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高效液相色谱-串联质谱法结合稳定同位素标记肽段同时测定稻米及其制品中3种过敏蛋白质
被引量:
4
1
作者
杨欢
曹赵云
+1 位作者
马有宁
陈铭学
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第12期1314-1323,共10页
基于稳定同位素标记特征肽段和液相色谱-质谱联用仪建立稻米及制品中3种过敏蛋白质的同时定量方法。稻米及制品样品经盐溶液提取,赖氨酰基内切酶(Lys-C)和胰蛋白酶依次水解,C18-SD柱净化后,采用纳升高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道...
基于稳定同位素标记特征肽段和液相色谱-质谱联用仪建立稻米及制品中3种过敏蛋白质的同时定量方法。稻米及制品样品经盐溶液提取,赖氨酰基内切酶(Lys-C)和胰蛋白酶依次水解,C18-SD柱净化后,采用纳升高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱(NanoLC-LTQ-Orbitrap)采集和Protein Discovery软件鉴定,NCBI和Uniprot数据库的基本局部搜索比对工具(BLAST)筛选验证,最终获得表征稻米及制品中α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂类蛋白质(seed allergenic protein RAG2,RAG2)、乙二醛酶Ⅰ活性蛋白(glyoxalaseⅠ)和α-球蛋白(19 kDa globulin)3种过敏蛋白质的特异性肽段。3个特异性肽段经液相色谱梯度洗脱,在Poroshell色谱柱上实现完全分离,由三重四极杆质谱仪分析。实验通过优化多反应监测(MRM)质谱参数,比较不同溶剂体系、水解酶种类和酶量等酶解条件,结合内标法定量,实现对稻米及制品中3种蛋白质的绝对定量。实验结果表明,当酶解溶剂中含1 g/L十二烷基硫酸钠,采用Lys-C和胰蛋白酶组合消化策略,可有效提高3种蛋白质的酶切效率至65.7%~97.3%。该方法在1~200 nmol/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9972,3种蛋白质的检出限和定量限分别为3 mg/kg和10 mg/kg。3种蛋白质在空白稻米制品基质中3个水平下的加标回收率为80.6%~103.7%,日间和日内精密度均小于11.5%。该方法稳定性好,检测灵敏度高,操作简便,在分析各类稻米及制品中3种过敏蛋白质含量具有广泛的应用前景。
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关键词
液相色谱-串联质谱
特异性
肽
段
稳定同位素标记肽段
酶解条件
过敏蛋白质
稻米
下载PDF
职称材料
酶切型稳定同位素标记肽段为内标用于药物代谢酶的绝对定量分析
被引量:
6
2
作者
刘喜东
丛宇婷
+3 位作者
胡良海
张养军
顾景凯
钱小红
《分析化学》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期1551-1557,共7页
利用带有酶切位点的稳定同位素标记肽段作内标,采取3种方式处理样品,考察了不同的样品处理过程对实验结果准确性的影响。首先合成不同长度的带有酶切位点的肽段,考察其酶解过程,实验结果表明,胰蛋白酶的活性位点具有一定的选择性,最终...
利用带有酶切位点的稳定同位素标记肽段作内标,采取3种方式处理样品,考察了不同的样品处理过程对实验结果准确性的影响。首先合成不同长度的带有酶切位点的肽段,考察其酶解过程,实验结果表明,胰蛋白酶的活性位点具有一定的选择性,最终确定目标肽段两端分别加入3个氨基酸所形成的肽段为内标。分别采用在酶解前加入带酶切位点的稳定同位素标记肽段、不带酶切位点的稳定同位素标记肽段以及在酶解过程后、质谱检测前加入不带酶切位点的稳定同位素标记肽段3种方式处理样品。结果表明,采取第一种方式处理样品的测定结果更接近真实值,相对偏差范围更小,可减小蛋白质绝对定量分析的误差,提高分析结果的重现性。
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关键词
稳定同位素标记肽段
绝对定量
酶切位点
药物代谢酶
下载PDF
职称材料
题名
高效液相色谱-串联质谱法结合稳定同位素标记肽段同时测定稻米及其制品中3种过敏蛋白质
被引量:
4
1
作者
杨欢
曹赵云
马有宁
陈铭学
机构
农业农村部稻米及制品监督检验测试中心
江西农业大学
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第12期1314-1323,共10页
基金
稻米质量安全高通量检测技术研究(CPSIBRF-CNRRI-202128)
国家水稻产业技术体系(CARS-01-47)
中国农业科学院科技创新工程协同创新任务(CAAS-XTCX2019024).
