自体移植脾组织血脾屏障重建的实验研究

目的 观察自体移植脾组织再生过程中血脾屏障重建的变化规律 ,进一步认识自体移植脾组织再生的结构特征。方法 取Wistar大鼠 70只 ,体重为 10 0～ 12 0g ,雌雄各半 ,在无菌条件下行脾切除自体脾组织移植术。分别于术后 7、14、3 0、60、90、12 0、180d取移植脾组织制片 ,在光镜和透射电镜下观察移植脾组织的再生和血脾屏障的重建过程。结果 自体移植脾组织血脾屏障的重建 ,经历了无血脾屏障结构期、血脾屏障重建期和血脾屏障稳定期。结论 自体移植脾组织再生的同时重建了结构较完整的血脾屏障。

大鼠肝表面移植脾片细胞免疫学研究

目的 :观察不同时期肝表面移植脾片的细胞免疫学情况以及移植前后脾片量的变化 ,对肝表面脾片移植进行综合评价。方法 :以Wistar大白鼠为研究对象 ,流式细胞仪检测移植脾片的T淋巴细胞总数、活化T细胞数、T辅助细胞数、T抑制细胞数。结果 :8周组CD3+CD8、CD4与对照组比 ,P <0 .0 5 ,4周组与任一组比 ,P <0 .0 1,脾片重量 6～ 8周均明显低于移植前 (P <0 .0 1)。结论 :肝表面移植脾片 6周及 8周各项T淋巴细胞数达到正常脾脏水平 ,脾片重量较移植前有所减轻。脾片成活理想。

外源性VEGF对自体移植脾组织血管再生的影响

目的探讨应用外源性VEGF促进自体脾组织移植后血管再生与结构重建的影响，为VEGF用于自体移植脾组织的实验研究和临床应用提供理论参考依据。方法采用216只昆明种小白鼠随机分为脾切除自体脾组织移植组和假手术组，再将脾移植组分为实验组和对照组。实验组小鼠分别于术后7、14、30、60d于尾静脉内注射VEGF，注射后7、15、30、60、90d取脾组织标本。进行组织学观察、血管面密度测定、免疫组化染色方法KDR的检测、KDR阳性细胞密度测定、组织原位杂交技术KDR mRNA检测。结果术后7、15、30d注射VEGF组注射VEGF后较对照组的血管数量明显增多；术后60d注射VEGF组注射VEGF后与对照组各时相点的组织学特征没有明显差别；术后7、15、30d注射VEGF组KDR面积密度值高于对照组，术后60d注射VEGF组KDR面密度值与对照组比较无显著差别；术后7、15、30d注射KDR mRNA表达阳性细胞密度高于对照组，术后60d注射VEGF组KDR mRNA表达阳性细胞密度与对照组比较没有明显差异。结论外源性VEGF能够促进移植脾组织内血管生长，自体脾组织移植术后7～15d开始静脉应用VEGF足促进血管再生的较理想时间；外源性VEGF可能是通过与移植脾组织内所表达的KDR结合发挥作用。

小鼠脾保留和自体移植脾组织抗疟原虫感染的超微结构动态观察

目的探讨脾脏在急性疟原虫感染中所发挥的作用和移植脾组织的结构和功能。方法 90只昆明株小鼠分为假手术组、半脾保留组和半脾移植组。手术后 3个月经疟原虫感染后动态进行组织学观察。结果各组脾脏病理变化基本一致 ,感染中期脾脏红髓内分化增殖的网状细胞与网状纤维连接成网状支架 ,和被其包围的各种血细胞共同构成血脾屏障 ,从而保护了机体。结论在疟原虫作用下 ,移植脾组织与保留脾组织变化近似 。

