玻璃化冷冻及慢速程序化冷冻对未成熟睾丸组织的保护效果分析

目的:探究比较目前常见主流睾丸组织冷冻方法学,即玻璃化冷冻与慢速程序化冷冻,筛选适宜的睾丸组织冷冻方法。方法:分别收集3周龄小鼠及<2岁龄青春期前食蟹猴的睾丸组织,将其剪碎至6~26 mm^(3),均分为3组:新鲜组、玻璃化冷冻组和慢速程序化冷冻组,在冷冻5~7 d后复苏冷冻睾丸组织,使用HE染色、免疫荧光染色、TUNEL染色和Western印迹对冷冻-复苏睾丸组织进行评估。结果:①在C57BL6/J小鼠睾丸组织中,慢速程序化冷冻组精原干细胞标志物UCHL1表达量高于玻璃化冷冻组,凋亡细胞(TUNEL+细胞)含量低于玻璃化冷冻组。②食蟹猴睾丸组织中,慢速程序化冷冻组精原干细胞标志物UCHL1、细胞增殖标志物PCNA的表达量高于玻璃化冷冻组。结论:玻璃化冷冻和慢速程序化冷冻均可成功保存青春期前未成熟的小鼠及食蟹猴睾丸组织。但是在玻璃化冷冻保存中,对于冻存体积为6~26 mm^(3)的睾丸组织存在更多冷冻损伤区域,可能影响睾丸组织中精原干细胞的冷冻储存效果。

程序化冷冻与玻璃化冷冻卵裂期胚胎移植的母婴结局对照分析

目的探讨分析程序化冷冻与玻璃化冷冻卵裂期胚胎复苏周期移植的母婴结局。方法对102例程序化冷冻复苏周期及109例玻璃化冷冻复苏周期进行回顾性分析,比较两组的临床结局及新生儿情况。结果两组患者的一般情况相似;程序化冷冻组和玻璃化冷冻组的胚胎复苏率分别为89.7%和99.6%(P<0.05),两组的临床妊娠率、着床率、活产率分别为56.6%、38.1%、79.2%和54.1%、33.3%、71.2%,差异无统计学意义(P>0.05);两组新生儿的孕周、出生体重、出生缺陷率无显著性差异(P>0.05),玻璃化冷冻组早产率(19.2%)有高于程序化冷冻组早产率(12.3%)的趋势,但无显著性差异(P>0.05)。结论玻璃化冷冻显著提高胚胎复苏率,能提高胚胎利用率,程序化冷冻组与玻璃化冷冻组相比拥有相似甚至更好的母婴结局,玻璃化冷冻在成为常规工作之前还需加强对其母婴结局的后续研究及子代的长期随访。

经程序化冷冻的小鼠休眠胚胎的基因表达谱差异分析

目的探讨小鼠休眠胚胎经程序化冷冻后基因表达谱的变化及相关信号通路的改变趋势。方法采用Affymetrix基因芯片检测小鼠正常休眠胚胎和经程序化冷冻后的休眠胚胎的差异表达基因;采用GO分析和Pathway分析等生物信息学方法进一步了解相关信号通路的改变。结果经程序化冷冻后的小鼠休眠胚胎与正常休眠胚胎相比,存在228个差异表达基因,其中50个基因表达上调,178个基因表达下调。Pathway分析显示黏着斑通路、细胞外基质受体相互作用通路、肌动蛋白细胞骨架调节通路、细胞凋亡通路、细胞通讯通路、泛素介导的蛋白质水解通路、甘油磷脂代谢通路、小细胞肺癌通路、TGF-β信号通路、MAPK信号通路等基因差异表达变化趋势明显。结论小鼠休眠胚胎经程序化冷冻后会导致一系列基因调控变化,并可能影响多条信号通路的协同变化。

