程序性坏死特异性抑制剂-1对呼吸机相关性肺损伤的保护作用

目的探讨程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对呼吸机相关性肺损伤(VILI)大鼠的保护作用。方法将40只SD大鼠按随机数字表法分为自主呼吸组(C组)、正常潮气量(VT)组(N组)、高VT组(H组)和Nec-1组共4组,每组10只。C组保持自主呼吸,N组、H组和Nec-1组分别给予8、40、40 mL/kg的VT行机械通气,Nec-1组在机械通气开始时静脉给予Nec-1(1 mg/kg)。通气4 h后收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织标本,测定BALF中总细胞数、总蛋白水平、白细胞介素(IL)-6、IL-1β及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。测定肺组织湿/干质量比值(W/D),HE染色观察肺组织病理学改变并进行肺组织评分;采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)分别检测肺组织中受体相互作用蛋白1(RIPK1)、RIPK3和核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的m RNA及蛋白表达。结果 C组和N组大鼠BALF中和肺组织各指标差异均无统计学意义。H组大鼠BALF中总细胞数、总蛋白、炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平、肺组织W/D比值、肺组织病理评分及肺组织内RIPK1、RIPK3、NF-κB p65的m RNA和蛋白相对表达水平较C组和N组明显升高(P<0.01)。与H组相比,Nec-1组大鼠BALF中和肺组织各指标水平下降(P<0.01)。结论 RIPK1/RIPK3/NF-κB信号传导通路参与大鼠VILI,Nec-1对大鼠VILI的肺脏具有一定的保护作用。

蜂毒肽诱导人肝癌细胞系SMMC-7721程序性坏死

目的探讨蜂毒肽(MLT)对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤作用及可能机制。方法采用MTT法检测不同浓度蜂毒肽对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤及程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对蜂毒肽杀伤SMMC-7721细胞的抑制作用。Hoechst 33342及PI双染色观察细胞程序性坏死的发生,流式细胞术检测细胞程序性坏死率,透射电子显微镜检测细胞超微结构变化,Western blotting法检测SMMC-7721细胞内受体相互作用蛋白1(RIP1)的表达变化。结果与对照组比较,不同浓度蜂毒肽作用SMMC-7721细胞24 h后,细胞增殖活力明显下降(P<0.05);细胞染色呈深蓝色和红色的形态;细胞膜完整性被破坏、细胞器肿胀、细胞器膜被破坏、核膜完整性丧失,表明细胞发生坏死;Westen blotting结果显示,SMMC-7721细胞内RIP1表达比例升高。与蜂毒肽给药组比较,Nec-1预处理组细胞增殖活力显著提高,细胞坏死率降低,细胞内RIP1表达下调。结论蜂毒肽通过RIP1介导的程序性坏死途径诱导SMMC-7721细胞死亡。

程序性坏死特异性抑制剂-1对创伤失血性休克大鼠肝脏保护作用的研究

目的探讨程序性坏死特异性抑制剂-1（Nee-1）对创伤失血性休克大鼠的肝脏保护作用。方法采用左下肢股骨、胫骨骨折及腹部软组织损伤并失血／再灌注的方法制备大鼠创伤失血性休克模型。选择雄性SD大鼠，22只按随机数字表法分为模型组和Nec-1组，每组11只，观察72h死亡率。72只同法随机分为假手术组、模型组、Nec-1组，每组24只。假手术组仅麻醉和分离、结扎血管，不进行创伤、失血、再灌注；Nee-1组于再灌注前5min经股静脉给予1mg／kgNee-1；模型组给予等体积溶剂。于再灌注后2,4、8h采集各组血清和肝组织，用全自动生化仪检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）的水平；光镜下观察肝组织病理学改变；采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测肝组织肿瘤坏死因子-仪（TNF—Ot）和白细胞介素-I[3（IL-1B）的mRNA表达；蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测肝组织受体相互作用蛋白酶-1／3（RIPl／RIP3）的蛋白表达。结果Nee-1组大鼠72h死亡率较模型组明显降低（18．18％（2／11）比63．64％（7／11），P=0．0403。模型组2h血清ALT、AST即较假手术组明显升高[ALT（U／L）：110．21±22．32比80．98±19．94。AST（U／L）：364．29±64．83比279．76±70．64，均P〈0．05J，8h达高峰[ALT（U／L）：387．41±47．11比82．76±22．44，AST（U／L）：973．35±77．51比261．49±52．03，均P〈0．01]。Nee-1组血清ALT、AST水平较模型组明显降低[ALT（U/L）4h：144．64±33．79比213．96±36．21，8h：159．48±43．57比387．41±47．11；AST（U／L）4h：398．78±59．48比630．61±59．93，8h：427．38±80．75比973．35±77．51，均P〈0．01]。光镜下模型组大鼠肝窦扩张、淤血，肝细胞变性、坏死，大量炎性细胞浸润；Nec-1组肝组织损伤程度明显减轻。模型组肝组织TNF—α、IL-1β的mRNA表达和RIPl、RIP3的蛋白表达随时间延长呈逐渐升高趋势；给予Nec-1后各时间点TNF—α、IL-1β的mRNA表达均较模型组明显降低，以8h最为明显（TNF—αmRNA：1．457±0．081比2．317±0．062，IL—1βmRNA：0．690±0．087比1．812±0．112，均P〈0．01），而肝组织RIP1、RIP3的蛋白表达与模型组相比差异无统计学意义（RIPl蛋白8h：0．561±0．033比0．5874-0．036，RIP3蛋白8h：0．976±0．040比1．044±0．115，均P〉O．05）。结论Nec-1对创伤失血性休克大鼠肝脏具有明显的保护作用，具体机制需进一步深入研究。

