基于载体的RNA干扰介导人核受体hLRH-1表达稳定抑制肝癌细胞BEL-7402的基因表达谱分析(英文)

为建立一hLRH-1表达稳定抑制的细胞系,我们构建了hLRH-1基因靶向的稳定RNA干涉载体(pSineohLRH-1)并导入肝细胞癌细胞BEL-7402。通过半定量RT-PCR分析发现,携有pSineohLRH-1的BEL-7402细胞其hLRH-1基因mRNA的表达抑制率达60％。此外,微阵列法基因表达谱分析结果表明,与未干涉的对照细胞相比,包括一些肿瘤相关的基因如Gadd45β和PTEN在内的405个基因在hLRH-1基因表达稳定下调的BEL-7402细胞中呈明显的表达差异,意示hLRH-1具比已知更为广泛的生物学功能。尽管hLRH-1与这些差异表达基因的确切关系尚有待进一步的实验探究,我们的发现仍为hLRH-1在肿瘤发生发展中可能的作用机制的揭示提供了新的线索。

逆转录病毒载体介导的RNAi技术稳定抑制前列腺癌细胞株β-catenin的表达

目的:建立稳定抑制βcatenin基因表达的前列腺癌细胞株,为探讨Wnt/βcatenin信号在前列腺癌发生中的作用提供合适的细胞模型。方法:在βcatenin基因编码区选择3个RNAi作用的靶位点,体外合成前体DNA链,复性后连入逆转录病毒载体pSUPERretro,转染包装细胞PA317,收集含病毒颗粒的培养上清感染DU145细胞,经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到克隆,继续培养2个月形成稳定克隆。免疫印迹检测癌细胞内βcatenin及受其调控的靶基因cmyc和cyclinD1的表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测βcatenin基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖。结果:免疫印迹和RTPCR结果显示,筛选得到的2个克隆中细胞内βcatenin表达水平下降;且克隆内cmyc,cyclinD1基因的表达下调;MTT检测显示,βcatenin表达抑制的细胞克隆吸光度值下降,这表明克隆内细胞数量减少,细胞增殖受到了抑制。结论:成功建立稳定抑制βcatenin基因表达的前列腺癌细胞株。

球毛壳菌小麦秸秆发酵产物抑制辣椒疫霉的稳定性及机制

【目的】由辣椒疫霉(Phytophthora capsici)侵染引起的疫病给辣椒等作物产业带来了巨大的经济损失。论文旨在明确球毛壳菌(Chaetomium globosum)代谢产物抑制辣椒疫霉的稳定性和抑菌机制,为研究与开发辣椒疫霉的微生物源抑菌剂提供参考。【方法】将球毛壳菌发酵粗提物分别在不同温度(40—121℃)、pH(1—13)、光照时间(0—12 d)和储存时间(0—60 d)条件下进行处理,采用菌丝生长抑制法测定经不同处理后粗提物对辣椒疫霉的抑制率,以探究粗提物抑制辣椒疫霉的热、酸碱、光和时间稳定性。利用光学显微镜观察粗提物对辣椒疫霉菌丝形态的影响,通过多种生理生化试验探究粗提物作用于辣椒疫霉12—72 h后,对辣椒疫霉细胞壁、细胞膜、活性氧代谢、蛋白质含量、还原糖含量和致病力的影响。【结果】在所设置的处理范围内,球毛壳菌发酵粗提物(1 mg·mL^(-1))经不同光照时间和储存时间处理后对辣椒疫霉的抑制率没有显著降低,抑制率维持在93%左右;粗提物在40—70℃的热处理范围内对辣椒疫霉的抑制率没有显著降低,70℃以上的热处理会显著降低粗提物对辣椒疫霉的抑制率,但抑制率不低于70%;粗提物在pH 1—5和9—13的酸碱处理范围内会显著降低对辣椒疫霉的抑制率,但抑制率也不低于70%。粗提物处理影响辣椒疫霉菌丝形态,使菌丝发生严重的扭曲皱缩现象,并影响活性氧代谢,使菌丝中的活性氧大量积累。辣椒疫霉经粗提物处理12—72 h后,其培养液中的碱性磷酸酶活性、β-葡萄糖苷酶活性、核酸和蛋白质含量均显著升高,且其菌丝中的丙二醛和过氧化氢含量显著增加。辣椒疫霉菌丝中的过氧化氢酶活性、可溶性蛋白和还原糖含量则在粗提物处理12—72 h内显著降低,而超氧化物歧化酶、过氧化物酶、多聚半乳糖醛酸酶和β-葡萄糖苷酶活性则仅在一定时间显著降低。【结论】在本试验所设置的处理范围内,球毛壳菌的小麦秸秆发酵粗提物抑制辣椒疫霉的效果不受光照及储存时间的影响,但超过70℃的热处理和pH 1—5和9—13的酸碱处理会显著降低粗提物对辣椒疫霉的抑制效果。此外,该粗提物通过改变菌丝形态,破坏细胞壁和细胞膜,引发细胞内物质泄漏,降低菌丝中蛋白质和还原糖含量,抑制抗氧化酶活性,干扰活性氧代谢使活性氧大量积累从而抑制辣椒疫霉。

