检测孢子菌类稀释平板改进法的研究初报

根据孢子菌类特征 ,对其检测技术进行探讨。筛选出检测无菌液 ,找出适于此类菌系检测方法关键技术。研究结果表明 ,以 0 .15%琼脂无菌液代替无菌水对样品进行稀释 ,每个稀释液制成后 ,用磁力搅拌器搅拌 ,可使样品达到均匀分散程度 ,不再产生上浮聚集的不均匀现象 ,再经接种、培养 ,即可获得准确结果 ,从根本上解决了用原稀释平板法检测孢子菌类数值重现性差。

微量稀释联合平板计数法评价聚维酮碘抗菌活性及其影响因素

[目的]建立一种评价聚维酮碘抗菌效果的科学方法,并研究影响其抗菌能力的因素,为聚维酮碘防控水产细菌病提供参考。[方法]采用微量稀释联合平板计数法(包括标测法和模测法)测定了不同厂商和批次聚维酮碘的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,并评估了孵育温度、细菌浓度、培养基浓度、pH、货架期对聚维酮碘最小抑菌浓度的影响。[结果]标测法测得的聚维酮碘对4株渔源多重耐药菌的MIC(213~17g/m^(3))和MBC(216~19g/m^(3))是临床使用浓度的数万倍。模测法测得的聚维酮碘对MH可培养水生菌的MIC(27~11g/m^(3))和MBC(29~12g/m^(3))是临床使用浓度的数百到数千倍。试验体系的温度(5℃到35℃)越高、细菌浓度(103到108cfu/mL)越大、培养基浓度(0.082~21 g/L,MH)越大、pH(5.5到9.5)越高,聚维酮碘对细菌的MIC越大。聚维酮碘固态原粉货架期为18个月,而聚维酮碘溶液货架期约3个月。[结论]聚维酮碘对渔源致病菌和水生MH可培养菌的MIC远远高于临床使用浓度;水温、pH、培养基浓度、细菌浓度都影响抗菌活性;聚维酮碘固体稳定性远高于其水溶液。

基于高通量测序的稀释平板计数细菌群落变化研究

[目的]明确平板计数法中不同稀释梯度对土壤细菌数量和组成的影响规律,比较稀释平板计数法和高通量测序研究土地利用方式变化下土壤细菌群落的差异。[方法]针对不同土地利用方式下的4种土壤(次生林、健康蕉园、发病蕉园和水稻土),设置5个土壤悬液10^(-1)‒10^(-5)稀释梯度开展平板计数,获得平板上可培养细菌富集物并提取总DNA;同时直接提取原位土壤微生物总DNA,高通量测序细菌富集物DNA和土壤总DNA中的16S rRNA基因,研究不同土壤悬液稀释梯度下的可培养细菌群落和背景土壤细菌多样性,明确可培养细菌占土壤总细菌的比例以及多样性差异。[结果]次生林垦殖为蕉园土壤后土壤呼吸增幅最高,细菌数量降幅最高,稀释平板计数与实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR)结果一致,但其他土地利用方式变化的稀释平板计数与实时荧光定量细菌数量的结果并不完全一致。连续稀释显著降低了可培养细菌多样性。与原位土壤总细菌相比,土壤可培养细菌群落Chao 1指数降幅高达86%‒98%。与土壤悬液稀释10倍(10^(-1))相比,稀释100‒10万倍(10^(‒2)‒10^(‒5))后可培养细菌群落Chao 1指数降幅高达35%‒60%。连续梯度稀释也降低了物种多样性,所有稀释梯度共检测到315‒401个微生物属,共有属仅为21‒38个,而10^(-1)梯度独有属有92‒210个,10^(‒2)‒10^(‒5)梯度独有属为2‒59个。4种土壤中可培养细菌占背景土壤总细菌比例范围为:16.1%‒47.7%(门水平),7.4%‒30.9%(属水平)。两两比较不同土地利用方式间的显著差异物种,可培养方法获得的显著增加和减少的物种数量仅为高通量直接测序原位土壤结果的9.7%和22.9%;免培养和可培养均发现了一些共同的差异物种,包括Bacillaceae、Micrococcaceae、Microbacterium、Comamonadaceae和Burkholderiales。[结论]传统稀释平板计数可培养细菌数量过程中,10^(-1)稀释梯度下可培养细菌比例及多样性明显高于10^(‒2)‒10^(‒5)梯度,而10^(‒2)‒10^(‒5)梯度之间并无明显差异。表明传统稀释平板计数过程中,遗漏了相当数量的独特微生物属,其比例范围为35.9%‒99.0%。可培养法和免培养法均发现,土地利用方式变化可导致一些微生物类群显著降低,如Microbacterium。尽管可培养方法低估了不同土地利用方式间细菌群落的差异,但可培养与免培养方法发现了共同的差异细菌类群。与4种土壤中细菌本底丰度相比,固体平板显著富集Pseudomonas和Flavobacterium,增加倍数分别为2233‒5805倍和43‒4506倍。未来应耦合分子生态学与可培养技术深入发掘复杂土壤环境中的微生物资源。