冠心病患者血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂与炎性因子的相关性

目的探讨冠心病(CHD)患者血清脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)与炎性因子的关系。方法选择CHD患者139例,健康对照者52例,依据相关诊断标准将CHD患者分为稳定性心绞痛(SAP)组54例、不稳定性心绞痛(UAP)组48例、急性心肌梗死(AMI)组37例,同时根据冠状动脉病变支数将CHD患者分为1支病变组60例、2支病变组46例、≥3支病变组33例。采用ELISA法测定血清中vaspin、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-10、1,25二羟维生素D3〔1,25(OH)_2D_3〕,并做统计学处理。结果 CHD组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于健康对照组,TNF-α、IL-6、IL-10高于健康对照组(P<0.05)。按临床类型分组:AMI组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于SAP组、UAP组,TNF-α、IL-6、IL-10高于SAP组、UAP组(P<0.05);UAP组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于SAP组,TNF-α、IL-10高于SAP组,(P<0.05)。将CHD患者按照血管病变的情况分组:≥3支病变组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于1支病变组和2支病变组,TNF-α、IL-6、IL-10、Gensini积分高于1支病变和2支病变组(P<0.05)。2支病变组vaspin、1,25(OH)_2D_3低于1支病变组,(TNF)-α、(IL)-10、Gensini积分高于1支病变组,(P<0.05)。Spearman相关分析显示,在CHD组血清vaspin与BMI、1,25(OH)_2D_3呈正相关(r值分别为0.462、0.214,P<0.05),与TNF-α、IL-6、IL-10呈负相关(r值分别为-0.320、-0.238、-0.321,P<0.05)。根据血管病变支数分组:Gensini积分与vaspin、1,25(OH)_2D_3呈负相关(r值分别为-0.538、-0.242,P<0.05),与TNF-α、IL-6、IL-10呈正相关(r值分别为0.385、0.265、0.341,P<0.05)。结论 CHD患者具有较低浓度的vaspin,vaspin含量与炎性因子相关,与CHD的血管病变严重程度有关。

程序性坏死特异性抑制剂-1促进大鼠脊髓损伤修复的研究

目的 观察鞘内注射程序性坏死特异性抑制剂-1（Nec-1）对大鼠对脊髓损伤修复的促进作用.方法 SD大鼠30只,采用改良Allen＇s法建立大鼠脊髓损伤模型,按照随机数字表法分为3组,假手术组、生理盐水组和Nec-1治疗组,每组10只.脊髓损伤后7d对各组大鼠进行运动功能评价、运动诱发电位测定、脊髓坏死测定.结果 术后7、14、21 d Nec-1治疗组大鼠运动功能恢复均好于生理盐水组,运动功能评分显著高于生理盐水组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.术后7d时,Nec-1治疗组大鼠皮层运动诱发电位（MEP）潜伏期变化为（71.37 ±12.71）％,显著低于生理盐水组[（104.5±14.57）％,t=8.147,P＜0.01],波幅峰值变化为（69.27±4.75）％,也显著小于生理盐水组[（87.93±5.47）％,t=3.201,P＜0.05].术后7d时,Nec-1治疗组脊髓损伤坏死区为（6.91±0.42） mm2,较生理盐水组脊髓损伤坏死区范围显著减小[（11.29 ±0.63） mm2,t=7.542,P＜0.01）.术后7d时,Nec-1治疗组存活神经元细胞计数为（10.54±1.27）个,较生理盐水组显著增多,差异有统计学意义[（5.27±0.47）个,t=6.341,P＜0.01];染色髓鞘吸光度（A）相对值Nec-1治疗组为0.94±0.06,较生理盐水组显著增多,差异有统计学意义（0.67±0.08,t=5.574,P＜0.01）.结论 Nec-1可以改善大鼠运动功能及皮质运动诱发电位的恢复,对脊髓损伤修复具有促进作用.

