非程控降温-80℃冷冻保存外周血干细胞的活性观察

目的 :观察非程控降温 - 80℃冷冻保存外周血造血干 /祖细胞的活性 ,为临床自体外周血造血干细胞移植提供方便、有效的冻存方法。方法 :常规方法动员外周血干细胞 ,CS - 30 0 0PLUS血细胞分离机采集干细胞 ,以 10 %二甲亚砜、10 %人AB型血清、RPM116 4 0培养基为冷冻保护剂 ,2ml/管冻存干细胞 ,按第 1、2、4周和第 2、3月顺序复苏细胞并测定GM -CFU集落数、台盼兰拒染率和CD34+ 细胞百分率。结果 :用该方法冷冻保存的外周血干细胞 ,在 4周内其细胞活性与采集时的细胞活性无明显差别 (P >0 .0 5 ) ,冻存至 2～ 3个月时细胞活性则明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 :应用血清和DMSO等作为冷冻保护剂、- 80℃直接冻存的外周血干细胞 ,在 4周内复苏后其细胞活性无明显降低。

26例动员外周血干细胞的程控降温冷冻保存效果评价

目的评价程控降温冷冻保存高浓度外周血干细胞的效果。方法采集动员的患者外周血干细胞,用程控降温系统降温至-80℃后保存于液氮中。冷冻前和解冻后均做有核细胞计数、粒单-集落形成单位(colonyformingunit-granulocyte/macrophage,CFU-GM)培养和苔盼蓝拒染率实验。结果冷冻的外周血有核细胞终浓度平均为1.405×108/ml,融化后有核细胞和CFU-GM回收率分别为80.64%±11.51%和94.01%±25.42%;拒染率为84.69%±8.72%。26例患者除1例死于预处理毒性不能进行评价外,余者均获得快速稳定造血功能重建。结论程控降温冷冻保存高浓度的外周血干细胞是一种安全有效的方法。

精密低温计算机程控降温仪的研制与实现

论文详细介绍了精密低温计算机程控降温仪的研制与具体的实现过程。运用改进的数字 PID算法实现了加热 /制冷双输出调节 ,成功地解决了电磁阀低温下长期工作时可靠性差、容易损坏造成系统失控的问题。能够对程控降温过程进行计算机监控和记录 ,有利于低温生物学和低温医学领域的研究和开发。

程控降温后液氮保存对自体外周血造血干细胞含量和活性的影响

目的 :观察程控降温后液氮保存对自体外周血干细胞含量和活性的影响。方法 :1 3例接受APBSCT患者分离的造血干细胞利用程控降温仪进行冷冻 ,然后置液氮液相内 ( -1 96℃ )保存 ,检测患者冻存前后的有核细胞数 ,CFU -GM ,CD3 4+细胞。结果 :冻存前后CFU -GM ,有核细胞数 ,CD3 4+细胞统计学之间无显著性差异。结论 :自体外周血干细胞体外冷冻处理和保存是有效和适当的。

-80℃冰箱非程控降温冻存脐血造血干细胞

目的：为脐血造血干细胞（CBHSC）的冻存建立简便、经济且有效的方法。方法：采用5%二甲基亚砜（DMSO）加6%羟乙基淀粉（HES）为冷冻保护剂，不用程控降温装置，直接置CBHSC于-80℃冰箱中冻存1-6个月。结果：冻存6月后，单个核细胞（MNC）、粒-单系造血祖细胞（CFU-GM）和CD34^+细胞的回收率及台盼兰拒染率分别为，（91.6±1.8)%、（83.1±15.6%)、（88.2±1.8)%,(77.7±2.0)%。结论：这种简便、经济的方法能很好地保存CBHSC的造血潜能，因此，能为脐血移植冻存CBHSC。

非程控降温—80℃冷冻保存外周血干细胞及应用研究

目的 为外周血造血干细胞（PBSC）的冷冻保存建立简便，经济且有效的方法并应用于临床。方法 采用6．25％二甲基亚砜（DMSO）加7．5％右旋糖酐（DEX）为冷冻保护剂，将21例恶性血液病患者行干细胞动员，采集获取的PBSC浓集液与细胞冻存液混合，不同程控降温而直接将分装后的混悬液和小样本保存于－80℃冰箱中。于冻存前和冻存后1周，1个，3个月和6个月时分别取样分析，检测细胞回收率和台盼蓝拒梁率。结果 冻存1周和1个月其细胞回收率和存活率无明显差别（P＞0．05），冻存至3个月时细胞活性及CD34^+细胞回收率明显降低（P＜0．01），但不随同存期延长而进行性下降。19例移植患者输注保存后的PBSC均获得造血重建。结论 非程控－80℃冷冻技术是一种简便，经济和有效的造血干细胞冻存方法，且能很好地保存PBSC的造血潜能。