程序化冷冻前后小鼠孵化囊胚和休眠胚胎的Hba-α蛋白分布和差异表达

目的利用程序化冷冻的方法,探究冷冻前、后小鼠孵化囊胚和休眠胚胎中Hba-α蛋白的分布和差异表达的变化,为今后开发和利用新型哺乳动物源抗冻蛋白提供理论依据。方法从妊娠d5小鼠体内获取孵化囊胚;从小鼠延迟着床模型获取休眠胚胎,利用Confocal显微镜和Western Blot技术对程序化冷冻前、后的各组胚胎进行Hba-α蛋白的分布和表达检测。结果孵化囊胚和休眠胚胎在程序化冷冻前、后均有Hba-α蛋白的表达;孵化囊胚经程序化冷冻后Hba-α蛋白的表达与冷冻前相比差异无显著性(P>0.05);冷冻前休眠胚胎与程序化冷冻前后的孵化囊胚相比,Hba-α蛋白的表达量显著下调(P<0.05);冷冻后休眠胚胎Hba-α蛋白的表达量显著低于其他各组(P<0.05)。结论程序化冷冻处理对小鼠休眠胚胎Hba-α蛋白的表达影响明显大于孵化囊胚;Hba-α基因具有作为新型哺乳动物源抗冻蛋白的潜力。

程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3基因表达的研究

试验旨在研究程序化冷冻前后小鼠正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3蛋白的分布及转录水平的差异表达情况,为阐明哺乳动物胚胎在抗冻过程中的相关调控机制提供理论依据。试验选用ICR系雌性小鼠,从妊娠第5天小鼠子宫回收正常孵化囊胚;构建延迟着床模型获取小鼠休眠胚胎,利用激光共聚焦和实时荧光定量PCR技术对各组胚胎进行细胞免疫荧光和C3mRNA相对表达量的检测。结果发现,程序化冷冻前后的正常孵化囊胚和休眠胚胎中C3在转录和翻译水平均有表达;正常孵化囊胚经冷冻处理后C3mRNA相对表达量显著上调(P<0.05);休眠胚胎冷冻后C3mRNA相对表达量与冷冻前相比显著下调(P<0.05);冷冻前休眠胚胎C3mRNA相对表达量显著高于冷冻前正常孵化囊胚(P<0.05);冷冻后休眠胚胎C3mRNA相对表达量显著低于冷冻后正常孵化囊胚(P<0.05)。结果表明,胚胎中C3基因在转录水平的下调表达对胚胎抗冻具有一定的积极作用,C3基因很可能参与了胚胎抗冻过程的相关调控。

程序化冷冻对小鼠胚胎发育的影响

取小鼠原核(220枚)、2~4细胞胚胎(227枚)、桑椹胚(127枚),将其分为3组,每一时期胚胎分成两半,一半取出后立即冷冻复苏并体外培养至囊胚,另一半体外培养至囊胚后冷冻复苏,子宫冲取囊胚(78枚)冷冻复苏为对照组;各组囊胚均移植至子宫,比较程序化冷冻对小鼠早期胚胎存活率的影响。结果表明:原核、2~4细胞胚胎、桑椹胚体外培养至囊胚后冷冻复苏率分别为56.4%、72.2%、81.6%,移植产仔率分别为38.1%、41.6%、56.8%,原核、2~4细胞组复苏率和产仔率极显著或显著低于对照组,桑椹胚组与对照组差异不显著,显示体外培养对早期胚胎冷冻存活有影响;原核、2~4细胞胚胎、桑椹胚冷冻后体外培养至囊胚,胚胎移植后产仔率分别为25.3%、28.2%、42.1%,与对应胚胎时期体外培养至囊胚冷冻复苏后移植产仔率相比,原核、2~4细胞组均存在显著差异,而桑椹胚组差异不显著,显示原核、2~4细胞的早期胚胎体外培养至囊胚后冷冻可提高冷冻存活率。

