人卵巢组织慢速程序化冷冻保存方案的初步探讨

目的系统比较不同冷冻保护剂在不同浓度时对卵巢组织慢速程序化冷冻效果的影响。方法卵巢组织来源于15例卵巢良性肿瘤手术的患者。分别采用丙二醇(PROH)、乙二醇(EG)、二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂,在每种冷冻保护剂1.5 mol/L或2.0 mol/L浓度下进行慢速程序化冷冻。每例患者平行进行上述6种冷冻程序,光镜及电镜下分析卵泡的形态正常率,结果与该患者的新鲜对照组织比较。结果各组中不同发育阶段的卵泡分布无统计学差异(P>0.05)。光镜观察显示,1.5mol/L EG组及2.0 mol/L EG组的冷冻效果最好,与新鲜对照组织相比卵泡形态正常率无统计学差异(P>0.05);1.5 mol/L PROH组、2.0 mol/L PROH组、1.5 mol/L DMSO组及2.0 mol/L DMSO组与新鲜对照组织相比,卵泡形态正常率的差异有统计学意义(P<0.05)。电镜观察显示,经程序化冷冻后,卵母细胞质量下降,但由于数据少未进行统计分析;与新鲜对照组织相比,6个冷冻组颗粒细胞的活力均明显降低(P<0.01)。形态正常的颗粒细胞数量在2.0 mol/L PROH组及1.5 mol/L EG组中稍高,但6个冷冻组间两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢速程序化冷冻采用1.5 mol/L EG作为冷冻保护剂,能较好的保存卵泡中的卵母细胞及颗粒细胞,是一种较好的冷冻卵巢组织的方案。

慢速程序化冷冻人类扩张期囊胚的效果观察

目的探讨慢速程序化冷冻在人类扩张期囊胚冷冻中的应用效果。方法收集2014年1~4月在本中心进行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）或卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）治疗的579个周期患者移植及冷冻后剩余的低质量胚胎（包括异常受精胚胎）发育成的扩张期囊胚87枚,用显微注射针刺穿囊胚腔使之皱缩,然后行程序化冷冻（囊胚组）。对照组为同期行程序化冻融的卵裂期胚胎。比较两组经冷冻复苏后的胚胎存活率。结果扩张期囊胚复苏率为80.46%,卵裂期胚胎复苏率为82.80%,两组比较差异无统计学意义（χ2=1.105,P〉0.05）。结论扩张期囊胚经人工皱缩后行程序化冷冻行之有效,能明显提高囊胚的冷冻效率。

玻璃化冷冻及慢速程序化冷冻对未成熟睾丸组织的保护效果分析

目的:探究比较目前常见主流睾丸组织冷冻方法学,即玻璃化冷冻与慢速程序化冷冻,筛选适宜的睾丸组织冷冻方法。方法:分别收集3周龄小鼠及<2岁龄青春期前食蟹猴的睾丸组织,将其剪碎至6~26 mm^(3),均分为3组:新鲜组、玻璃化冷冻组和慢速程序化冷冻组,在冷冻5~7 d后复苏冷冻睾丸组织,使用HE染色、免疫荧光染色、TUNEL染色和Western印迹对冷冻-复苏睾丸组织进行评估。结果:①在C57BL6/J小鼠睾丸组织中,慢速程序化冷冻组精原干细胞标志物UCHL1表达量高于玻璃化冷冻组,凋亡细胞(TUNEL+细胞)含量低于玻璃化冷冻组。②食蟹猴睾丸组织中,慢速程序化冷冻组精原干细胞标志物UCHL1、细胞增殖标志物PCNA的表达量高于玻璃化冷冻组。结论:玻璃化冷冻和慢速程序化冷冻均可成功保存青春期前未成熟的小鼠及食蟹猴睾丸组织。但是在玻璃化冷冻保存中,对于冻存体积为6~26 mm^(3)的睾丸组织存在更多冷冻损伤区域,可能影响睾丸组织中精原干细胞的冷冻储存效果。