彩色多普勒超声对脾自体包埋移植术后移植脾的监测研究

目的:应用彩色多普勒诊断技术,对35例外伤后脾切除脾自体包埋移植术后的移植脾片进行观察,旨在监测其存活状态。方法:应用彩色多普勒超声诊断仪,探头频率3.5MHz～7.5MHz。对35例外伤后脾切除脾自体包埋移植术患者的移植脾片进行动态监测。结果:术后6～12d,35例患者中的32例(91.5%),可探及移植脾片回声。其探及血流信号时间为术后15～60d。6个月后其内动脉流速VA9.48±2.16cm/s;静脉流速Vv3.19±0.97cm/s。)2例患者(5.7%)术后半年左右移植脾片形态欠整,回声欠清或形态不整内部回声不均增强,无血流信号显示;另1例(2.8%)患者术后8d出现局部疼痛,见脾片移植处回声减低继之出现无血流信号的不规则无回声暗区,经外科及时处置后,上述回声渐消,但脾片回声探查不清。结论:彩色多普勒超声无创实时、简捷、重复性好,不仅可在第一时间内提供移植脾片存活的直接证据,而且还可指导对症治疗措施的选择与及时实施,具有重要的临床意义。

自体移植脾组织内GAP-43神经的生成机制

为探索自体移植脾组织内GAP-43神经的再生机制,将Wistar大鼠42只随机分为实验组和对照组。实验组切除脾脏以后,切取1／2脾脏,切成1 mm×1 mm×1 mm大小的组织块植入大网膜内,术后7、14、30、60、90、120、180 d取脾组织标本通过原位杂交检测GAP-43 mRNA、NGF mRNA和TrkA mRNA,同时进行免疫组化染色观察GAP-43神经。对照组手术松动脾脏,在术后相同时间点取脾组织作对照观察。结果显示:术后30 d检测到移植脾组织内有GAP-43 mRNA、NGF mRNA和TrkA mRNA表达,90 d达高峰后开始下降;术后60 d明显可见GAP^43染色阳性神经纤维,90 d密度最大,主要存在于血管周围,以后无明显改变。结果提示:自体移植脾组织内GAP-43神经再生与内源性NGF和TrkA表达密切相关。

^(99)Tc^m-热变性红细胞脾显像监测自体移植脾功能的价值

目的 探讨放射性核素脾显像监测自体移植脾成活及功能状态的价值。方法 对１７例接受脾切除和自体脾移植的患者，于术后早期进行９９Ｔｃｍ热变性自体红细胞脾显像，其中１２ 例术后３～５ 个月再次显像，与同期外周血中Ｔ细胞亚群ＣＤ３ 、ＣＤ４ 、ＣＤ８ 含量和ＣＤ４／ＣＤ８ 比值对比分析。结果 术后早期移植脾片的影像模糊，放射性聚集程度低于肝脏水平；术后３ 个月再次显像时，移植脾片清晰可辨。术后１ 周ＣＤ３ 、ＣＤ４ 、ＣＤ８ 和ＣＤ４／ＣＤ８ 均明显低于对照组，至术后３ 个月恢复正常。此与移植脾在术后经历“坏死、再生、生长”的组织学变化过程相吻合。

自体移植脾组织神经肽Y阳性神经纤维再生的实验研究

目的 研究自体脾组织移植术后不同时相神经肽Y阳性 (NPY+ )神经纤维的再生规律。方法 健康Wistar大鼠 5 6只 ,雌雄不限 ,体重 10 0～ 12 0 g ,随机分为实验组及假手术组 ,术后 7,14 ,3 0 ,60 ,90 ,12 0 ,180d取两组脾组织 ,行免疫组化抗NPY抗体染色及图像分析定量测定。 结果 术后3 0d内 ,自体移植脾组织无NPY+ 神经纤维 ;术后 60d ,NPY+ 神经纤维出现于移植脾组织周边区域 ;术后 90d ,NPY+ 神经纤维向移植脾组织中央实质区伸展 ;术后 12 0～ 180d ,移植脾组织内NPY+ 神经纤维分布及密度均接近正常。 结论 自体脾组织移植后可实现NPY+ 神经纤维再生 ;再生神经纤维来源于移植脾组织周围大网膜。