例析显微镜直接计数法和稀释涂布平板法

显微镜直接计数法和稀释涂布平板法是高中阶段学生所学的两种微生物计数方法,在高考题中经常出现对这两种方法的考查。对学生容易出错的实验原理和有关计数计算的两个方面,结合例题进行分析和比较,能加强学生对问题的理解。

稀释涂布平板法计数活菌的方法简介

本文对稀释涂布平板法计数微生物活菌数的易错问题进行剖析,介绍菌落计数的基本原则以及相关的计算公式,并给出3组可供参考的示例。

微量平板稀释法测定血清杀菌活性的方法学研究

目的:采用微量平板稀释法测定血清杀菌活性(SBA)。方法:选择Mueller Hinton肉汤(MHB)为稀释剂、控制隔夜培养的菌悬液光度在108～109cfu/mL,以微量平板稀释法和琼脂平板计数法分别测定头孢哌酮钠对金黄色葡萄球菌ATCC25923,大肠埃希氏菌ATCC25922,铜绿假单胞菌ATCC27853三种标准质控菌的血清杀菌活性,并测定头孢哌酮钠对三种标准质控菌的SBA的天间和天内重现性。结果:微量平板稀释法与琼脂平板稀释法测定的结果相似,SBA中位数经秩和检验差异无统计学意义(P>0.05)。微量平板稀释法测定的结果天内、天间差异均无统计学意义。结论:微量平板稀释法测定SBA方法简便、易行,实验结果稳定、可靠,具有可行性。

倍比稀释虎红平板凝集试验对布鲁氏菌病诊断的探讨

研究倍比稀释虎红平板凝集试验对布鲁氏菌病诊断质量。方法 将某院在2016年3月-2022年10月接收108例疑似布鲁氏菌病患者作为本次研究对象,对所有患者进行血液采集、血清分离,对所有血液标本进行倍比稀释虎红平板凝集试验与试管凝集试验检测,在进行倍比稀释虎红平板凝集试验时分别采取1:2、1:4、1:8、1:16稀释比例,将试管凝集试验检测结果作为金标准,分析不同稀释比例下布鲁氏菌病诊断准确性。结果 在进行不同倍比稀释虎红平板凝集试验诊断布鲁氏菌病中,1:2倍比稀释虎红平板凝集试验检测准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均最高。结论 在进行倍比稀释虎红平板凝集试验对布鲁氏菌病诊断时其稀释比例为1:2诊断准确性、灵敏性最高,可促使患者布鲁氏菌病及时被诊断出。因此,在利用倍比稀释虎红平板凝集试验进行布鲁氏菌病诊断时还可及时将稀释比例合理控制为1:2,促使诊断质量不断提升,便于患者及时接受针对性治疗措施,促进诊断价值性不断提升。

壳寡糖水溶液(优力克)的抗菌活性及其影响因素

为探究壳寡糖水溶液(商品名优力克)体外抗菌活性及其影响因素,本研究采用标准微量肉汤稀释联合平板计数法(简称标测法)测定了优力克对4株渔源多重耐药菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)、采用微孔板模拟全池泼洒(简称模测法)测定了优力克对MHA可培养水生细菌的MIC和MBC、并评价了标测法的孵育温度、起始细菌浓度、MH浓度、pH和货架期对优力克MIC和MBC的影响。结果显示,标测法下,优力克对大肠杆菌E105、维氏气单胞菌AV040、副炭疽芽孢杆菌BC006和贝莱斯芽孢杆菌B14的MIC和MBC(32~64 g·m^(-3))是其临床推荐使用浓度(0.3~0.5 g·m^(-3))的数百倍;而模测法下,优力克对MHA可培养水生菌的MIC和MBC(4~8 g·m^(-3))是其临床推荐使用浓度的数十倍。标测法体系的温度(5~35℃)越高、细菌浓度(103~108 cfu·mL^(–1))越高、MH浓度(1/256~1×MH)越高、pH(5.5~9.5)越高,优力克对细菌的MIC和MBC越大(最大值是最小值的2~8倍);上述参数范围内优力克对4种测试菌的MIC在16~128 g·m^(-3)之间。优力克货架保质期至少为24个月。本研究结果提示,壳寡糖水溶液(优力克)是非常有前景的渔业水环境细菌载量的调节剂。