玻璃化冷冻法对冻融胚胎移植周期结局的影响

目的:探讨玻璃化冷冻法对冻融胚胎移植周期结局的影响。方法:对324个玻璃化冷冻人卵裂期胚胎复苏周期和146个程序化慢速冷冻胚胎复苏周期进行分析,比较2组冷冻胚胎复苏后的存活率、完整率、种植率、临床妊娠率、孕周、新生儿身高及体质量等指标。结果:玻璃化冷冻组的胚胎完整率、临床妊娠率均高于程序化慢速冷冻组(83.24%vs47.54%,χ2=179.772,P<0.001;37.38%vs27.66%,χ2=4.073,P=0.044);2组流产率、分娩孕周、新生儿出生体质量及身高比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。结论:玻璃化冷冻胚胎较程序化慢速冷冻法有更高的复苏胚胎完整率及临床妊娠率,可在临床上安全应用。

封闭式麦管玻璃化冷冻法用于人早期胚胎冷冻效果观察

目的探讨封闭式麦管玻璃化法用于人早期胚胎(以下简称胚胎)冷冻的效果。方法将接受体外受精—胚胎移植(IVF-ET)患者移植后第3天的胚胎分别采用封闭式麦管玻璃化法(玻璃化组)及程序化慢速冷冻法(程序化组)冷冻,比较两组胚胎存活率、完全胚胎存活率、继续卵裂率及植入率、妊娠率和流产率等。结果玻璃化组的胚胎存活率、完全胚胎存活率、植入率明显高于程序化组,周期取消率明显低于程序化组(P均<0.05);继续卵裂率、临床妊娠率、流产率,两组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论封闭式麦管玻璃化法用于人早期胚胎冷冻可简化冷冻程序,更好地保存胚胎复苏后的发育潜能。

不同冷冻方法造成的冻融胚胎卵裂球损伤对于移植完整胚胎发育潜能的影响

目的探讨分裂期胚胎经玻璃化冷冻法和慢速程序冷冻法冻融后,不同胚胎卵裂球的存活状态对移植完整胚胎后胚胎发育潜能的影响。方法回顾性分析994个(共2 081枚分裂期胚胎)冻融胚胎移植(FET)周期,根据胚胎冷冻保存方法和复苏后胚胎的卵裂球完整与否分为四组:玻璃化冷冻复苏后胚胎卵裂球均完整组(A组)552例,玻璃化冷冻复苏后胚胎卵裂球部分损伤组(B组)156例,慢速程序化冷冻复苏后胚胎卵裂球均完整组(C组)115例,慢速程序化冷冻复苏后胚胎卵裂球部分损伤组(D组)171例,四组均选择完整胚胎进行移植。比较四组的临床妊娠率、胚胎种植率及抱婴回家率。结果 B、D组复苏的胚胎数显著高于A、C组(P均<0.01),在临床妊娠率、胚胎种植率和抱婴回家率的比较中,A组显著高于B组(54.89%、44.87%,37.67%、31.39%,46.37%、35.90%(P均<0.05),C组与D组比较均无统计学差异(P均>0.05)。结论经不同冷冻保存技术解冻的无卵裂球损伤的优质胚胎,都具有较高的发育潜能。玻璃化冷冻技术中,卵裂球损伤胚胎中剩余胚胎的发育潜能低于复苏后均完整的胚胎;而慢速程序化冷冻技术中,胚胎卵裂球损伤对剩余胚胎的发育基本无影响。

玻璃化冷冻在卵巢过度刺激综合征全胚胎冷冻中的应用

目的比较慢速程序化冷冻法(慢速法)和玻璃化冷冻法(玻璃化法)对卵巢过度刺激综合征全胚胎冷冻分裂期胚胎发育潜能的影响。方法选择为避免过度刺激而行全胚胎冷冻的不孕患者162例,按其冷冻方法的不同,分成慢速程序化冷冻组和玻璃化冷冻组,并对其随后进行首次解冻移植的胚胎复苏率、胚胎种植率、妊娠率和多胎妊娠率进行分析。结果玻璃化冷冻组72例胚胎解冻后,其溶解率、复苏率、种植率、妊娠率、多胎妊娠率分别为7.84%、96.08%、52.38%、69.44%和50.00%,慢速程序化冷冻组90例胚胎解冻后,上述指标分别为17.79%、90.38%、30.32%、52.22%和19.15%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论玻璃化冷冻法能够更好地保存胚胎复苏后的发育潜能,更适合卵巢过度刺激综合征患者胚胎的冷冻保存。

