生孢梭菌CFU计数培养基的研制

目的:研制一种适宜生孢子梭状芽孢杆菌(简称生孢梭菌)菌落形成单位(Colony Forming Units,CFU)计数的微生物培养基(简称培养基),使其CFU计数能够接近最大活菌数。方法:将生孢梭菌接种于硫乙醇酸盐培养基(不含琼脂),置35℃培养24-48h;将生孢梭菌的新鲜培养物置无菌离心管中,500r·min^(-1)离心5min。取上层菌液,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至与标准比浊管相同浓度,并作10倍系列稀释至1×10^(-6)备用。将上述菌液分别浇注混匀于琼脂浓度为0.5%,0.6%和0.7%的3个生孢梭菌CFU计数研究培养基(简称3个生孢梭菌CFU计数研究培养基),置厌氧条件下35℃培养。优选18h进行CFU/mL计数并观察菌落形态,优选琼脂浓度为0.5%的上述培养基作为生孢梭菌CFU计数培养基并与其他5个培养基进行生孢梭菌CFU计数的比较试验。将上述菌液采用浇注法和L棒涂抹法接种于上述6个不同的培养基,置不同培养条件及培养时间进行生孢梭菌的CFU计数。结果:生孢梭菌CFU计数培养基,浇注法接种,在厌氧条件下35℃培养18h,CFU计数最多,且菌落形态良好,可能最接近最大活菌数。结论:新研制的生孢梭菌CFU计数培养基是目前最适于生孢梭菌CFU计数的培养基。

水华蓝藻噬藻体对不同条件培养的宿主细胞感染性分析

在从武汉东湖水样中培养分离水华蓝藻噬藻体(Planktothrix agardhii Virus from Lake Donghu,PaV-LD)的基础上,对在不同条件培养的宿主蓝藻细胞中,PaV-LD增殖效率及裂解作用进行了测定分析。分别将PaV-LD接种到生长期、半连续培养更新率或光照不同的宿主蓝藻液中,并采用稀释培养计数(Mostprobable number,MPN)方法与电镜观察,测定子代PaV-LD释放量及宿主细胞的裂解作用。结果显示:对数生长期宿主蓝藻单个细胞中子代PaV-LD的平均释放量为350感染单位(Infectious Units,IU/cell),显著高于稳定生长期的平均释放量110 IU/cell。在用新鲜培养基更新率为0%、35%、50%和65%的半连续培养宿主蓝藻中,接种PaV-LD 5d之后,噬藻体的释放量分别约为50 IU/cell、70 IU/cell、220 IU/cell或310 IU/cell,表明子代PaV-LD释放率随培养基更新率的增加而显著提高。在光照条件下感染3—4d后,宿主蓝藻细胞充分裂解,并释放大量子代PaV-LD,滴度可由初始7.00×103IU/mL快速增加到8.56×107IU/mL;但在遮光条件下,同样感染的蓝藻细胞未见裂解,也检测不到释放的子代噬藻体。电镜观察显示,在光照条件下感染的蓝藻细胞类囊体膜结构消失,而大量子代PaV-LD颗粒主要分布在原有类囊体的部位。显然,宿主蓝藻细胞的培养条件和状态可能对获得噬藻体纯培养有决定性影响。

细菌繁殖与计数新方法的实验研究

目的 比较不同的细菌繁殖方法、细菌计数方法 ,精确得出细菌数量 ,提高实验的准确性与可重复性。 方法 比较温床和摇床液体培养 ,用液体稀释法测菌落、光电比色法测光密度 OD值和麦氏比浊分别测定其细菌数量。 结果 光电比色法简便和稳定 ,便于操作。 结论 通过光电比色法测出的 OD值 ,判定细菌数量 ,提高了实验的稳定性。

微生物菌落计数不确定度的评定

微生物存在于样品中，一般的以单个菌体形式、也可以集团菌体形式存在。在检测过程中，样品中微生物菌落计数受到培养基质量、操作环境、稀释溶液、培养温度、观察结果时间和操作人员技能等因素的影响，使实验检测的结果离散度大。本次实验研究采用“微生物检测质量控制标样”，在同一时间段内，应用同一批次的培养基和试剂，按相同的检验过程，进行“微生物检测质量控制标样”检测，探讨微生物菌落计数的不确定度。现将结果报告如下。