Nec-1对于环孢素A导致的细胞毒性的保护作用与机制研究

目的探讨Nec-1对于环孢素A导致的细胞毒性的保护作用及其潜在的分子机制。方法以Nec-1和环孢素A共同作用于小鼠肾小管上皮细胞株MRTEpi C、肾小球内皮细胞MGEC、肾小球系膜细胞株MMC,然后采用MTT法、软琼脂克隆形成实验分别检测细胞的生长曲线变化、克隆形成能力。采用流式细胞术检测细胞凋亡。采用Western blot检测细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK2、Cyclin E和细胞凋亡相关Caspase3。结果环孢素A作用后,细胞生长能力明显下降,克隆形成能力明显降低,具有统计学意义（P〈0.05）。细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK2、Cyclin E显著升高（P〈0.05）,细胞凋亡的比例和Caspase 3的表达无变化。结论 Nec-1通过上调细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CDK4、CDK2、Cyclin E对肾小球和肾小管细胞产生细胞毒性作用,而Nec-1具有保护作用。

程序性坏死特异性抑制剂-1可抑制心搏骤停后大鼠脑细胞程序性坏死并改善脑损伤

目的探讨程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对心搏骤停后大鼠脑损伤的影响及其机制。方法将24只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、模型组和Nec-1组,每组8只。Sham组仅行一般手术操作,不诱导心搏骤停;模型组采用窒息法诱导大鼠心搏骤停后6 min进行心肺复苏(CPR);Nec-1组于大鼠心搏骤停后立即给予1 mg/kg的Nec-1干预,心搏骤停后6 min进行CPR。各组大鼠于CPR后72 h进行神经功能缺损评分(NDS);采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清S100B水平;采用免疫荧光法观察脑皮质和海马受体相互作用蛋白3(RIP3)的表达,并计算阳性率;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测脑组织RIP3的蛋白表达水平。结果CPR后72 h,模型组大鼠出现明显的脑细胞程序性坏死和脑损伤,表现为:与Sham组比较,NDS评分明显下降〔分:57.0(52.7,60.0)比80.0(80.0,80.0),P<0.05〕,血清S100B水平明显升高(ng/L:44.9±4.5比18.6±1.5,P<0.05),脑皮质和海马RIP3阳性率均明显增加〔脑皮质:(31.7±4.8)%比(11.6±3.2)%,海马:(28.4±0.8)%比(10.9±0.6)%,均P<0.05〕,脑组织RIP3蛋白表达水平明显升高〔RIP3蛋白(RIP3/GAPDH):0.708(0.642,0.722)比0.408(0.253,0.504),P<0.05〕。而给予Nec-1干预后,大鼠脑细胞程序性坏死和脑损伤均得到明显改善;与模型组比较,Nec-1组大鼠CPR后72 h NDS评分明显升高〔分:70.5(68.5,71.7)比57.0(52.7,60.0),P<0.05〕,血清S100B水平明显下降(ng/L:31.9±2.7比44.9±4.5,P<0.05),脑皮质和海马RIP3阳性率均明显降低〔脑皮质:(23.7±4.1)%比(31.7±4.8)%,海马:(20.4±0.4)%比(28.4±0.8)%,均P<0.05〕,脑组织RIP3蛋白表达水平明显下降〔RIP3蛋白(RIP3/GAPDH):0.437(0.379,0.507)比0.708(0.642,0.722),P<0.05〕。结论Nec-1可通过抑制RIP3蛋白表达改善脑细胞程序性坏死,从而减轻心搏骤停后大鼠脑损伤。