玻璃化冷冻对冻融卵裂期胚胎移植周期结局的影响

目的探讨玻璃化冷冻法对卵裂期冻融胚胎移植周期结局的影响。方法将接受体外受精-胚胎移植患者剩余的可利用胚胎进行玻璃化冷冻或者慢速程序化冷冻，比较胚胎复苏后的复苏率、胚胎存活率、完整存活率、种植率、妊娠率等指标。结果玻璃化冷冻复苏248个周期、746个胚胎，存活643个（86．2％），完整存活594个（79．4％），移植244个周期，临床妊娠107个周期（43．9％），种植率26．1％，流产9个周期（8．5％）。慢速程序冷冻复苏225个周期、818个胚胎，存活598个（73．1％），完整存活436个（53．3％），移植225个周期，临床妊娠74个周期（32．9％），种植率15．2％，流产7个周期f9．5％）。玻璃化法冷冻后的胚胎存活率、完整存活率、临床妊娠率、种植率明显高于慢速程序冷冻法（P〈0．05）。结论玻璃化冷冻法是冻存人类卵裂期胚胎理想的方法，可以提高胚胎的有效利用。

不同冷冻方法对人卵裂期胚胎发育潜能的影响

目的：比较玻璃化法与慢速程序法对人卵裂期胚胎冷冻复苏的效果.方法：将接受体外受精-胚胎移植患者的取卵周期移植后剩余的胚胎,分别进行玻璃化法或慢速程序法冷冻,比较两组胚胎解冻后的复苏率、胚胎完整率、胚胎种植率、临床妊娠率及观察非当日移植的复苏胚胎的发育潜能等指标.结果：玻璃化冷冻组的活产率均显著高于慢速程序化冷冻;玻璃化冷冻后的胚胎复苏率和胚胎完整率显著高于慢速程序化冷冻;复苏周期移植取消率显著低于慢速程序化冷冻;而临床妊娠率和种植率的差异无统计学意义.结论：玻璃化冷冻和慢速程序化冷冻相比有更高的复苏率和胚胎利用率.

促进自体冻存卵巢组织移植存活的方法研究进展

随着癌症治疗技术的发展,癌症患者的生存率显著提高。但化学药物治疗(化疗)和放射治疗(放疗)可能导致年轻女性癌症患者发生卵巢早衰和不孕,而自体冻存卵巢组织移植是这类患者保存生育能力的有效方法。目前,该技术最大的挑战是移植后卵泡大量丢失。本文综述了自体冻存卵巢组织移植存活的影响因素及改善方法。

慢冻与玻璃化冷冻解冻胚胎囊胚培养后临床结局的比较研究

目的比较研究在玻璃化冷冻和慢冻解冻后卵裂期胚胎的发育潜能和临床结局。方法在我院生殖医学中心以同期慢速冷冻解冻胚胎为对照,收集2015年3月-2017年5月在行玻璃化冷冻解冻的分裂期胚胎,并进行囊胚培养,如继续发育后行胚胎移植,并随访比较其临床结局。结果玻璃化组复苏率为99.4±4.1%,囊胚形成率为60.0%±33.0%,临床妊娠率为56.8%(54/95),出生率为47.4%(45/95);慢冻组复苏率为95.2±12.2%,囊胚形成率为48.3%±29.6%,临床妊娠率为50.0%(19/38),出生率为44.7%(17/38)。两组冻胚时年龄、冷冻时平均优质胚胎数比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组囊胚形成率、临床妊娠率和出生率比较,未发现差异有统计学意义(P>0.05)。结论胚胎的玻璃化冷冻保存,可以获得比较满意的囊胚形成率和临床结局;囊胚培养可以进一步筛选具有种植潜能的胚胎。