RNA干扰靶向抑制胃癌细胞株SGC7901 hTERT基因表达

背景与目的：胃癌是全人类常见恶性肿瘤之一。在我国，胃癌居各种癌症死亡之首，其总体五年生存率仅15％～20％。在目前尚无有效一级预防措施的情况下，积极探讨有效防治胃癌的方法成为必然趋势。本研究利用RNA干扰稳定筛选-抑制技术，抑制人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达，探讨靶向hTERT基因RNAi对胃癌细胞增殖的抑制效应。方法：设计靶向hTERT基因的小干扰RNA，构建重组表达质粒pGenesil—shRNA—hTERT并导入人胃癌细胞系SGC7901细胞株，经G418筛选，建立稳定表达siRNA—hTERT的细胞株。采用real time RT—PCR、MTT和PCR—TRAP法同时检测pGenesil-shRNA—hTERT稳定抑制组和未处理SGC7901细胞组hTERT基因表达、端粒酶活性及细胞增殖变化。结果：在稳定表达pGenesil—shRNA—hTERT的SGC7901细胞株中，RNAi效力持续、稳定存在，hTERT mRNA表达、端粒酶活性明显降低，瘤细胞增殖被抑制。结论：RNA干扰能持续、稳定地抑制靶基因hTERT mRNA表达及肿瘤细胞增殖，是潜在的肿瘤基因治疗新方法。

RNA干扰抑制肝癌QGY细胞株hTERT基因表达的研究

目的利用RNA干扰稳定筛选-抑制技术,抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达,探讨靶向hTERT基因RNAi对肝癌细胞增殖的抑制效应。方法设计靶向hTERT基因的小干扰RNA,构建重组表达质粒pGenesil-shRNA-hTERT并导入人肝癌细胞系QGY细胞株,经G418筛选,建立稳定表达siRNA-hTERT的细胞株。采用real time RT-PCR、MTT和PCR-TRAP法同时检测pGenesil-shRNA-hTERT稳定抑制组和未处理QGY细胞组hTERT基因表达、端粒酶活性及细胞增殖变化。结果在稳定表达pGenesil-shRNA-hTERT的QGY细胞株中,RNAi效力持续、稳定存在,hTERT的mRNA表达、端粒酶活性明显降低,瘤细胞增殖被抑制。结论RNA干扰能持续、稳定地抑制靶基因hTERT的mRNA表达及肿瘤细胞增殖,是潜在的肿瘤基因治疗新方法。