程控降温法与二步法对胎盘间充质干细胞冻存效果的影响

目的观察对比程控降温法与二步法对胎盘间充质干细胞深低温冻存效果的影响。方法分别采用程控降温法和二步法对3个批次的pMSCs进行液氮冻存,3个月后进行复苏,测定细胞存活率、活细胞数,观察体外培养1~4 d时的细胞形态,CCK8法进行细胞增殖检测,同时用流式细胞术鉴定细胞表面标记抗原,用油红O染色、茜素红S染色和Masson染色进行细胞三向分化能力鉴定。结果程控降温法对比二步法冻存的细胞活率在冻存前、复苏后均无显著差异(P>0.05)。倒置显微镜观察细胞形态,均在24 h时贴壁,呈短梭形,96 h时细胞密度达到95%左右,均匀铺满视野。增殖测定结果显示,培养第3~5天为两组细胞的对数生长期,第5天时增殖倍数达到最高,分别为第1天的6.44倍和6.29倍,经过短暂的平台期后进入衰亡期,增殖趋势一致;但分别在第4天(P<0.01)、第6天(P<0.05)和第7天(P<0.05)时,程控降温法冻存的细胞存活率极显著或显著高于二步法冻存的细胞。两种方法冻存细胞的表面标志性抗原CD73、CD90、CD105阳性细胞数百分比分别为99.85%、99.87%、96.45%和99.73%、99.73%、96.17%。诱导14 d后两组pMSCs均出现明显的成脂、成软骨、成骨细胞特性。结论采用程控降温法或二步法冻存pMSCs均能很好地维持细胞活力及生物特性,在条件允许情况下宜采用程控降温法,以获得增殖能力更好的种子细胞。

应用程控降温仪冷冻脐带干细胞的评估

应用程控降温仪冷冻脐带干细胞的评估安徽省立医院铁惠幽，张明水安徽省临床检验中心杨联耀人类组织相容性抗原（ＨＬＡ）一致的骨髓移植（ＢＭＴ）虽有可能治疗造血恶性疾病，再生障碍贫血，严重免疫缺陷和某些遗传性疾病，但因选择ＨＬＡ相一致的骨髓供者受到限制，使７...

-80℃非程控降温保存自体外周血干细胞的应用

目的:观察-80℃非程控降温保存自体外周血干细胞(PBSC)的应用效果。方法:常规方法动员外周血干细胞,血细胞分离机分离采集干细胞,120g/L羟乙基淀粉、体积分数为10%的DMSO、体积分数为10%的AB型血浆为冷冻保护剂与干细胞以1∶1的比例混合,然后直接将其置于-80℃冰箱保存。测定保存前以及保存后不同时间的单个核细胞(MNC)、CD34+细胞、粒-单核细胞系集落形成单位(CFU-GM)的回收率以及细胞的台盼蓝拒染率。结果:经非程控直接冷冻保存15～720d,PBSC的台盼蓝拒染率、MNC回收率的变化较小(P>0.05),而CD34+细胞、CFU-GM回收率在冻存240d后下降较明显(P<0.05),但仍分别达82.5%、79.6%。21例患者经相应处理后,回输经-80℃下保存12～46d(平均29d)的干细胞,患者于干细胞回输后14～27d(平均20.5d)获得造血功能重建。结论:在采用终浓度为60g/L羟乙基淀粉、体积分数为5%的DMSO及体积分数为5%的AB型血浆组成的冷冻保护剂情况下,-80℃非程控降温法适于PBSC的短期(240d内)保存,效果理想。

简便的造血干细胞的非程控-80℃保存

目的尝试一种新的低温保存方法。方法将７例将行自体外周血干细胞移植患者的外周血干细胞浓集液和１９例小样本骨髓分别与改进后的细胞冷冻保护液混合，不经程控降温而直接将分装后的混悬液保存在－８０℃。在１周、１月、３月时取出，４０℃水浴解冻，检测细胞回收率和锥虫蓝拒染率。结果１周、１月、３月后均有较好的细胞回收率和存活率，且无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。７例患者输注经保存后的干细胞浓集液后也很快获得造血重建。结论改进后的冷冻保护液具有良好的保护作用。该冷冻技术是一种简便而安全的造血干细胞保存方法。

骨髓细胞液氮保存21-25年后的细胞活力体外研究

为探讨适合临床应用的骨髓细胞保存方法,揭示细胞长期低温保存效果,将20人份骨髓加入DMSO-AuP(10%二甲亚砜、10%自体血浆)或DMSO-HES-HuA(5%DMSO、6%羟乙基淀粉、4%人血白蛋白)保护剂,分装2毫升/管,600-800管/人份,自控程序降温仪或-80℃低温冰箱预冻降温、液氮中保存21-25年。取冷冻骨髓细胞于38℃复温,检测细胞相关指标。结果表明:加保护剂的细胞标本在-80℃低温冰箱中为低速降温,-30℃前,与自控程序降温仪设定1℃/min的低降温速率接近。DMSO-HES-HuA与DMSO-AuP比较,红细胞形态畸形率分别为(3.5±1.5)%和(12.6±4.8)%;溶血率分别为(3.3±1.6)%和(23.1±5.1)%(p<0.05);前者渗透性脆性不变,后者减低;红细胞、血小板、粒单系造血祖细胞、长期培养起始细胞回收率,前后者对比分别为(96.1±1.8)%、(70.0±9.5)%、(49.2±10.9)%、(54.2±13.8)%vs(76.3±5.6)%、(52.7±8.1)%、(43.5±12.3)%、(47.2±13.6)%。用上述保护剂配合上述降温法保存后,细胞在间充质干细胞培养上,生长特性良好。同一保护剂用上述两种降温法保存后,细胞各种回收效果差异不显著(p>0.05)。结论:细胞在液氮中保存21-25年,其细胞形态和回收活力(率)良好;保存如骨髓这种细胞成分并非单一的标本时,用5%DMSO-6%HES-4%HuA为保护剂的-80℃冰箱预冻降温后液氮保存,方法简便、经济、易操作,适合临床应用。

