胃雄性Sprague Dawley大鼠,持续7 d,腹主动脉取血获得相应低、中、高剂量DSS血清(DSSS)。将大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)分成对照组、模型组(TGF-β处理)、siRNA转染组(TGF-β+siRNA处理)、FA组(TGF-β+FA处理)、PF组(TGF-β+PF处理)及DSSS低、中、高剂量组(TGF-β+DSSS-L、TGF-β+DSSS-M、TGF-β+DSSS-H分别处理)。筛选并确定DSSS、FA、PF、TGF-β对NRK-52E细胞的干预浓度,对以上各组NRK-52E细胞进行干预。采用Western blotting法检测各组NLRP3、半胱氨酸蛋白酶1(CASP-1)、Gasdermin D(GSDMD)、白细胞介素-18(IL-18)、纤连蛋白(FN)、E型钙黏蛋白(E-Cadherin)、N型钙黏蛋白(N-Cadherin)的蛋白表达变化。结果 相较于模型组,DSSS、FA、PF治疗组细胞焦亡相关蛋白NLRP3、CASP-1、GSDMD、IL-18表达均降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。DSSS中、高剂量及FA、PF治疗组相较于模型组纤维化相关黏附蛋白FN、E-Cadherin、N-Cadherin表达降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 当归芍药散含药血清及有效成分FA、PF可抑制TGF-β诱导的NRK-52E细胞纤维化模型中NLRP3介导的焦亡蛋白激活,并能调节黏附蛋白表达和上皮-间质转化进展,缓解纤维化。

中药通过PI3K/Akt信号通路干预肾间质纤维化的研究进展

肾间质纤维化(RIF)是慢性肾病的主要病理表现结果,由于其发生机制复杂,临床上尚无特效治疗措施。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的异常激活及其下游靶基因的活化是RIF发生进展的关键诱因。中药具有药效确切、毒副作用小等特点,可多靶点、多途径协同调控RIF的发生进展。本文以PI3K/Akt信号通路为核心,对中药在RIF治疗中的作用靶点及调控机制进行归纳,发现多种中药有效成分(如青藤碱、芒果苷、圆锥绣球提取物等)以及复方(如复肾功方、气邦益肾方等)可通过该通路抑制成纤维细胞增殖、改善炎症反应与氧化应激、维持线粒体稳态、减缓铁死亡发生等,从而延缓RIF的发生进展。

线粒体损伤与糖尿病肾病肾间质纤维化的研究进展

糖尿病肾病(DN)是一种与糖尿病相关的微血管并发症,在长期高血糖环境下,肾脏细胞会发生氧化应激和炎症反应。肾间质纤维化(RIF)作为一种病理过程,涉及肾小管间质结构和功能的改变,会导致肾脏功能逐渐丧失,是DN发展的最终结果,且患者预后与RIF程度密切相关。线粒体损伤可引起细胞能量代谢障碍和氧化应激,而肾间质中线粒体数量远多于其他组织,早期病变也多以线粒体损伤为主。因此,早期发现线粒体损伤并进行干预对延缓RIF的发展至关重要。

中药单体靶向TGF-β 1/Smad信号通路防治肾间质纤维化研究进展

肾间质纤维化(RIF)是慢性肾脏病(CKD)的主要病理学基础,是各种肾脏疾病进展至终末期肾病的最终共同途径,以细胞外基质(ECM)在肾间质中异常沉积为特征。RIF是多种信号通路相互作用的结果,其中TGF-β 1/Smad具有调控细胞增殖、分化、凋亡、自噬等作用,是RIF的主要信号转导通路。受损组织的修复再生有赖于瞬时信号通路的激活,但持续的信号激活会刺激纤维瘢痕增生并替代正常的肾单位,损伤肾功能 [1] 。目前西医对于RIF的治疗多选用RAAS阻断剂,但其在延缓CKD进展方面的有效率仅为20%左右 [2] ,这在临床上造成很大的局限性。