儿童2～7岁行为抑制性的发展

采用实验室录像观察对中国儿童的行为抑制性的发展进行了追踪研究（2岁、4岁、7岁）。儿童2岁时，有124名儿童参加了实验室观察。儿童4岁时，由于搬迁、退出或失约，有103名儿童参加。儿童7岁时由于以上原因有100名儿童参加实验室观察。在2岁、4岁、7岁至少参加一次观察的儿童有113名，而在三个时间点都参加观察的儿童有89名。我们对儿童2～7岁行为抑制性整体发展的稳定性以及行为抑制性和非抑制性的发展趋向进行了分析。结果表明，中国儿童从2岁到7岁的行为抑制性的整体发展稳定性较低。从2岁到7岁，行为抑制性-非抑制倾向比较稳定的儿童共28人，占总人数的31．5％。而行为抑制性-非抑制性不稳定的儿童为61人，占总人数的68．5％。随着年龄增长，本研究中的儿童的行为抑制性-非抑制性倾向有向中间型趋中的趋势。从2岁到7岁，行为抑制性的发展变化没有显著性别差异。

局域共振薄膜结构的管腔热声耦合振荡抑制研究

针对不稳定热释放与声场耦合而产生的热声振荡现象,严重影响燃烧系统的稳定性和振动噪声水平的问题,本文提出一种有效的热声耦合振荡抑制策略。本文基于能量原理和声压连续条件建立了周期分布局域共振薄膜结构-管腔-火焰耦合模型,研究了薄膜结构对管腔热声耦合系统热、声模态稳定性的抑制作用,并揭示了周期结构声学带隙对系统模态稳定性的影响规律。结果表明:薄膜结构可实现管腔耦合系统的多模态不稳定性抑制,尤其对声模态特征有显著的干涉作用。此外,可以发现热声耦合系统特征根分布受声学带隙影响较大,部分模态急剧向低频偏移,且所研究频段范围内模态稳定性均得到了改善,充分说明了本文所提出周期性局域共振薄膜在热声耦合不稳定性抑制方面的有效性。

新颖的可控谐振阻尼LC输出滤波器

提出并研究了一种新颖的具有抑制振荡功能的可控谐振阻尼LC输出滤波器。该输出滤波器具有电路结构简洁、易实现、振荡抑制效果明显、损耗低等优点。

纳税主体结构如何影响经济稳增长?

当经济处于增速放缓的稳增长时期,不同的纳税主体结构会对经济稳增长表现产生异质性影响。从纳税主体结构和经济稳增长的全新视角,利用28个OECD国家1990-2015年数据进行实证分析,结果表明:一国企业纳税占比越高,在这一时期跨越经济减缓拐点的可能性就越小。进一步进行作用机制检验发现,相比于“投资抑制效应”和“创新抑制效应”,“自动稳定器抑制效应”是企业纳税占比和经济稳增长负相关关系的主要作用渠道。

MIF与冠心病心绞痛类型相关性分析

目的通过检测血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF),探讨冠心病患者不同类型心绞痛及冠脉病变程度与MIF的相关性。方法根据冠脉造影结果,将115例住院患者分为对照组53例和冠心病组62例。冠心病组按Braunwald分类方法,根据临床表现分为稳定型心绞痛组(SAP)10例和不稳定型心绞痛组(UAP)52例,根据Gensini积分法对冠心病患者冠状动脉狭窄程度进行定量评估,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组血清MIF浓度。结果冠心病组(65.94μg/L)MIF水平明显高于对照组(48.08μg/L)。在冠心病组中,UAP组血清MIF浓度明显高于SAP组,同时SAP组和UAP组血清MIF浓度均高于对照组(65.94μg/L vs 48.08μg/L,P<0.05)。不同冠脉病变程度之间血清MIF浓度无统计学差异。结论血清MIF浓度的增高可能与冠心病的发生发展相关,同时MIF水平的高低可以反映冠脉粥样斑块的稳定性,为冠心病的诊断及干预治疗提供依据,但冠脉狭窄程度与血清MIF浓度无明显相关性,不能用于预测冠脉病变情况。

坎地沙坦可减少支架内再狭窄率

日本研究者报道，坎地沙坦(candesartan cikxetil)(Ⅰ)可明显抑制稳定性心绞痛患者冠状动脉支架置人后新生内膜的形成。