实验大鼠、小鼠胚胎的缓慢冷冻和玻璃化冷冻的比较

对 3日龄小鼠胚胎和 5日龄大鼠胚胎进行了玻璃化低温保存和缓慢冷冻保存的比较研究 ,从经过超数排卵的小鼠和大鼠中收集到了 1 897个 8～ 1 6细胞的胚胎 ,经筛选后将 I级和 II级胚计 1 73 8个 (91 .62 % )分别进行两种低温保存试验 ,并对其中的 881个冷冻胚胎分阶段进行复苏 ,复苏率分别为 65 .0 3 % (小鼠 69.5 9% ,大鼠 60 .46% )和 68.45 % (小鼠72 .61 % ,大鼠 64.2 9% ) ,两者间无显著性差异 (P>0 .0 5 )。在复苏的胚胎中 ,选择其中的 488个胚胎进行移植试验 ,结果 ,玻璃化冷冻保存胚胎的移植的受孕率为 3 9.47% (89/ 2 2 2 ) ,缓慢冷冻保存胚胎的移植的受孕率为 42 .5 6% (1 1 5 / 2 66) ,两种低温保存方法经方差检验也无显著性差异 (P>0 .0 5 )

谷氨酸产生菌──短杆菌（Brevibacterium sp．）的液氮保藏

以甘油作保护剂，用程序控制降温仪控制降温速率，对谷氨酸产生菌短杆菌（Ｂｒｅ－ｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．）Ｆ９１１４衍生菌株进行液氮保藏。分别取保藏３～５个月的菌种进行形态观察，未见明显改变。经液氮保藏的菌种和按常规分纯的菌种进行发酵生产的比较，结果表明液氮保藏的菌种较常规的菌种发酵周期短１．４７％，产酸水平和转化率分别高２％和３．９％。由于液氮保藏能使菌种的主要特性稳定，不需再次分纯，保证随时提供优良菌种用于发酵生产。同时，这种方法避免了因传代过多菌种退化之弊病。

基于LabVIEW平台的低温生物显微系统自动控制研究

在低温生物的研究中,有效地实现降(复)温程序控制以避免或尽可能减少生物材料细胞的低温损伤是至关重要的。结合低温生物研究中的温度控制经验与要求,对实验系统装置结构和自动控制方案进行设计,并对程控降温程序采用LabVIEW 7.0进行了编写。在软件设计的基础上进行了系统性能测试,PID参数自整定调试及控温实验等。实验结果表明,软件性能可靠,样品层温度可以得到较好控制,能满足低温生物实验要求。

同种带瓣管道的研究和应用进展

Ross于1962年首次将异体同种主动脉瓣成功地用于主动脉瓣替换术以来[1],抗生素灭菌、程控降温、深低温保存等方法的应用推动了同种带瓣管道在心脏外科手术中的广泛应用,成为复杂先心病重建右室流出道的主要材料之一.本文就同种瓣研究和应用的进展作一简要综述.

家兔同种异体管道深低温保存的实验研究

目的 :从功能代谢角度评价深低温保存生物管道的实际效果 ,观察冷冻保存对同种动脉活性的影响。方法 :主动脉取自空气栓塞处死兔子 ,修剪后程控降温 ,液氮长期保存。复温后光镜检查 ,体外培养检测糖消耗量 ,同时采用组织块贴壁法进行原代细胞培养检测细胞生长活性。结果 :动脉解冻后弹性纤维结构基本完整 ,有轻度水肿和黏膜变性 ,动脉壁结构大致正常 ;体外培养葡萄糖消耗量平均大于 16mg·dL-1·2 4h-1;复温后材料有生长和代谢活性。结论 :表明同种动脉低温保存技术已经达到比较理想的要求 ,可为临床应用提供相关的实验依据。

同种生物瓣膜低温保存效果的评价

目的从功能代谢角度评价深低温保存生物瓣膜的实际效果,观察冷冻保存对同种带瓣膜动脉活性的影响。方法主动脉瓣膜取自空气栓塞处死的兔子,修剪后程控降温,液氮长期保存。复温后光镜检查,体外培养检测糖消耗量,同时采用组织块贴壁法进行原代细胞培养检测细胞生长活性。结果带瓣动脉解冻后弹性纤维结构基本完整,有轻度水肿和黏膜变性,动脉壁结构大致正常;体外培养葡萄糖消耗量平均为>16mmol/dl.d;复温后材料有生长和代谢活性。结论同种生物瓣膜低温保存技术较稳定较理想。