如何优化胚胎冻存方案改善患者妊娠结局

目的：探讨如何优化胚胎冻存的方案以提高胚胎解冻移植的成功率，降低多胎率，增加一次取卵的累积妊娠率。方法回顾性分析1166个冻融胚胎移植（FET）周期的临床资料，分为玻璃化冷冻组（445）和慢速程序冷冻组（721）；445个玻璃化冷冻FET周期分为单胚组（28个周期）、双胚组（71个周期）、三胚组（346个周期）。0～1个优胚为O0～1组（235个周期）、2个优胚为O2组（80个周期），3个优胚为O3组（130个周期）。比较各组之间的妊娠结局（着床率、临床妊娠率、流产率及活产率）。结果（1）玻璃化冷冻组的胚胎复苏成活率（98.3%vs 73.1%）、无损伤胚胎复苏率（83.3%vs 62.1%）、着床率（36.8%vs 29.9%）、临床妊娠率（57.1%vs 44.0%）及活产率（47.9%vs 34.5%）高于慢速程序冷冻组（P＜0.05）。（2）三胚组的临床妊娠率（62.7%vs 39.4%vs 32.1%）、多胎率（37.6%vs 10.7%vs 0）及活产率（52.6%vs 31.0%vs 21.4%）明显高于单胚和双胚组（P＜0.05）。（3）O2～3组的着床率（33.0%vs 27.1%）、临床妊娠率（65.2%vs 48.1%）、多胎率（38.0%vs 20.4%）及活产率（56.2%vs 39.2%）高于O0～1组（P＜0.05）。（4）O3组的着床率（36.8%vs 26.3%）和多胎率（46.7%vs 21.3%）高于O2组（P＜0.05）；但两组间临床妊娠率（69.2%vs 58.8%）、流产率（15.6%vs 10.6%）、异位妊娠率（0 vs 0）、活产率（58.5%vs 52.5%）及早产率（26.3%vs 14.3%）差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论采用玻璃化冷冻技术可以提高临床妊娠率和活产率、降低多胎率，且每管冻存2个优胚效果最好。

冷冻时间对冻融胚胎移植周期结局的影响

目的探讨受精后第二天(D2)和第三天(D3)人胚胎冷冻对冻融胚胎移植周期结局的影响。方法回顾性分析本中心403个D2和D3胚胎程序化慢速冷冻-快速解冻周期,冷冻复苏后的胚胎存活率、完整率、种植率、临床妊娠率等指标。结果 D2冻融移植周期291个,存活率98.2%,完整率78.5%,胚胎种植率16.9%,临床妊娠率33.0%;D3解冻移植周期112个,存活率95.8%,完整率67.5%,胚胎种植率21.5%,临床妊娠率34.8%。D2比D3能显著提高胚胎存活率和完整率(P<0.05),但在临床妊娠率、胚胎种植率上无显著性差异。D2和D3胚胎在当天和提前解冻组的临床妊娠率、胚胎种植率差异没有显著意义。结论 D3胚胎冷冻没有比D2胚胎更有优势,D2胚胎对冷冻解冻可能具有更好的耐受。可以根据工作需要以及病人情况选择冷冻时间。

中国首次青春期前男孩睾丸组织冷冻保存3例报道并文献复习

目的探讨重度β地中海贫血(β-thalassemia,β-TM)青春期前男孩在性腺毒性治疗前进行生育力保存的方法。方法报道3例重度β-TM男孩行造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)前,采用慢速程序化冷冻方法行睾丸组织冷冻保存,并结合文献对青春期前男孩进行生育力保存的必要性和地中海贫血男孩生育力监测、睾丸冷冻方法学及其相关流程进行阐述。结果采用慢速程序化冷冻方法分别成功为3例男孩冷冻31块、31块、20块睾丸组织,冷冻过程顺利。结论对拟行HSCT的重度β-TM男孩,青春期前睾丸组织冷冻可以保存其生育力,为其成年后孕育后代留下希望。

冷冻保存时间与解冻后胚胎发育潜能的关系

目的探讨冻存时间对胚胎发育潜能的影响。方法将2013.8-2016.5我院行程序化冷冻胚胎复苏移植的胚胎按冻存时间分为三组,组1为冻存≤12个月,组2为13-60个月,组3为≥60个月,进行胚胎复苏和发育潜能的比较。结果三组胚胎存活率、完整率和继续发育、囊胚形成和优囊率均无统计学差异(P>0.05)。结论冻存时间对胚胎复苏和发育潜能并无影响。

生育力保护之卵巢组织冷冻技术的研究进展

肿瘤治疗可导致儿童、青少年及年轻患者丧失生育能力及生殖内分泌功能,卵巢组织冷冻技术是继胚胎冷冻、卵子冷冻的新型技术,不仅能够保存患者生育力,同时也能维持生殖内分泌功能。卵巢组织冷冻技术分为慢速程序化冷冻和玻璃化冷冻两种,目前尚未形成冷冻方案的统一共识,两种冷冻技术优缺点各异,且当前仍处在一些关键的技术难点。本文将就卵巢冷冻技术研究进展进行阐述。