人卵巢组织慢速程序化冷冻保存方案的初步探讨

目的系统比较不同冷冻保护剂在不同浓度时对卵巢组织慢速程序化冷冻效果的影响。方法卵巢组织来源于15例卵巢良性肿瘤手术的患者。分别采用丙二醇(PROH)、乙二醇(EG)、二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂,在每种冷冻保护剂1.5 mol/L或2.0 mol/L浓度下进行慢速程序化冷冻。每例患者平行进行上述6种冷冻程序,光镜及电镜下分析卵泡的形态正常率,结果与该患者的新鲜对照组织比较。结果各组中不同发育阶段的卵泡分布无统计学差异(P>0.05)。光镜观察显示,1.5mol/L EG组及2.0 mol/L EG组的冷冻效果最好,与新鲜对照组织相比卵泡形态正常率无统计学差异(P>0.05);1.5 mol/L PROH组、2.0 mol/L PROH组、1.5 mol/L DMSO组及2.0 mol/L DMSO组与新鲜对照组织相比,卵泡形态正常率的差异有统计学意义(P<0.05)。电镜观察显示,经程序化冷冻后,卵母细胞质量下降,但由于数据少未进行统计分析;与新鲜对照组织相比,6个冷冻组颗粒细胞的活力均明显降低(P<0.01)。形态正常的颗粒细胞数量在2.0 mol/L PROH组及1.5 mol/L EG组中稍高,但6个冷冻组间两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢速程序化冷冻采用1.5 mol/L EG作为冷冻保护剂,能较好的保存卵泡中的卵母细胞及颗粒细胞,是一种较好的冷冻卵巢组织的方案。

玻璃化冷冻和程序化冷冻人卵巢组织的效果

目的探讨玻璃化冷冻和程序化冷冻两种方法冻存人卵巢皮质的效果。方法收集因卵巢疾病患者需手术切除的卵巢组织标本,并随机分成玻璃化冷冻组、程序化冷冻组和新鲜对照组,分别进行组织学分析、窦前卵泡的分类计数和卵巢皮质的培养,比较3组卵巢组织内卵泡形态学、卵巢组织混悬液中卵泡计数和卵巢皮质培养上清液的雌二醇(E_(2))水平。结果(1)组织学分析:两冷冻组卵巢皮质中始基卵泡完整率明显低于新鲜对照组(84.62%、80.21%vs.97.93%,P<0.001),但两冷冻组之间差异均无统计学意义(P>0.05);程序化冷冻组次级卵泡完整率明显低于新鲜对照组(37.5%vs.88.24%,P<0.05);(2)窦前卵泡的计数:玻璃化冷冻组和程序化冷冻组单位体积卵巢组织混悬液中始基卵泡计数均明显低于新鲜对照组[(76.50±8.91)&(79.67±10.40)vs.(91.50±8.70),P=0.001];程序化冷冻组每100μL卵巢组织混悬液中初级卵泡和次级卵泡计数均明显低于新鲜对照组[(22.83±3.74)vs.(27.33±3.02),(9.50±3.46)vs.(12.55±3.25),P<0.05];(3)卵巢组织培养液中的E_(2)水平:体外培养的初期阶段(D2⁃D6),冻融卵巢组织分泌的E_(2)水平低于新鲜组织(P<0.05),之后阶段各组间上清液E_(2)水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冷冻和程序化冷冻均能有效地保存人卵巢组织的活性;玻璃化冷冻方法简单易行,对于次级卵泡的保存效果优于程序化冷冻组,更适合人卵巢组织的冷冻保存。

慢速程序化冷冻人类扩张期囊胚的效果观察

目的探讨慢速程序化冷冻在人类扩张期囊胚冷冻中的应用效果。方法收集2014年1~4月在本中心进行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）或卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）治疗的579个周期患者移植及冷冻后剩余的低质量胚胎（包括异常受精胚胎）发育成的扩张期囊胚87枚,用显微注射针刺穿囊胚腔使之皱缩,然后行程序化冷冻（囊胚组）。对照组为同期行程序化冻融的卵裂期胚胎。比较两组经冷冻复苏后的胚胎存活率。结果扩张期囊胚复苏率为80.46%,卵裂期胚胎复苏率为82.80%,两组比较差异无统计学意义（χ2=1.105,P〉0.05）。结论扩张期囊胚经人工皱缩后行程序化冷冻行之有效,能明显提高囊胚的冷冻效率。