大鼠自体移植脾组织再生的形态学研究

目的 :探讨大鼠自体移植脾组织血管神经再生过程、VEGF及KDR表达的变化。方法 :采用Wistar大鼠 10 5只 ,行脾切除自体脾组织大网膜内移植术 ,分别于术后 7、14、3 0、60、90、12 0、180d ,采用免疫组化VEGF、KDR、NPY+ 神经纤维抗体染色方法 ,应用光镜、透射电镜、图像分析观测自体移植脾组织。结果 :自体脾组织移植术后 7d即有血管长入移植脾组织 ,180d再生血管接近正常 ;术后 3 0d神经开始再生 ,180d趋于正常 ;术后 7、14dVEGF、KDR阳性染色细胞密度迅速升高 ,60d达高峰 ,180d趋于正常 ;术后 3 0d出现NPY+ 神经纤维 ,12 0、180dNPY+ 神经纤维广泛分布。结论 :移植脾组织再生血管神经来源于大网膜 ;移植脾组织内VEGF、KDR表达量早期升高 ,血管再生完成时恢复正常水平 ;

外源性VEGF对自体移植脾组织血管再生的影响

目的:观察外源性VEGF对自体脾组织大网膜内移植后血管再生过程影响。方法:198只昆明种小白鼠随机分为脾切除自体脾组织大网膜内移植组及假手术组,将脾切除自体脾组织大网膜内移植后的小鼠再随机分为实验组(应用外源性VEGF组)和对照组(不用外源性VEGF组)。实验观察组小鼠分别于术后7、15、30d于尾静脉内注射VEGF,最后一次注射后1、7、14、30、60、90d各处死5只,取脾组织标本;对照组于术后观察上述对应时相点后各处死3只,取脾组织标本,进行墨汁灌注血管面密度测定。结果:术后7、15、30d注射VEGF后,较对照组的血管数量明显增多,墨汁灌注显示,实验观察组血管面密度较对照组明显增大。结论:外源性VEGF能够促进移植脾组织内血管生长,改善移植脾组织的血液循环,有利于移植脾组织再生,使其结构恢复更趋完善。

丹参对移植脾再灌注损伤保护作用的实验研究

目的:研究丹参对移植脾再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:采用套管法建立大鼠脾移植模型。分别用丹参加乳酸林格液、WMO-1号液、丹参加WMO-1号液灌注保存移植脾:保存2h后重建移植脾血供:再灌注3 h后切取移植脾。比较三组移植脾的阳性凋亡细胞数、细胞间黏附分子-1(ICAM-1,CD54)免疫阳性微血管数、超氧化物歧化酶(SOD)活力值和丙二酰二醛(MDA)的含量。结果:与其他两组相比,丹参加WMO-1号液灌注保存组移植脾的阳性凋亡细胞数、ICAM-1免疫阳性微血管数、MDA含量显著降低(P＜0．01),SOD活力值显著增高(P＜0．01)。结论:丹参通过抗自由基、抑制细胞凋亡、降低ICAM-1表达等机制对移植脾再灌注损伤起保护作用。

小鼠自体移植脾组织内巨噬细胞吞噬功能的观察

目的：观察移植脾组织内巨噬细胞的吞噬能力，以求直接评估自体移植脾组织的免疫功能。方法：３３只雄性昆明种小鼠随机分为移植组和假手术组，术后６月静脉注射岩碳粒后在不同时相点取脾组织切片观察巨噬细胞吞噬碳粒的情况。结果：自体移植脾组织内巨噬细胞具有与原位脾同等的吞噬能力。

大鼠自体移植脾组织GAP-43^+神经再生的实验研究

目的 研究大鼠自体脾组织移植术后移植脾组织GAP 43 + 神经纤维再生及分布规律。方法 健康Wistar大鼠 10 5只 ,随机分为自体脾组织移植组和对照组 ,于术后 7、15、3 0、60、90、12 0、180d取移植脾组织标本 ,应用免疫组化方法显示GAP 43 + 神经纤维 ,并用图像分析系统 ,对不同时相点免疫组化GAP 43 + 染色区域进行图像定量分析。结果 自体脾组织移植术后 3 0d ,移植脾组织周围大网膜内可见GAP 43 + 神经纤维 ,并向移植脾组织内伸展 ;自体脾组织移植术后 60～ 12 0d ,移植脾组织内再生神经纤维逐渐增多 ;术后 180d ,移植脾组织中GAP 43 + 神经纤维分布及密度接近正常。结论 GAP 43 + 神经纤维于脾移植术后 60d开始出现 ,术后 180dGAP 43 +