根皮素通过抑制FAK改善肾小管间质纤维化

目的探究根皮素能否通过抑制黏着斑激酶(FAK)改善肾小管间质纤维化。方法肾小管上皮细胞NRK-52E经TGF-β1(10 ng/mL)诱导建立肾纤维化细胞模型,并构建单侧输尿管梗阻(UUO)肾间质纤维化小鼠模型。通过免疫荧光及Western blot法检测细胞及小鼠肾脏组织中α-SMA、FN的蛋白表达水平,明确根皮素体内外抗肾纤维化作用;检测实验小鼠血清中肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平,分析根皮素的肾保护作用;以苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察根皮素对UUO小鼠肾脏病理学改变和胶原纤维沉积的影响;Western blot检测TGF-β1诱导的NRK-52E细胞和UUO小鼠肾组织中FAK、p-FAK的蛋白表达水平;通过分子对接预测根皮素与FAK蛋白的潜在结合模式和结合能力;使用FAK抑制剂PND-1186,探究根皮素改善肾间质纤维化的作用机制。结果根皮素可逆转TGF-β1所致的肾小管上皮细胞及UUO小鼠肾组织中α-SMA、FN的蛋白表达水平升高,且显著降低UUO小鼠血清中Cr、BUN水平,改善UUO小鼠肾小管扩张、炎性细胞浸润及间质胶原沉积;根皮素可以显著抑制UUO小鼠肾组织中FAK、p-FAK蛋白的表达水平,分子对接提示根皮素与FAK蛋白之间具有良好相互作用。根皮素与PND-1186均可改善TGF-β1诱导的NRK-52E细胞纤维化。结论根皮素通过抑制FAK信号通路在体内外发挥抗肾间质纤维化作用。

线粒体自噬对肾间质纤维化作用的研究进展

线粒体自噬是普遍存在于哺乳动物中的一种由多种信号通路参与的复杂的生理过程。当机体受到缺氧、去极化等应激因素胁迫时,可诱发线粒体自噬机制。肾间质纤维化(RIF)是肾脏疾病发展至终末期的必经病理过程,研究发现,线粒体自噬与RIF病程进展密切相关,且线粒体自噬靶向治疗RIF已成为防治RIF研究的前沿方向,因此,有必要进一步阐述线粒体自噬与RIF的关系。该文就线粒体自噬的调控机制、线粒体自噬对RIF的作用以及RIF的线粒体自噬调控通路的研究进行了梳理与总结,以期为线粒体自噬靶向治疗RIF以及新药物的研发提供参考依据。

丹皮酚对大鼠肾间质纤维化的影响及其分子机制

目的研究丹皮酚(PAE)对大鼠肾间质纤维化的影响及其作用机制。方法将大鼠随机分为假手术(Sham)组、单侧输尿管梗阻(UUO)组、PAE小剂量(PAE-L)组、PAE中剂量(PAE-M)组、PAE大剂量(PAE-H)组及厄贝沙坦(IRB)组。除Sham组外,其余大鼠制备UUO模型。各组大鼠给予相应药物干预2周。检测血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、血清8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)、沉默信息调节因子1(SIRT1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达情况;观察肾组织病理特征,计算肾组织胶原容积分数(CVF)。结果与UUO组比较,PAE各剂量组大鼠血清Scr、BUN、8-OHdG水平降低,肾组织SOD与GPX活性升高,肾组织α-SMA、Col-Ⅰ、FN阳性表达降低,SIRT1与Nrf2蛋白表达升高,Masson染色显示肾组织CVF降低(均P<0.05),苏木精-伊红(HE)染色显示肾组织炎症细胞浸润、肾小管扩张等病理改变有不同程度改善;PAE改善大鼠肾间质纤维化作用呈剂量依赖性(P<0.05),大剂量PAE改善大鼠肾间质纤维化作用与IRB相当。结论PAE可减轻UUO所致大鼠肾间质纤维化,改善大鼠肾功能和氧化应激,其机制可能与激活SIRT1/Nrf2信号通路有关。

