稻恶苗菌异核体3种核型核DNA指纹分析

异核现象在丝状真菌.尤其是半知菌及某些子囊菌中非常普遍,是一些病原真菌经常变异,造成作物抗病性退化的重要原因.60年代,俞大绂教授证明稻恶苗病菌(Fusariummoniliforme有性为Cibberella fujikuroi)在自然状态下普遍存在异核现象.不同核型的菌株不仅在色素、菌落形态和孢子形成方面存在明显差异,而且赤霉素产量及致病性也显著不同.为从分子水平上深入探讨稻恶苗菌异核体3种核型分离在DNA水平上的异同,作者曾利用80种引物对稻恶苗菌异核体3种核型DNA进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,结果表明.异核体3种核型核DNA高度相似.为进一步探讨稻恶苗菌异核体3种核型核DNA的异同,利用3种探针(33.6,M13和pGTG_4)与2种限制性内切酶(Hind Ⅲ和PstⅠ)6种组合杂交,进行DNA指纹分析,结果3种核型的DNA指纹图谱相同.这一结果与RAPD分析的结果一致,说明水稻恶苗菌异核体3种核型的核DNA高度同源.

用原生质体融合法获得稻恶苗菌异核体

用紫外线照射稻恶苗菌(Glbberella fujikuroi)野生型分生孢子9～12 min,存活率为0.6%～23%,得到单标记营养缺陷型突变菌株5株。选出1144(ade^-)、1184(arg^-)和1175(try^-)3株,用亚硝基胍诱变处理,得到双重标记的营养缺陷型突变菌8株。将11442(ade^-,pba^-)和11844(arg^-,try^-)两菌株用原生质体融合技术使它们形成异核体。用2%蜗牛酶加2%纤维素酶以0.6mol/L NaCl 液作渗透压稳定剂制成混合酶液,裂解幼嫩菌丝1.5～3 h,获得2×10'个/g 菌丝的原生质体。经35%PEG 融合剂将等量原生质体融合,获得异核菌落230个。经过进行排除营养互养的实验;对4株异核体菌株进行子代分离的遗传学分析;发现其两种核型的比例在1:1.4～1:8.5之间;对4株异核体还进行酯酶同功酶的测定。证明这4株菌株是异核体。

稻恶苗菌异核体三种核型核DNA的RAPD分析

利用RAPD技术,对稻恶苗菌TJ47-26异核体的紫、红、白三种核型(同核体)核DNA进行比较,用80种10bp长的随机引物进行DNA扩增,共检测了基因组中近400个位点,未发现三种核型的基因组间有明显差异,表明紫、红、白三种核型的DNA碱基序列高度相似。由此推测TJ47-26异核体的三种不同核型是来自同一个核的变异体。