自体脾移植及食管横断吻合术治疗肝硬化门静脉高压症移植脾的MRA远期观察

目的:通过三维动态对比增强磁共振血管成像(three-dimensional dynamic contrast-enhanced MRA,3D- DCE MRA)检查移植脾的远期变化。方法:对行自体脾移植及食管横断吻合术后随访2年以上的17例PHT病人,行3D-DCE MRA检查,观察移植脾的成活、血液供应、与腹膜后组织中建立侧支循环的情况。结果:所有受检查病人的移植脾成活良好,并与腹膜后的静脉建立成广泛的侧支循环。结论:见腹膜后移植脾大小合适、血供良好、与周围组织建立了广泛的侧支循环,未见移植脾再行肿大。

自体移植脾组织的血流量及形态学的变化

对自体移植脾的组织量和血流量以及形态学进行动态观察。实验用大鼠分别于术后３、５、７、１２月通过生物微球法对每只动物保留１／４原位脾和移植半脾进行检测。结果得出，自体移植牌组织各时相点的单位重量血流量、血容积和吞噬指数与原位保留的相差不显著、原位保留的残脾重量代偿性增加，但移植脾组织量明显减轻，因而移植脾的绝对血流量也相应减少，揭示移植脾组织应尽量增多。镜检移植脾组织随着时间推移显示正常结构。

移植脾组织血管神经生成规律的动态观察

目的:观察自体脾组织大网膜内移植后,移植脾组织血管神经再生过程中血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体及神经肽Y表达的动态变化,分析自体移植脾组织血管神经生成规律。方法:实验于2004-09/2006-10在解放军第三军医大学基础部外科应用解剖与手术学教研室实验室完成。①选用Wistar大鼠70只,按随机数字表法分为7个时相组,每组10只。②行脾切除自体脾组织大网膜内移植,分别于术后7,14,30,60,90,120,180d,采用免疫组化血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体、神经肽Y阳性神经纤维抗体染色方法,应用光镜、电镜、图像分析观测自体移植脾组织。结果:70只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①自体脾组织移植术后7d即有血管长入移植脾组织,180d再生血管接近正常;术后30d神经开始再生,180d趋于正常。②术后7,14d血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体阳性染色细胞密度迅速升高,60d达高峰,随后逐渐降低;术后30d出现神经肽Y阳性神经纤维。术后180d血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体阳性染色细胞密度趋于正常;术后120,180d神经肽Y阳性神经纤维广泛分布。结论:自体移植脾组织再生过程中移植脾组织再生血管神经来源于大网膜内的神经。自体移植再生脾组织内血管内皮细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子受体表达量早期开始升高,移植脾组织先出现血管再生,后出现神经再生。

^(99m)T_c对移植脾显像的临床观察

本文介绍了用放射性核素脾扫描对因脾外伤切脾后行自体脾移植35例患者中的18例进行了扫描观察。并介绍其扫描方法,通过临床观察,说明本法较B超,x线摄片等优越。^(99m)T。标记热变性红细胞不失为观测移植脾存活生长情况的一种切实可行的措施。

大鼠大网膜移植脾片细胞免疫学研究

目的 研究大网膜不同移植脾片量的再生量及再生脾片的细胞免疫情况。方法 流式细胞术检测脾片移植前后 CD3、CD3+CD2 5、CD4、CD8、CD4/ CD8变化。结果 检测 4周组各项免疫指标明显低于其它各组 P<0 .0 1,8周大小块脾片移植组 CD3+CD2 5高于对照组 ;大块脾片组 6、8周重量低于对照组。 结论 大网膜移植脾片不论重量如何 ,其再生过程是一样的 ,再生脾片免疫细胞数也是基本相似 ,达到正常脾脏水平。