程序化冷冻前后小鼠休眠胚胎中Apol8蛋白分布和表达

旨在研究小鼠孵化囊胚和休眠胚胎程序化冷冻前、后Apol8蛋白定位和相对表达量变化。通过超排技术获取小鼠体内孵化囊胚,通过小鼠延迟着床模型获取休眠胚胎,通过Confocal显微镜和Western Blot技术对孵化囊胚和休眠胚胎程序化冷冻前后Apol8蛋白的分布和表达进行检测。结果表明:作为抗冻潜力蛋白,在程序化冷冻前、后孵化囊胚和休眠胚胎Apol8均有表达。程序化冷冻后孵化囊胚中Apol8的表达量是冷冻前1.2倍(P<0.01),程序化冷冻后休眠囊胚中Apol8的表达量是冷冻前2.0倍(P<0.01),程序化冷冻后休眠胚胎Apol8表达量是冷冻后孵化囊胚的1.25倍(P<0.01)。程序化冷冻后休眠胚胎Apol8相对表达量变化明显大于孵化囊胚,Apol8蛋白具有作为新型哺乳动物源抗冻蛋白的潜力。

小鼠孵化囊胚及其休眠胚胎程序化冷冻-解冻前后Mgst1基因的差异表达

目的通过对比小鼠孵化囊胚以及其休眠胚胎程序化冷冻并解冻处理前后Mgst1基因的相对表达情况,以及Mgst1蛋白的差异表达分布情况,分析Mgst1基因在小鼠胚胎程序化冷冻过程中发挥的作用,为胚胎抗冻机理研究提供新的理论基础。方法使用激光共聚焦扫描显微镜采集Mgst1蛋白在胚胎中表达分布的免疫荧光图像;使用qRT-PCR技术鉴定Mgst1基因在胚胎中的相对表达量。结果通过免疫荧光图像发现,Mgst1蛋白在小鼠冷冻前后的孵化囊胚与休眠胚胎中均有表达;通过qRT-PCR发现,冷冻前的孵化囊胚与休眠胚胎的Mgst1基因相对表达无显著差异(P>0.05);冷冻后的孵化囊胚Mgst1基因相对表达量较冷冻之前显著上调(P<0.05);冷冻后的休眠胚胎Mgst1基因相对表达量较冷冻之前极显著上调(P<0.01);冷冻后的休眠胚胎Mgst1基因相对表达量较冷冻后的孵化囊胚显著上调(P<0.05)。结论Mgst1基因可能在小鼠胚胎抗冻机制中发挥着重要的正调控作用。

人类卵子改良程序化冷冻和玻璃化冷冻比较研究

程序化冷冻曾广泛应用于辅助生殖临床，但因需依赖程序化冷冻仪，操作过程耗时较长等原因，目前正逐渐被玻璃化冷冻所取代。一般认为，相比于常规程序化冷冻，玻璃化冷冻操作简便，具有更稳定的冷冻复苏效率。相比卵裂期胚胎和囊胚，卵母细胞体积较大、含水比例高、细胞膜的渗透性低，冷冻过程中的冰晶形成更易对卵子产生损伤[1]。同时，卵母细胞纺锤体对温度改变敏感，冷冻过程可影响染色体的重排。迄今为止，无论是常规程序化冷冻，还是玻璃化冷冻，卵母细胞的冷冻复苏率仍然明显低于胚胎的同项指标，其受精胚胎移植后的着床率和新生儿出生率更是十分低下。探索改善卵子冷冻复苏技术仍然是辅助生殖工作者的一项重要任务，故此，本中心通过改良冷冻保护剂，尝试开展了改良程序化冷冻法进行卵子冷冻复苏工作，比较其与玻璃化冷冻法对卵母细胞复苏率、受精率、卵裂率及囊胚形成率的差异，分析其对卵子潜能发展的影响。