稀释涂布平板法计数微生物的四大误区

稀释涂布平板法是一种常见的微生物计数方法,该方法通过统计平板上的菌落数推测样品中活菌个数,其原理是将待测样品稀释适当倍数,使样品中的微生物细胞分散开,再取一定量的稀释液均匀涂布到固体培养基表面,让分散开的单个细胞繁殖得到一个菌落,这样就可以通过肉眼可见的菌落数推理肉眼不可见的微生物细胞数.

鸡马立克氏病疫苗蚀斑计数的影响因素

实验中对影响鸡马立克氏病疫苗蚀斑计数的部分因素进行了摸索。结果表明不同培养时间的细胞、不同的疫苗稀释方法和不同的培养温度与时间等测定的蚀斑的含量有一定的差异 ,而用含琼脂糖营养液覆盖与不覆盖培养法及在含 5%CO2

提高菌落计数准确率的一种简便方法

在化验室工作中,菌落计数是检验中常做的一个项目。一般计数时,常利用肉眼观察并计算平皿中菌落的数目。但是样品和营养琼脂培养基中常常带有与菌落形态相似的微小渣子,所以为计数带来许多不便。在稀释度为百倍的平皿中,多数一个渣子或漏数一个菌落,其误差就为100倍,稀释度越高,误差也就越大。因而在这种情况下就不能准确地反映出产品的真实卫生质量。

微孔板稀释法在活菌培养计数中的应用观察

目的以96孔板微量稀释法代替传统试管稀释法建立了新的活菌计数方法(也简称新方法或96孔板计数法),通过两种活菌培养计数方法的比较,验证新方法的准确性、快捷性。方法对新方法的不同吹吸次数进行比较,选择最佳的吹吸次数。用两种活菌培养计数方法同时对同一管枯草杆菌黑色变种芽孢悬液进行计数,验证新方法的准确性;不同实验技术人员同时对同一管枯草杆菌黑色变种芽孢悬液用96孔板进行系列稀释,用滴液计数法计数,比较不同人员操作的误差率;用两种活菌培养计数方法对同一种消毒剂进行中和剂鉴定试验,验证新方法在消毒效果检测中应用的可行性。结果经不同吹吸次数的误差率比较,20次为最佳吹吸次数;96孔板微量计数法对枯草杆菌黑色变种芽孢悬液计数结果与传统方法计数结果一致;3名不同实验技术人员采用新方法同时对一管菌悬液计数,3人之间的误差率为1.69%,符合2002年版《消毒技术规范》要求,且误差率远低于新入职实验技术人员用传统方法对枯草杆菌黑色变种芽孢悬液活菌培养计数结果;在一种消毒剂的中和剂鉴定试验中,新方法与传统方法活菌培养计数结果一致。结论新的活菌计数法计数结果与传统活菌培养计数结果一致,且不同实验技术人员之间的误差率很小,新的培养计数方法可以应用到消毒剂悬液定量杀菌试验中,且采用新的培养计数方法更方便、快捷,节省时间,对实验人员技术要求不高,适合进一步推广。

稻田温室气体排放与土壤微生物菌群的多元回归分析

为揭示多种田间管理措施综合影响下双季稻田温室气体平均排放通量与土壤微生物菌群的多元回归关系,利用静态箱—气相色谱法和稀释培养计数法进行了温室气体排放通量和土壤产气微生物菌群数量的连续观测。2a研究结果显示,稻田甲烷排放通量与土壤微生物总活性和产甲烷菌数量关系密切,甲烷排放通量与二者的关系可分别由指数和二次多项式模型拟合。一元回归分析表明,仅产甲烷菌数量就能单独解释96.9%的稻田甲烷排放通量变异(R2=0.969,P<0.001),但考虑两种因素的二元回归拟合优度高于一元回归(R2=0.975,P<0.001)。氧化亚氮排放通量与土壤硝化细菌和反硝化细菌数量也密切相关(P<0.05),氧化亚氮排放通量与二者的二元非线性混合回归模型可以解释至少70.4%的稻田氧化亚氮排放通量(R2≥0.704,P<0.001),其拟合优度也高于一元回归。稻田温室气体排放通量受多种影响因素控制,土壤产气微生物活性和数量是多种因素影响的直接响应,因此二者与温室气体排放存在显著相关,基于田间试验的多元非线性回归分析客观的揭示了温室气体排放通量与环境因子的相关关系。