龙胆苦苷腹腔注射对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化的改善作用及其机制

目的 探讨龙胆苦苷(GPS)对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的改善作用及其机制。方法将25只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组、模型对照组、GPS低剂量组、GPS高剂量组、厄贝沙坦组,每组各5只。假手术组正常饲养,其余四组采用结扎单侧输尿管的方式建立UUO模型。造模成功后,GPS低、高剂量组分别给予0.1、0.2 g/kg GPS腹腔注射,厄贝沙坦组给予0.02 g/kg厄贝沙坦腹腔注射,模型组和假手术组给予等体积生理盐水腹腔注射,连续7 d。处死小鼠,取肾脏组织,采用HE染色法观察肾组织形态学变化,Masson染色法观察肾组织纤维化情况,采用Western blotting法、RT-qPCR法检测肾组织纤连蛋白(Fn)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白及mRNA表达。另取6只小鼠,随机分为模型组和干预组各3只,建立UUO模型后,干预组给予0.2 g/kg GPS腹腔注射,模型组给予等体积生理盐水腹腔注射,连续7 d。处死小鼠,取肾脏组织进行转录组测序,分析两组差异表达基因,并进行GO和KEGG通路富集,最后采用RT-qPCR法进行验证。结果 与假手术组比较,模型对照组肾小管明显扩张,肾组织大量炎性细胞浸润,肾间质大量胶原纤维沉积;与模型对照组比较,GPS低、高剂量组肾脏组织肾小管扩张、炎性细胞浸润有一定程度减轻,肾间质纤维化改善,其中GPS高剂量组改善效果更明显。与假手术组比较,模型对照组肾脏组织Fn、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均升高;与模型对照组比较,GPS低、高剂量组肾脏组织Fn、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均降低,且GPS高剂量组低于低剂量组(P均<0.05)。测序分析结果显示,模型组与干预组存在710个差异表达基因。GO富集分析显示,差异表达基因主要集中在细胞进程、生物调节、生物进程调控等方面;KEGG通路富集分析发现,差异表达基因涉及Ras、Rap1、PI3K/AKT、MAPK信号通路等。筛选出2个有效基因HGF、CCDC3进行验证,干预组肾组织HGF、CCDC3表达水平较模型组升高(P均<0.05),与测序结果一致。结论 GPS能够有效改善UUO小鼠肾脏纤维化,且高剂量GPS改善作用更明显;其作用机制可能与上调HGF及CCDC3表达作用于Rap1、Ras、PI3K/AKT、MAPK信号通路等生物学途径有关。

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨柴胡皂苷B2对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响。方法大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、依那普利(10 mg/kg)组和柴胡皂苷B2低、中、高剂量组(5、10、20 mg/kg),每组12只。除假手术组外,其余5组建立单侧输尿管梗阻(UUO)模型,各组灌胃给予相应药物,每天1次,连续给药2周。全自动生化分析仪检测大鼠血清中血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平,ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-1β水平,Masson染色观察大鼠肾组织病理学变化,试剂盒检测大鼠肾组织中肾上腺髓质素(ADM)水平,免疫组化法检测大鼠肾组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)阳性表达,Western blot法检测大鼠肾组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB、NLRP3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肾组织可见肾小管扩张,上皮细胞出现部分空泡化,肾间质内大量炎性细胞浸润、纤维细胞生成及胶原纤维沉积,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平、肾组织TGF-β1阳性表达、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达升高(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达降低(P<0.05);与模型组比较,柴胡皂苷B2各剂量组大鼠肾脏病变逐渐减轻,血清BUN、Scr、TNF-α、IL-1β水平,肾组织TGF-β1阳性表达,TLR4、p-NF-κB/NF-κB、NLRP3蛋白表达均降低(P<0.05),肾组织ADM水平、E-cadherin阳性表达均升高(P<0.05);与柴胡皂苷B2高剂量组比较,依那普利组上述指标无明显变化(P>0.05)。结论柴胡皂苷B2能够缓解UUO大鼠肾间质纤维化,改善肾功能和炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的表达有关。