玻璃化冷冻与程序化冷冻对胚胎发育潜能及临床结局的影响

目的:比较玻璃化冷冻与程序化冷冻对胚胎发育潜能及临床结局的影响。方法:回顾性分析590个复苏周期,比较2种冷冻方法的胚胎复苏率、临床妊娠率、胚胎种植率和流产率等各项指标。结果:玻璃化冷冻组的平均移植胚胎数(2.2±0.5枚)显著少于程序化组(2.5±0.6枚)(P<0.05),复苏率(94.4%)、完整胚胎率(73.7%)、临床妊娠率(50.8%)和种植率(30.2%)显著高于程序化组(77.2%、44.3%、36.2%、21.1%)(P<0.05),而流产率和周期取消率组间均无统计学差异(16.6%vs 27.7%,1.3%vs 2.3%)(P>0.05)。程序化冷冻胚胎的种植率在完整胚胎(13.5%)和非完整胚胎(16.0%)组间无统计学差异(P>0.05);玻璃化冷冻完整胚胎组的种植率(30.4%)显著高于非完整胚胎组(20.1%)(P<0.05);而2种冷冻方法的流产率完整胚胎组(35.7%,15.1%)均显著高于非完整胚胎组(8.7%,2.9%)(P<0.05)。在玻璃化冷冻中,卵裂期胚胎组的各项指标与囊胚期组相比均无统计学差异(P>0.05)。结论:玻璃化冷冻法适用于人类胚胎的保存,对卵裂期和囊胚期胚胎有同样理想的保存效果和临床结局,玻璃化冷冻中,胚胎完整性对胚胎种植率起着重要的作用。

玻璃化冷冻法和程序化冷冻法对人卵裂期胚胎冷冻复苏效果的比较

目的:比较辅助生殖技术中玻璃化和程序化2种冷冻方法对卵裂期胚胎的冷冻复苏效果。方法:对265个玻璃化冷冻周期和276个程序化冷冻周期的相关资料进行回顾性统计学分析,比较冷冻胚胎复苏后的胚胎存活率、胚胎种植率和临床妊娠率等指标。结果:玻璃化冷冻复苏265个周期,解冻809个胚胎,存活710个(87.8%),移植259个周期,临床妊娠98个周期(37.8%),其中双胎妊娠26例,三胎妊娠3例。程序冷冻复苏276个周期,解冻968个胚胎,存活532个(55.0%),移植246个周期,临床妊娠70例(28.5%),其中双胎妊娠4例,三胎妊娠1例。玻璃化冷冻后的胚胎存活率和完整性胚胎存活率均显著高于程序化冷冻,复苏周期移植取消率显著低于程序化冷冻,而临床妊娠率则明显高于程序化冷冻,差异均有统计学意义(P<0.05)。但2种方法的胚胎种植率无统计学差异(P>0.05)。结论:玻璃化法能够较好地避免冷冻引起的损伤,适用于卵裂期胚胎的冷冻保存。

程序化与玻璃化冷冻保存人D2和D3胚胎的临床结局比较

目的比较程序化和玻璃化冷冻保存人D2和D3胚胎的临床结局,分析探讨不同冷冻方法对人D2和D3胚胎冷冻的影响。方法回顾性分析了本中心170个D2和D3胚胎复苏周期,比较程序化和玻璃化冷冻复苏后的存活率、卵裂球存活指数、完胚率、≥1完胚移植率、种植率、临床妊娠率、流产率等指标。结果程序化解冻移植周期47个,存活率73.60%,卵裂球存活指数65.88%,完胚率31.46%,≥1完胚移植率80.85%,胚胎种植率14.17%,临床妊娠率36.17%,流产率11.76%。玻璃化解冻移植周期120个,存活率92.96%,卵裂球存活指数86.49%,完胚率68.04%,≥1完胚移植率90.83%,胚胎种植率18.84%,临床妊娠率35.83%,流产率9.30%。玻璃化冷冻比程序冷冻能显著提高胚胎存活率、卵裂球存活指数和完胚率(P<0.05),但在≥1完胚移植率、临床妊娠率、胚胎种植率和流产率上无显著性差异。无论采用哪种冷冻方法,D2和D3胚胎在所有统计指标上差异均没有显著意义。结论玻璃化冷冻是一种有效的冷冻方法,其复苏存活率、卵裂球存活指数和完胚率均明显高于程序化冷冻,可作为传统程序化冷冻的替代方法。D3胚胎冷冻没有比D2胚胎更有优势,对于工作量较大的IVF实验室可选择D2胚胎冷冻移植。