小兴安岭凉水自然保护区森林土壤真菌的多样性

20 0 1年 5月～ 9月 ,在小兴安岭凉水自然保护区椴树红松林、枫桦红松林、白桦林、落叶松人工林与红松人工林等林型内设立临时标准地 ,采用“之”字形路线及土壤剖面取样法多点采集土壤样品。采用稀释平板法和植物残渣法 ,选用PDA、孟加拉红和查氏 3种不同的培养基分别进行真菌的分离和培养。记录不同真菌的菌落数 (稀释平板法 ) ,通过观测菌落形态、生长速度和颜色 ,以及在光学显微镜下观察真菌的形态特征 ,鉴定出了 32个属的土壤真菌 ,其中中国新纪录属 3个 ,即链二孢属 (Bispora)、拟毛孢属 (Chaetopsina)、田字孢属 (Dictyoarthrinium)。研究结果表明 :土壤真菌区系与森林类型、土壤剖面层次密切相关 ,被孢霉属 (Mortierella)、青霉属 (Penicillium)、木霉属(Trichoderma)及轮枝孢属 (Verticillium) 为小兴安岭森林土壤真菌的优势种群 ,椴树红松林和枫桦红松林土壤真菌数量和种类明显多于其它 3种林型 ,下层土壤 (AB、B、C层 )真菌种类和数量明显少于A0和A1层。

土壤中烟草疫霉的分离与量化测定

从温室盆栽接种试验土和烟田土中分别取样，在室温下晾干，研碎并通过１ｍｍ直径的网筛，用选择性培养基土壤稀释平板法和叶片诱饵法分离烟草疫霉菌株；用土壤稀释平板法测定了云南主要烟区土样的烟草疫霉密度。结果看出，连作烟田的病菌密度高于轮作田，低凹烟田高于山地烟田。叶片诱饵法试验表明，以烟茎切片的诱集效果最好，其次是烟叶和马铃薯叶，番茄叶和辣椒叶的诱发效果相似，花生叶诱集不到烟草疫霉。

乌梁素海湿地过渡带土壤微生物类群数量与分布特征

为探明内蒙古乌梁素海湿地土壤微生物主要类群的分布特征,选取湿地过渡带典型植被包括芦苇、碱蓬、白刺3种不同的植物群落,在小河口和退水处设两条平行样带,采用平板计数法对湿地土壤中细菌、真菌和放线菌的数量、组成和分布特征进行了研究。结果表明,不同群落下土壤微生物类群数量和分布明显不同,而且优势类群明显。好气性细菌在小河口芦苇土壤中最多,芽孢型细菌在对照的周边农田土壤中最多,放线菌和真菌在白刺土壤中最多。常年积水的芦苇群落土壤中细菌占主导,季节性淹水的白刺群落土壤中放线菌和真菌数量明显增加,微生物组成结构随环境因子的变化而改变。土壤芽孢型细菌、真菌和放线菌与土壤全氮含量显著相关,说明土壤氮素是调节湿地生态系统土壤微生物代谢及物质转化的关键因子之一。

作物连作障碍的克服——难解的问题

作物连作是近代商品化生产不得已而为之的生产方式,它会劣化土壤而导致作物生长发育障碍。在土地复种指数高、作物连作严重条件下,作物连作障碍已成为农业可持续发展的重大问题之一。 作物连作障碍是指同一作物或近缘作物连作以后,即使在正常栽培管理的情况下,也会产生产量降低、品质变劣、生育状况变差的现象。

不同施肥处理对灰枣根际微生物的影响

[目的]调查不同施肥处理下灰枣根际微生物数量,了解节约化栽培管理对灰枣根际微生物的影响,从微生物的变化情况角度探讨灰枣生长.[方法]采用根际微生物多样性调查,平板稀释计数法和Duncan方差差异显著性分析法.[结果]处理13中根际土壤中的微生物以细菌居优势（18.14×10^5 CFU/g）放线菌次之（26.44×10^4 CFU/g）真菌最少（2.47×10^4 CFU/g）,对应的处理13,枣树的产量也是最高的;施用80％的NPK＋ （30 g）PGPR菌肥的时候,在枣树的不同生育期,细菌、真菌、放线菌的含量均高于其它处理.[结论]“3414”14个肥力处理中,不同施肥处理条件下枣树根际土壤微生物各生物类群数量差异显著（P＜0.05）,PGPR菌肥在相应的化肥投入基础上才能更好地发挥其作用特性.