使用悉生大鼠建立肠道膜菌群的分析方法

为了深入地研究肠道菌群的生物屏障作用,我们使用悉生动物,建立了肠道膜菌群的研究方法,此法与传统方法相比不仅选择效果好,而且各类菌的活菌计数量高。使用悉生动物的研究结果表明:空肠膜菌群杆菌数为5.09±0.09.肠球菌数为4.49±0.23,乳杆菌数为5.82±0.07,类杆菌数为5.56±0.43,双歧杆菌数为5.19±0.24。回肠膜菌群数依次为6.07±0.29,6.57±0.11,7.40±0.13,6.56±0.09,7.68±0.08。盲肠的膜菌群数依次为6.11±0.45,6.40±0.17,7.04±0.31,7.57±0.22,7.51±0.11。

复方乳酶生胶囊活菌质量的标定

目的采用活菌培养计数法对我院自制制剂复方乳酶生胶囊中主要成分乳酶生活菌含量进行测定,检验该制剂是否符合国家质量标准。方法通过正交实验设计,选出最适宜乳酶生活菌培养计数法的稀释浓度,并用该法对复方乳酶生胶囊中乳酶生活菌含量进行测定,再用统计学方法检查测定结果后进行数据回归计算,对比国家药品质量标准,检验该制剂是否符合国家质量标准。结果经过以上方法进行实验,测得该制剂的活菌含量为194.25万个活菌/粒胶囊;符合国家部颁标准。结论经活菌培养计数法测定,该制剂的活菌含量符合国家质量标准。

准确测定食品中菌落总数的注意事项

本文将食品中菌落总数测定需注意的关键事项逐一分析,为真实反映食品在生产加工过程中是否符合卫生要求,正确评价被检食品卫生学状况打下基础。

橙皮酊的微生物限度检查法验证试验

因为药品中污染的微生物检查结果受许多因素的影响,加上生物试验本身就存在一定的误差,这些将直接影响样品中微生物的回收。在进行药品中微生物检验时,只有在各种检验条件均适宜时,即在该检验条件下的样品浓度不足以抑制污染微生物的生长,使供试品中污染的微生物得以真实的反应,从而保证结果的科学性准确性。

影响微生物菌落总数测定准确度相关因素探讨

随着客户对产品质量要求的升级,产品中微生物的测定显得越来越重要,制作饼干、蛋糕、曲奇、面包等各类烘焙食品客户对面粉产品都有微生物控制要求,尤其是菌落总数测定都有明确控制范围,所以控制小麦和加工过程微生物菌落总数显得尤为重要。目前,我们按照国标方法 GB/T 47892《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》检测产品中微生物菌落总数,通过样品稀释、接种、培养、菌落计数等几个步骤,来最终确定样品的菌落总数,本文就测定过程影响菌落总数测定准确性的相关因素做详细分析和阐述,确保检测数据的准确和代表性。

他克莫司微生物限度方法学的研究

目的:建立他克莫司原料微生物限度检验方法,探讨如何使用联合检验方法检测他克莫司的微生物限度。方法:选取5种用于适用性检查的标准菌株制备菌液[1],用常规法、培养基稀释法、萃取法、薄膜过滤法制备供试液,对他克莫司进行微生物计数方法进行适用性试验,选取大肠埃希菌制备菌液,通过以上各种方法制备供试液对他克莫司进行控制菌检查试验。结果:他克莫司需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数试验用每种菌落回收比值均在0.5~2范围内,控制菌应未检出,均达到药典要求。结论:他克莫司对用于适用性检查与控制菌检查的菌株有很强抗菌活性,可以联合使用培养基稀释法、萃取法、薄膜过滤法,并添加无菌表面活性剂[2]去除抗菌活性,进行微生物限度检测。