文摘
基于稳定同位素标记特征肽段和液相色谱-质谱联用仪建立稻米及制品中3种过敏蛋白质的同时定量方法。稻米及制品样品经盐溶液提取,赖氨酰基内切酶(Lys-C)和胰蛋白酶依次水解,C18-SD柱净化后,采用纳升高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱(NanoLC-LTQ-Orbitrap)采集和Protein Discovery软件鉴定,NCBI和Uniprot数据库的基本局部搜索比对工具(BLAST)筛选验证,最终获得表征稻米及制品中α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂类蛋白质(seed allergenic protein RAG2,RAG2)、乙二醛酶Ⅰ活性蛋白(glyoxalaseⅠ)和α-球蛋白(19 kDa globulin)3种过敏蛋白质的特异性肽段。3个特异性肽段经液相色谱梯度洗脱,在Poroshell色谱柱上实现完全分离,由三重四极杆质谱仪分析。实验通过优化多反应监测(MRM)质谱参数,比较不同溶剂体系、水解酶种类和酶量等酶解条件,结合内标法定量,实现对稻米及制品中3种蛋白质的绝对定量。实验结果表明,当酶解溶剂中含1 g/L十二烷基硫酸钠,采用Lys-C和胰蛋白酶组合消化策略,可有效提高3种蛋白质的酶切效率至65.7%~97.3%。该方法在1~200 nmol/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.9972,3种蛋白质的检出限和定量限分别为3 mg/kg和10 mg/kg。3种蛋白质在空白稻米制品基质中3个水平下的加标回收率为80.6%~103.7%,日间和日内精密度均小于11.5%。该方法稳定性好,检测灵敏度高,操作简便,在分析各类稻米及制品中3种过敏蛋白质含量具有广泛的应用前景。
关键词
液相色谱-串联质谱
特异性
肽
段
稳定同位素标记肽段
酶解条件
过敏蛋白质
稻米
Keywords
liquid chromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS)
signature peptide
stable isotope-labeled peptide
digest condition
allergenic protein
rice
分类号
O658 [理学—分析化学]
下载PDF
职称材料
题名
酶切型稳定同位素标记肽段为内标用于药物代谢酶的绝对定量分析
被引量:
6
2
作者
刘喜东
丛宇婷
胡良海
张养军
顾景凯
钱小红
机构
吉林大学生命科学学院
蛋白质组学国家重点实验室
出处
《分析化学》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期1551-1557,共7页
基金
蛋白质组学国家重点实验室开放课题(SKLP-O201206)
国家自然科学基金(No.21105036
+2 种基金
81373374
81430087)
教育部"新世纪优秀人才支持计划"(NCET-12-0234)项目资助~~
文摘
利用带有酶切位点的稳定同位素标记肽段作内标,采取3种方式处理样品,考察了不同的样品处理过程对实验结果准确性的影响。首先合成不同长度的带有酶切位点的肽段,考察其酶解过程,实验结果表明,胰蛋白酶的活性位点具有一定的选择性,最终确定目标肽段两端分别加入3个氨基酸所形成的肽段为内标。分别采用在酶解前加入带酶切位点的稳定同位素标记肽段、不带酶切位点的稳定同位素标记肽段以及在酶解过程后、质谱检测前加入不带酶切位点的稳定同位素标记肽段3种方式处理样品。结果表明,采取第一种方式处理样品的测定结果更接近真实值,相对偏差范围更小,可减小蛋白质绝对定量分析的误差,提高分析结果的重现性。
关键词
稳定同位素标记肽段
绝对定量
酶切位点
药物代谢酶
Keywords
Stable isotope labeling peptide
Absolute quantitation
Cleavage site
Drug metabolizing enzymes
分类号
O629 [理学—有机化学]
TQ460.1 [化学工程—制药化工]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
高效液相色谱-串联质谱法结合稳定同位素标记肽段同时测定稻米及其制品中3种过敏蛋白质
杨欢
曹赵云
马有宁
陈铭学
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2021
4
下载PDF
职称材料
2
酶切型稳定同位素标记肽段为内标用于药物代谢酶的绝对定量分析
刘喜东
丛宇婷
胡良海
张养军
顾景凯
钱小红
《分析化学》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2015
6
下载PDF
职称材料
已选择
0
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