Hemi-straw玻璃化与程序化冷冻小鼠不同发育阶段胚胎的效果

目的:探讨半细管(Hem i-straw)玻璃化方法与程序化方法冷冻不同发育阶段小鼠胚胎的效果。方法:采用慢速程序化方法与玻璃化方法冷冻小鼠原核期胚胎、卵裂期及早期囊胚期胚胎。解冻后观察存活率、囊胚形成率。结果:采用玻璃化方法冷冻小鼠卵裂期与早期囊胚期胚胎的存活率为92.7%与95.5%,显著高于玻璃化冷冻原核期胚胎的存活率79.8%与程序化冷冻的各组(均P<0.01)。程序化冷冻早期囊胚的存活率仅为50.2%,显著低于其他组(均P<0.01)。经培养后囊胚的形成率比较,程序化冷冻组内无显著性差异(P>0.05),但均显著低于玻璃化冷冻组(均P<0.01)。玻璃化冷冻卵裂期与早期囊胚组的囊胚形成率高达90.1%与92.2%,显著高于原核期胚胎玻璃化冷冻组69.5%(均P<0.01)。结论:胚胎行冷冻保存时,玻璃化冷冻效果较程序化冷冻好,且选择早期囊胚可获最佳冷冻效果。

玻璃化冷冻和程序化冷冻方法保存猕猴卵巢组织的存活效果比较

目的探讨玻璃化冷冻和程序化冷冻对猕猴卵巢组织的冷冻保存效果。方法取新鲜的猕猴卵巢组织随机分成对照组(新鲜卵巢组织)、玻璃化冷冻组和程序化冷冻组,分别进行HE染色、窦前卵泡的分类计数及免疫染色,比较3组卵巢组织内卵泡形态学、各级卵泡正常率及磷酸化组蛋白H3(PHH3)的表达量的差异。结果①HE染色:3组中,始基卵泡、初级卵泡正常率差异均无统计学意义(P均>0.05);程序化冷冻组单层次级卵泡正常率[40.6%(28/69)]均低于玻璃化冷冻组[53.5%(38/71)]、对照组[60.7%(34/56)],3组间差异有统计学意义(P=0.044),但玻璃化冷冻组、对照组间差异无统计学意义(P>0.05);玻璃化冷冻组、程序化冷冻组多层次级卵泡正常率[23.4%(11/47),16.7%(7/42)]均明显低于对照组[57.3%(39/68)](P均<0.001),玻璃化冷冻组多层次级卵泡正常率高于程序化冷冻组,但差异无统计学意义(P>0.05)。②分离卵泡比较:玻璃化冷冻组、程序化冷冻组初级卵泡正常形态率均接近对照组,差异无统计学意义(P>0.05);玻璃化冷冻组和程序化冷冻组次级卵泡正常率[38.2%(34/89),23.7%(23/97)]明显较低,与对照组[56.4%(61/108)]比较差异均有统计学意义(P均<0.001);玻璃化冷冻组的次级卵泡正常形态率明显高于程序化冷冻组,差异有统计学意义(P<0.001);③ PHH3染色:玻璃化冷冻组颗粒细胞PPH3的阳性表达率接近对照组(P>0.05),程序化冷冻组卵泡颗粒细胞PHH3阳性表达率(58.72%±12.31%)明显低于对照组(67.58%±8.45%,P=0.04)和玻璃化冷冻组(62.87%±9.94%,P=0.03)。结论玻璃化冷冻和程序化冷冻均能有效地保存卵巢组织,但玻璃化冷冻对卵巢组织冷冻和复融过程中各级卵泡及颗粒细胞形态学的损伤明显低于程序化冷冻,更适合下一步人类卵巢组织的冷冻保存的研究。