程序性坏死特异性抑制剂-1对脓毒症大鼠肝脏单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的：探讨程序性坏死特异性抑制剂-1（Nec-1）对脓毒症大鼠肝脏单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响及其机制。方法按随机数字表法将48只雄性SD大鼠分为假手术（Sham）组、模型组、Nec-1组，每组16只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症大鼠模型；Sham组仅麻醉、开腹翻动盲肠后关腹，不进行结扎。Nec-1组于制模前30min尾静脉注射Nec-1溶液1mg/kg〔25mgNec-1溶于2.5mL二甲基亚砜（DMSO）溶剂中〕；模型组则注射DMSO0.1mL/kg。各组分别于制模后即刻（0h）和8h取腹主动脉血及肝脏组织，采用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平；苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肝组织病理学改变；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）含量；反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝组织MCP-1mRNA表达。结果制模后0h，3组血清ALT、AST、TNF-α、IL-6及肝脏MCP-1mRNA表达差异均无统计学意义，肝组织细胞结构正常。制模后8h，模型组和Nec-1组血清ALT、AST、TNF-α、IL-6及肝脏MCP-1mRNA表达均较Sham组明显升高〔ALT（U/L）：172.35±21.88、129.67±18.20比60.04±11.74，AST（U/L）：511.03±34.92、363.03±25.25比254.83±31.04，TNF-α（ng/L）：603.96±24.18、483.87±26.60比265.74±15.14，IL-6（ng/L）：975.62±65.37、712.09±45.47比310.42±13.88，MCP-1mRNA（2-ΔΔCt）：7.09±0.18、5.51±0.45比0.99±0.06，均P＜0.05〕；Nec-1组各指标均较模型组明显下降（均P＜0.05）。制模后8h，光镜下模型组可见肝小叶结构破坏、淤血及炎性细胞浸润；而Nec-1组肝组织病理改变较模型组明显减轻。结论 Nec-1预处理可有效减轻脓毒症大鼠肝脏损伤，减少循环中炎性因子含量及肝脏中MCP-1mRNA表达，从而减轻炎症对机体的损伤。

急性肝衰竭小鼠necroptosis的发生及Nec-1的干预作用研究

目的分析急性肝衰竭小鼠中程序性坏死(necroptosis)发生情况及特异性抑制剂-1(Nec-1)的干预作用。方法 2017年6月—2018年3月在解放军总医院第五医学中心进行动物实验。60只SPF级雄性C57/BL6小鼠随机数字表法分为对照组、模型组(D-半乳糖胺和脂多糖造模)、干预组(造模前给予Nec-1)每组20只,检测小鼠造模后肝功能指标(ALT)、炎性因子(TNF-α、IL-6、IL-10)、受体相互作用蛋白(RIP),并观察肝脏病理变化。结果造模后1 h,急性肝衰竭模型组ALT、TNF-α、IL-6、IL-10、RIP1、RIP3水平均明显高于对照组(t/P=6.821/<0.001,11.386/<0.001,10.609/<0.001,8.541/<0.001,5.867/<0.001;4.388/0.002),干预组的ALT、TNF-α、IL-6、IL-10水平均低于模型组(t/P=2.753/0.023,3.558/0.012,5.796/<0.001,3.332/0.011);3 h时干预组的RIP1水平低于模型组(t=2.416,P=0.04),其余时间点以及RIP3水平比较2组差异无统计学意义(P>0.05)。结论程序性坏死在急性肝衰竭的发生中发挥了作用,Nec-1可在一定程度上抑制其作用。