土壤中辣椒疫霉分离方法的研究与量化测定

从杭州、西安、广州及武汉等辣椒病田分别采集土样 ,室内晾干研碎后 ,用选择性培养基 ,采用土壤稀释平板法和组织诱饵法分离辣椒疫霉 (PhytophthoracapsiciLeonian) ,并对土壤中辣椒疫霉的密度进行量化处理。结果表明 ,利用选择性燕麦培养基 ,采用土壤稀释平板法可分离获得大量的辣椒疫霉菌株 ,而且辣椒连作田的辣椒疫霉菌密度高于轮作田。组织诱饵法试验结果表明 ,辣椒叶片诱集效果最好 ,其次是辣椒果实。

香兰素对细菌抑制作用的研究

用稀释平板法测定了香兰素对细菌的抑制作用。结果表明,香兰素对细菌有抑制作用,对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)为0.235%,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为0.294%,可开发研制为一种新型天然食品防腐剂。

一种预测土壤中烟草黑胫病发病潜力的方法

【目的】了解土壤带菌量、预测土壤黑胫病发病潜力,可为病害的精准防控、田间病圃的高效选择、不同抗性品种的科学布局提供依据。【方法】采用土壤稀释平板计数法、土壤假植病害调查2种方法预测土壤中烟草黑胫病的发病潜力,田间病害系统调查验证。【结果】土壤带菌量与病害的发生率密切相关,病原菌含量越高,发病越重、蔓延越快;随着时间的推移,初始发病率高,最终病害发生越严重,最终发病率是初始发病率的10~20倍;土壤带菌普遍存在,在所采集的土壤中均可分离获得,病原菌含量积累到一定程度就引发病害,1000个/g土壤带菌量为病害经济阈值,3~5次的假植病害调查可以准确地预测土壤烟草黑胫病的发病潜力。【结论】1000个/g土壤带菌量为烟草黑胫病的经济阈值,据此可以对土壤的病菌进行预警;假植病害调查可以准确地预测土壤烟草黑胫病的发病潜力,表明建立在环境—寄主—病原三角关系的假植预测病害方法是一种相对准确、低成本、简便易推广的病害预测方法。

丹江口水库的细菌和浮游生物监测及评价

采用多管发酵法(MPN法)测定大肠菌群数和粪大肠菌群数,稀释平板法测定细菌总数,并进行浮游生物鉴定,结合理化检测对丹江口水库水质进行评价。结果显示丹江口水库水质良好。本研究为建立中线水源区长期生态研究数据信息库及库区生态环境保护政策制定提供科学依据。

人参根际微生物的研究——I.菌株的筛选及功能的测定

本文报导了从人参根面、根际土壤中,分离的细菌和放线菌的抗病,刺激作用及分布规律。其放线菌均属于Streptomyces属。筛选出的菌株不仅对人参锈腐病菌、根腐病菌具有拮抗作用,同时对人参、水稻幼苗及食用菌的生长也有刺激作用。

酵母菌种群数量计数方法的分析与比较

设计3种不同的科学实验方案(显微镜直接计数法、稀释涂布平板法和比浊法),用于探究“培养液中酵母菌种群数量变化”。在实验探究过程中,比较实验原理与结果呈现度的差异性,并绘出酵母菌生长曲线,从中探究酵母菌种群数量变化的特征和规律。同时,分析其应用于生产、工程实践中的指导性,进而在教学中有效地将科学研究与工程应用相结合,促进学生综合素质的发展。

香兰素对真菌的抑制作用的研究

用稀释平板法测定了香兰素对真菌的抑制作用。结果表明:香兰素对真菌有抑制作用,对酿酒酵母的最小抑菌浓度(MIC)为0.118%,对黑曲霉的最小抑菌浓度为0.059%。可开发研制为一种新型的天然食品防腐剂。