玻璃化冷冻法和程序化冷冻法对人卵裂期胚胎冷冻复苏效果及临床结局的比较

目的比较辅助生殖技术中玻璃化和程序化2种冷冻方法对卵裂期胚胎的冷冻复苏效果及临床结局。方法对3396个玻璃化冷冻周期和685个程序化冷冻周期的相关资料进行回顾性统计学分析,比较解冻后胚胎复苏率、优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎着床率等指标。结果玻璃化冷冻后的胚胎复苏率、优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎着床率均显著高于程序化冷冻,且复苏周期移植取消率显著低于程序化冷冻。结论相对于程序化冷冻法,玻璃化冷冻法具有更好的冷冻复苏效果以及临床结局,更适用于卵裂期胚胎的冷冻保存。

玻璃化冷冻和程序化冷冻方法对人类卵母细胞骨架及其发育潜能的影响

目的探讨玻璃化冷冻和程序化冷冻对人卵母细胞纺锤体定位、细胞骨架及其发育潜能的影响。方法将第2日发育为M_II卵母细胞随机分为对照组、程序化冻融组、玻璃化冻融组(解冻0 h、1 h、3 h)。应用液晶偏振光显微镜(Polscope)成像系统观察卵母细胞纺锤体与第一极体(Pb)的夹角、表面积、卵透明带内层光阻值和外层光阻值。采用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察卵母细胞的表面和内部超微结构。统计2种冻融方法对卵母细胞发育潜能的影响。结果对照组、程序化冷冻解冻培养3 h组和玻璃化冷冻解冻后培养0 h、1 h、3 h组中的纺锤体可见率分别为92.4%、56.4%、11.2%、24.8%、61.1%。与程序化冻融组相比,玻璃化冷冻解冻培养3 h后卵母细胞中纺锤体与Pb的夹角更小(37.3°与68°,P=0.023)。对照组、程序化冻融组和玻璃化冻融后培养3 h组中卵母细胞的纺锤体面积、卵透明带内层光阻值和透明带外层光阻值差异无统计学意义(P>0.05)。与程序化冻融组相比,玻璃化冻融后培养3 h组中卵母细胞表面突起丰富,微绒毛形态较为正常,倒伏在细胞表面,卵透明带边界较为清晰,与对照组较为接近。程序化冻融组的正常受精率(65.7%)明显低于对照组(79.2%,P=0.041),而卵裂率和囊胚形成率与对照组和玻璃化冻融组差异无统计学意义(P>0.05)。玻璃化冻融后培养3 h组中正常受精率、卵裂率、囊胚形成率与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论相比程序化冷冻,玻璃化冷冻对卵母细胞纺锤体和卵透明带的损伤及对卵母细胞的发育潜能的影响都较小,可以作为卵母细胞冷冻的一种有效方法。

高原地区玻璃化冷冻与程序化冷冻对冻融胚胎移植结局的影响

目的:比较高原地区玻璃化冷冻与程序化冷冻对冻融胚胎移植结局的影响。方法:对679周期玻璃化冷冻和371周期程序化冷冻的相关资料进行分析,比较两组解冻后胚胎复苏率、完整存活率、平均移植胚胎数、临床妊娠率、胚胎着床率及流产率等指标。结果:玻璃化冷冻组的胚胎复苏率和完整存活率显著高于程序化冷冻(P<0.05),平均移植胚胎数和流产率低于程序化冷冻(P<0.05);玻璃化冷冻的临床妊娠率和胚胎着床率与程序化冷冻无差异(P>0.05)。结论:玻璃化冷冻技术冻存人卵裂期胚胎在高原地区同样适用,而且相对于程序化冷冻,玻璃化冷冻具有更好的冷冻复苏效果,更适用于胚胎的冷冻保存。