程序性坏死特异性抑制剂-1对脓毒症大鼠心肌受体作用蛋白表达的影响

目的 探讨不同剂量程序性坏死特异性抑制剂-1（Nec-1）对脓毒症大鼠心肌保护作用的量效关系.方法 50只SD大鼠按随机数字表法分为5组（n=10）：空白组、模型组、Nec-1小剂量组、Nec-1中剂量组、Nec-1大剂量组,采用鼠尾静脉注射内毒素方法建模,在建模6h后收集标本,通过光镜观察心肌组织形态学变化,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组血浆肌钙蛋白（cTnI）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）,采用Western blot法检测心肌组织中受体作用蛋白1（RIP1）、受体作用蛋白3（RIP3）的表达.结果 与空白组比较,模型组血浆cTnI[（7.58±0.46）比（1.06±0.17）ng/ml]、TNF-α[（937.86±53.36）比（236.95±28.68）pg/ml]、IL-6[（776.13±17.94）比（168.35±20.60）pg/ml]活性均增高（t=-30.561,P=0.000;t=-32.122,P=0.000;t=-39.684,P=0.000）,RIP1、RIP3蛋白表达（1.22±0.14比0.41±0.11,t=-17.480,P=0.000;1.15±0.02比0.18±0.08,t=-52.463,P=0.000）均增高.与模型组比较Nec-1干预组cTnI[（7.24±0.41）、（4.43±0.84）、（1.26±0.17）比（7.58±0.46）ng/ml;t=1.622,P=0.112;t=14.765,P=0.000;t=29.606,P=0.000]、TNF-α[（878.73±70.24）、（437.43±59.26）、（273.44±23.745）比（937.86±53.36）pg/ml;t=2.637,P=0.012;t=22.221,P=0.000;t=29.235,P=0.001]、IL-6[（719.18±49.83）、（381.89±28.69）、（221.93±42.58）比（776.13±17.94）pg/ml;t=3.722,P=0.000;t=25.743,P=0.000;t=36.184,P=0.000],RIP1、RIP3蛋白表达（0.83±0.09、0.70±0.09、0.55±0.09比1.22±0.14;t=8.598,P=0.000;t=11.297,P=0.000;t=14.511,P=0.000;0.94±0.02、0.73±0.01、0.53±0.04比1.15±0.02;t=10.961,P=0.000;t=22.405,P=0.000;t=33.414,P=0.000）,且随着Nec-1剂量升高表达依次下降.心肌病理损伤在Nec-1大剂量组表现最轻.结论 大剂量Nec-1能改善脓毒症时心肌组织的病理性炎症损伤;Nec-1能抑制脓毒症心肌组织RIP1、RIP3蛋白表达.

程序性坏死特异性抑制剂-1对高糖环境下牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响

目的探讨程序性坏死特异性抑制剂⁃1(Nec⁃1)对高糖环境下牙周膜干细胞(PDLSC)的增殖和成骨分化的影响。方法体外克隆培养的PDLSC,按照如下处理方法分为3组:对照组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖)和高糖+Nec⁃1组(25 mmol/L葡萄糖+30μmol/L Nec⁃1)。通过蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞坏死性凋亡相关分子RIP1、RIP3的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞增殖活力,通过茜素红染色、碱性磷酸酶(ALP)定量检测和实时荧光定量PCR等方法分析PDLSC的成骨分化情况。使用SPSS 26.0软件进行统计分析,采用单因素方差分析比较各组间细胞增殖活力(MTT吸光度A值)、ALP表达含量及成骨相关基因(COL1、RUNX2、OCN)相对表达水平,并用LSD⁃t检验进行组间多重比较。结果Western blot结果显示,高糖组PDLSC的RIP1和RIP3的表达较对照组明显增加,而高糖+Nec⁃1组的RIP1和RIP3的表达明显弱于高糖组。PDLSC培养7 d后,高糖组增殖活力较对照组明显降低,其吸光度A值(0.67±0.06)显著低于对照组(1.23±0.12),差异有统计学意义(t=9.652,P<0.001);而Nec⁃1抑制后,PDLSC的增殖活力明显增加,高糖+Nec⁃1组吸光度A值(1.12±0.11)显著高于高糖组(0.67±0.06),差异有统计学意义(t=8.185,P<0.001)。经矿化诱导后,高糖组PDLSC 14 d时形成的矿化结节、7 d时ALP表达含量(3.42±0.37)和成骨相关基因COL1(1.86±0.16)、RUNX2(1.55±0.23)、OCN(1.08±0.20)的相对表达量均较对照组均显著减少,差异均有统计学意义(t_(ALP)=13.149,t_(COL1)=14.257,t_(RUNX2)=7.593,t_(OCN)=8.606,P均<0.001);而Nec⁃1抑制后,PDLSC的成骨分化增加,高糖+Nec⁃1组PDLSC 14 d时形成的矿化结节、7 d时ALP表达含量(6.06±0.26)和成骨相关基因COL1(3.64±0.30)、RUNX2(2.53±0.26)、OCN(2.14±0.30)的相对表达量较高糖组均显著升高,差异均有统计学意义(t_(ALP)=13.033,t_(COL1)=11.636,t_(RUNX2)=6.332,t_(OCN)=6.573,P均<0.001)。结论体外培养条件下,高糖环境抑制了PDLSC的增殖和成骨分化,而Nec⁃1明显改善了高糖环境下PDLSC的增殖和成骨分化。

Necrostatin －1对创伤失血性休克大鼠肝脏巨噬细胞炎性蛋白－1α表达的影响

目的：探讨程序性坏死特异性抑制剂－1（necrostation－1， Nec－1）对创伤失血性休克大鼠肝脏巨噬细胞炎性蛋白－1α（ MIP－1α）的影响及其机制。方法采用左下肢股骨、胫骨骨折及腹部软组织损伤并失血、再灌注的方法制备大鼠创伤失血性休克模型，将40只雄性SD大鼠按随机数字表法随机分为模型组、DMSO组、Nec－1组、假手术组，每组10只。假手术组仅进行麻醉、分离血管、结扎血管，并不进行创伤失血和再灌注。模型组为创伤失血性休克大鼠模型，不进行任何干预。 DMSO组建立创伤失血性休克大鼠模型，再灌注前5 min前股静脉给予DMSO溶剂。 Nec－1组于再灌注5 min股静脉给予Nec－11 mg／kg。于再灌注后24 h取动物血清及肝脏组织。检测血清丙氨酸氨基转移酶（ ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（ AST）水平；HE染色观察肝脏病理变化；酶联免疫分析法（ ELISA）分析血清MIP－1α含量；RT－PCR技术检测肝脏组织MIP－1αmRNA含量；蛋白质免疫印迹法（ Western blotting）检测肝脏组织MIP－1α含量。结果模型组血清ALT、AST及血清MIP－1α含量与DMSO组比较差异无统计学意义（P＞0．05）， Nec－1组24 h血清ALT、AST及血清MIP－1α含量较模型组及DMSO组有明显下降（P＜0.05）。光镜下模型组及DMSO组可见肝小叶结构破坏、淤血、炎性细胞浸润，Nec－1组肝组织损伤明显减轻。 Nec－1组MIP－1αmRNA及MIP－1α蛋白含量低于模型组及DMSO组（P＜0.05）。结论Nec－1可以有效降低创伤失血性休克对肝脏的损伤，减少MIP－1α蛋白的表达，减少免疫细胞对组织的浸润及破坏。

Necrostatin-1对创伤失血性休克大鼠肝脏高迁移率族蛋白B1表达的影响

目的探讨程序性坏死特异性抑制剂-1（necrostatin-1，Nec-1）对创伤失血性休克大鼠肝脏HMGB-1的影响及其机制。方法采用创伤失血性大鼠休克模型，将96只雄性SD大鼠按随机数字表法随机分为假手术组、DMSO组、Nec-1组，每组32只。假手术组仅进行麻醉、分离血管、结扎血管，并不进行创伤失血和再灌注。DMSO组建立创伤失心陆休克大鼠模型，再灌注前5min前股静脉给予DMSO溶剂。Nec-1组于再灌注5rain股静脉给予Nec-1（1ms／kg）。于再灌注后分别在2、8、16、24h各处死动物8只，取动物血清及肝脏组织。检测血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平；HE染色观察肝脏病理变化；透射电镜观察再灌注后24h后细胞器水平的细胞坏死；酶联免疫分析法（ELISA）分析血清中HMGB-1含量；蛋白质免疫印迹法（western blotting）分别检测肝脏组织中胞质和总蛋白的HMGB—1含量。结果Nec-1组与DMSO组比较，血清AlJrr在8h（P〈0．05）、16h（P〈0．01）、24h（P〈0．01）表达较低，Nec-1组血清AST在8h（P〈0．01）、16h（P〈0．01）、24h（P〈0．01）表达较DMSO组低；与DMSO组比较，Nec-1组血清HMGB-1在8h（P〈0．05）、16h（P〈0．01）、24h（P〈0．01）有明显下降。光镜及电镜下DMSO组及Nec-1组可见肝小叶结构破坏，淤血，炎性细胞浸润及细胞器损伤，Nec-1组肝组织损伤明显减轻；与DMSO组比较，Nec-1组肝细胞中胞质蛋白HMGB-1在8h（P〈0．01）、16h（P〈0．01）、24h（P〈0．01）有明显下降，Nec—1组总蛋白HMGB—1在8h（P〈0．05）、24h（P〈0．05）有明显下降。结论Nec-1可以有效降低创伤失血性休克对肝脏的损伤，减少HMGB-1的释放，有效保护肝细胞。